国产避孕疫苗研究现状和前景

国产第 1代避孕疫苗已经研制成功。疫苗构建是采用妊娠特异性强、妊娠期短暂出现的糖蛋白激素———人类绒毛膜促性腺激素 (humanchorionicgonadotropichormone,hCG)为靶抗原 ,应用蛋白质工程技术研制的。抗原不但保留了hCG的生物活性 ,而且不与垂体的其他 3种激素交叉 ,并克服了“自身免疫耐受性” ,使免疫系统对它作为“非自身”而产生抗体反应。以此构建的第 1代避孕疫苗原型 ,经临床前非人灵长类的免疫原性、安全性和毒理学试验达到预期效果后 ,参照世界卫生组织人类生殖特别规划委员会避孕疫苗任务组指导委员会制订的第 1期临床试验方案 ,两位主要研究工作者和 10位输卵管结扎妇女志愿者接受了免疫注射 ,在严密的监护下完成了国产第 1代避孕疫苗的第 1期临床预初试验 ,结果证明疫苗在人体可诱发抗体反应 ,免疫反应有可逆性和记忆。受试者无任何毒副反应 ,月经周期正常 ,排卵不受影响。第 2代新型避孕疫苗的研究 ,将在第 1代原型的基础上 ,通过基因和蛋白质工程技术 ,解决抗原的大量生产、挖掘内在的决定簇 ,或引入外源性生殖活性抗原 ,构建多特异性多功能复合免疫原 ,发展复合避孕疫苗 ,这些都将是十分有吸引力的研究领域。

中国鲎甲壳素的制备及其性能研究

研究了在中国鲎壳中分离出甲壳素 ,得出最佳工艺条件为 :先用 1mol/L盐酸浸泡鲎壳 ,水洗至中性后用 2mol/L的氢氧化钠溶液浸泡 ,再用 1mol/L的盐酸浸泡 ,最后在 80℃下与 2mol/L的氢氧化钠溶液反应 3h ,产率为 3 0 %。用红外光谱和X 衍射对产物进行了表征。

冷冻保存对人类精子膜完整性的影响

本文建立“低渗肿胀-伊红”（HOS－EY）结合试验探讨冷冻保存对人类精子头部和尾部膜完整性的影响。HOS－EY试验按照精子尾部肿胀与否和头部着色与否区分为4种膜类型。冷冻保存后，头膜一尾膜均完整的Ⅳ型精子率和头膜一尾膜均损伤的Ⅰ型精子率分别显著减少和增多（n＝50，P＜0．001），表明冷冻一解冻过程对精子膜完整性有严重影响；头膜损伤-尾膜完整的Ⅲ型精子率在冷冻组显著增多，提示精子头部或尾部的冷冻损伤是独立发生的，头膜损伤易于尾膜；头膜完整-尾膜损伤的Ⅱ型精子在冷冻组的发生率低；冷冻精子Ⅳ型精子率与冷冻精子活动率呈显著正相关（n＝50，r＝0．70，P＜0.001）,但与冷冻精子空卵率不呈相关性（n＝25，r=0。22，P＞0.05）。

中国鲎甲壳素的制备及其性能研究

研究了在中国鲎壳中分离出甲壳素 ,得出最佳工艺条件为 :先用 1 mol/L盐酸浸泡鲎壳 ,水洗至中性后用 2 mol/L的氢氧化钠溶液浸泡 ,再用 1 mol/L的盐酸浸泡 ,最后在 80°C下与 2 mol/L的氢氧化钠溶液反应 3h;产率为 30 %。用红外光谱和 X-衍射对产物进行了表征。

人类精液一步冷冻法的研究

本文应用聚丙烯1ml注射器作冻贮容器实验人类精液的一步冷冻法。结果表明,正常生育力组(n=45)和不育症组(n=50)的精子冷冻复苏率分别为69.4±9.7%、58.0±14.7%;一步冷冻组与程控仪冷冻组(n=14)的冷冻精子活率比较、与未经冷冻组(n=10)的去透明带地鼠卵穿透试验比较没有显著性差异(P>0.05);冻后精子体外能存活较长时间;37℃水浴解冻有利于精子存活。提示一步冷冻人类精液可获得良好的冷冻效果。

