红景天苷通过IL-17A抑制TRAF6/NLRP3信号通路改善Müller细胞的功能

目的探讨红景天苷(salidroside,SAL)对高糖培养的视网膜Müller细胞异常激活的保护作用及其机制。方法采用含10%胎牛血清,1%青-链霉素的DME/F12(1∶1)培养基培养Müller细胞。培养条件为37℃,5%CO_(2)。用25、50、75、100、150 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度培养Müller细胞,根据CCK-8实验考察细胞活力确定75 mmol·L^(-1)葡萄糖为最佳浓度。实验分为对照组、HG组、HG+SAL组、HG+IL-17A组、HG+SAL+IL-17A组和HG+IL-17A+siRNA-TRAF6组共6组。通过ELISA检测Müller细胞表达IL-17A水平,通过ROS检测试剂盒检查细胞内ROS水平,MDA检测试剂盒检测细胞内MDA含量,SOD检测试剂盒检测SOD活力。细胞免疫荧光实验检测IL-17A和IL-17RA在细胞内的定位表达情况。Western blotting检测IL-17A、IL-17RA、TRAF6、NLRP3、GFAP、VEGF的蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组Müller细胞表达IL-17A水平明显升高,ROS和MDA含量显著升高,SOD酶活力明显降低,IL-17A、IL-17RA、TRAF6、NLRP3、GFAP、VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。给予SAL后,与HG组相比,Müller细胞表达IL-17A水平显著下降,ROS和MDA含量显著降低,SOD酶活力明显升高,IL-17A、IL-17RA、TRAF6、NLRP3、GFAP、VEGF蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。当给予IL-17A活性分子刺激后,相应指标又继续升高(P<0.05),Müller细胞表现异常激活状态。通过细胞免疫荧光实验表明IL-17A和IL-17RA定位表达在细胞质和细胞膜上。结论SAL能改善高糖培养的Müller细胞功能,其可能的机制是通过下调IL-17A表达,进而抑制TRAF6/NLRP3信号通路。