国产第一代β-hCG避孕疫苗免疫恒河猴的抗体反应及免疫安全性研究

用国产第一代ｈＣＧ避孕疫苗（以β－ｈＣＧ－ＴＴ为免疫原制备的氢氧化铝吸附制剂）免疫成年雌性恒河猴，评价疫苗在实验猴体内诱发抗ｈＣＧ抗体的能力和免疫安全性．结果显示疫苗能在实验猴诱发抗ｈＣＧ抗体，但抗体滴度较低（峰滴度为１４０００），持续时间较短，加入Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ佐剂免疫能显著增强动物的抗体反应（峰滴度可达１６４０００），免疫猴对强化免疫有较好的记忆反应．免疫前后各免疫猴血液红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数、白细胞分类计数均未见异常，血清谷丙转氨酶、总蛋白、白蛋白等肝脏功能指标也未见异常．免疫猴心、肝、肾、脾、胰腺、腺垂体、卵巢、子宫等器官未发现组织病理学改变．．

精子膜低渗肿胀试验在人类冷冻精子的应用评价

应用精子膜低渗肿胀试验,对冷冻精子膜功能完整性进行检测和对冷冻精子的膜低渗肿胀率与活率、存活时间、去透明带地鼠卵穿透率进行了相关性分析。结果表明,冷冻后精子膜低渗肿胀率显著低于未经冷冻组(n=50,P<0.01);冷冻精子膜低渗肿胀率与活率(n=50,r=0.85)、体外存活时间(n=23,r=0.88)呈非常显著正相关,而与去透明带地鼠卵穿透率(n=18,r=0.11)没有显示相关。

无卵黄型人类精液冷冻保护剂试验与临床初步应用

不含卵黄的“改良 Tyrode’s液—甘油”型冷冻保护剂(简称 T—G 保护剂)与含卵黄的“甘油—卵黄—柠檬酸钠”型冷冻保护剂的试验比较表明,两者的精子复苏率、膜低渗肿胀率、Kremer’s 精子宫颈粘液穿透试验、去透明带地鼠卵穿透试验没有显著性差异(P>0.05);T-G 保护剂的甘油浓度分别为15%、10%,6%时,精子复苏率没有显著性差异(P>0.05);应用 T-G 保护剂冷冻保护的精液,人工授精已使1名丈夫无精子症的妇女受孕,并足月分娩1男婴,生长发育正常,提示 T-G 保护剂能有效地保护精子的受精能力。此外,对“TES-Tris-甘油-卵黄”型冷冻保护剂去除卵黄后的效果观察,精子的复苏率显著低于对照组(P<0.01)。

人类精液两种冷冻方法的比较研究

对采用程控生物冷冻仪控制冷冻速率冷冻精液的方法,与人工操作逐步降溫冷冻方法进行实验比较,结果表明,两种方法冷冻人类精液后的3组精子复苏率(正常生育力组n=18,精液常规参数正常范围的不育症组n=28,异常精液组n=12);Kremer's精子宫颈粘液穿透试验(n=13);去透明带地鼠卵穿透试验(n=11)没有显著性差异(P>0.05)。在3组实验精液中,以正常生育力组复苏率最高,异常精液组最低。

金黄地鼠卵母细胞4℃保存的研究

去透明带地鼠卵穿透试验（ＨＯＰＴ）是评价人精子受精能力的有效模型。本文探讨４℃冷保存金黄地鼠卵母细胞的可穿透性。结果表明，与对照组的穿透率（４３．９４±３０．０５％）比较，冷保存２４小时卵子的穿透率（４１．４９±２５．９６％）没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），冷保存４８小时卵子的穿透率（２４．２５±１７．１８％）显著下降（Ｐ＜０．０１）；冷保存４８小时３２％的卵子呈现多种老化现象；去除卵透明带后不利于冷保存。提示４℃保存２４小时的卵子可应用于ＨＯＰＴ。

稀土氧化物对小鼠胚胎体外发育和胚胎移植影响的初步研究

将稀土氧化物加入人胚胎常用体外培养液 Ham'sF-10中,对2细胞小鼠胚胎进行体外培养。发现稀土氧化物浓度为50～100ppm 时,胚胎发育速度及发育率明显高于 Ham'sF-10对照组,且发育加快现象在培养的24小时内己出现,浓度200ppm以上时,促生长效应逐渐减弱;800ppm 以上时,胚胎发育受抑制也在24小时内出现。将在 Ham'sF-10和含50ppm 稀土氧化物的 Ham'sF-10培养液中培养72小时后发育的囊胚分别移植入两组各9只受体母鼠,两组的受体产仔率没有显著性差别,仔鼠未见畸形或生长异常。

先天性双侧输精管缺如患者的睾丸生殖病理学及睾丸精子观察

对先天性双侧输精管缺如不育患者，采用睾丸活检组织观察睾丸组织生殖病理学（n=18）及其睾丸精子（n＝8）特征。结果显示这类患者宰丸曲细精管界膜呈现不同程度的病理改变。大部分标本的曲细精管扩张，生精上皮变薄、剥落。精子发生障碍以轻、中度为主。间质无明显病变。睾丸组织切片（n＝18）见曲细精管腔内有精子，睾丸活检组织（n＝8）可分离出精子，睾丸精子可呈微弱运动，精于畸形率高。

人类绒毛膜促性腺激素避孕疫苗的毒理学和免疫安全性研究

3种hCG疫苗(A.β-hCG二聚体、B.β-hCG CT 37肽TT偶合物、C.酶切β-hCG肽段)免疫雌性恒河猴进行毒理学和免疫安全性研究。血液分析结果表明,免疫前后动物血液红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数、红细胞沉降速度等血液指标和血清麝香草酚浊度、硫酸锌浊度、黄疸指数等肝功能指标没有显著的差异(P>0.01),免疫后血清谷丙转氨酶虽比免疫前低(P<0.05),但没有临床意义。免疫后血液淋巴细胞水平显著高于免疫前(P<0.01)。组织病理学观察显示除对注射部位肌肉有明显刺激外,3种疫苗免疫对心、肝、肾、睥、胰腺、子宫、卵巢、垂体等器官无特异的组织损伤。免疫荧光分析结果表明抗血清不与猴心、肝、肾、脾、胰腺、子宫、卵巢、垂体和肌肉等组织交叉反应。电镜观察未见疫苗免疫引起肾小球基膜的损害。

人LAK细胞的诱导及其体外抗肿瘤作用

采用IL－2或IL－2＋PHA－P对人外周血单核细胞进行体外淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK、LI－LAK细胞）的诱导及对其体外抗肿瘤细胞活性进行研究，结果显示：300～500IU／mL．IL－2＋5μg／mLPHA－P，孵育时间8～10d为最适的诱导条件，最高可诱导细胞增殖100倍以上。诱导出的LAK及LI－LAK细胞对数种自然杀伤细胞（NK）敏感或不敏感的瘤细胞均有明显杀伤作用。实验还显示，PHA－P的主要作用可能是促进细胞扩增，而非肿瘤杀伤活性的诱导。

人LAK及LI-LAK细胞对S_(180)荷瘤小鼠的治疗作用

用LAK和LI－LAK两种细胞进行S180荷瘤小鼠体内抗肿瘤试验。结果表明，人LAK细胞及LI－LAK细胞有明显的体内抗S180肉瘤作用，S180荷瘤鼠存活期显著延长，其平均存活时间分别为45．3和49．6d，且部分可完全治愈；而未用药的对照组鼠只平均存活21.1d，仅用IL－2治疗的荷瘤鼠平均存活时间为35．9d。同时可知，两实验组中两种细胞作用程度相差不大（P＞0．05）。