结直肠侧向发育型肿瘤内镜诊断与治疗

目的探讨结直肠侧向发育型肿瘤(LST)内镜诊断方法,经内镜黏膜切除术(EMR)、分片切除术(EPMR)、内镜黏膜下剥离术(ESD)方法治疗LST的疗效、安全性。方法 LST经色素染色放大内镜或NBI-ME观察病变形态、腺管开口分型(pit)及表面微血管分型(MP),分别进行EMR、EPMR、ESD或外科手术治疗,并分析LST的病理特点。结果在399例病人检出有LST,共407个病变。LST大小在10～80mm。LST部位在直肠128个(31.4%),乙状结肠97个(23.8%),降结肠54个(13.3%),横结肠67个(16.5%),升结肠21个(5.2%),盲肠36个(8.8%),回肠末段4例(1.0%)。LST形态呈颗粒均一型145个,结节混合型161个,扁平隆起型63个,假凹陷型38个。LST腺管开口分型以ⅢL和Ⅳ为多。405个LST经肠镜微创电切治疗,228个行EMR切除,165个行EPMR切除,12个行ESD切除,均在内镜下成功电切,另2例LST行外科手术治疗。出血发生率4.0%,术中即刻出血4例,术后3天迟发出血12例,无肠穿孔发生。LST病理结果:管状腺瘤46个(11.3%),管状绒毛状腺瘤146个(35.9%),绒毛状腺瘤181个(44.5%),增生性息肉10个(2.5%),高级别上皮内瘤变19个(4.7%),黏膜内癌3个(0.7%),黏膜下癌2个(0.4%)。术后复查肠镜无复发。结论色素染色放大内镜或NBI-ME方法有利于检出LST,EMR、EPMR、ESD是内镜下治疗LST安全有效的方法。

经内镜微创电切治疗122例结直肠巨大息肉

目的探讨内镜下治疗结直肠巨大息肉的方法及其安全性和有效性。方法对122例直径≥3 cm的结直肠巨大息肉患者,在黏膜下注射肾上腺素的基础上,依据息肉大小及形态、有无蒂及蒂的粗细,辅助钛夹、尼龙绳圈,内镜下选择合适的治疗方法,如电凝电切、黏膜切除术、分片黏膜切除术,采取一步电切法或多步电切法进行治疗。结果 122例患者共127个巨大息肉,123个巨大息肉均在内镜下成功完整切除,3个注射后单纯结扎,1个电切后病理发现为浸润癌转外科手术。有4例术后并发出血,出血发生率3.3%,3例为迟发出血,1例为术后大出血,经内科保守治疗和镜下治疗止血成功。均未发生穿孔并发症。随访无复发,电切成功率99.2%。结论经内镜微创电切除治疗结直肠巨大息肉是一种安全、有效的方法。

干扰素诱导的跨膜蛋白-1对诊断结直肠癌的临床价值

目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义。方法应用半定量RT-PCR方法检测IFITM1基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌、食管癌和肝癌组织中的表达。采用Western印迹法检测患者血清抗IFITM1的抗体反应。分析有IFITM1基因表达癌肿的病理特点。结果结直肠癌组织中IFITM1基因mRNA表达率为47.4%(18/38),显著高于大肠腺瘤性息肉的15%(3/20)和胃癌组织的4.8%(1/21)(P<0.05),而正常大肠粘膜、大肠炎性息肉、食管癌和肝癌组织均无表达。结直肠癌组织IFITM1基因mRNA呈强表达,其表达水平(0.8048±0.2273)显著高于大肠腺瘤性息肉(0.4447±0.0989)(P<0.001)。结直肠癌血清相应的抗体反应率为36.8%(14/38),明显高于胃癌的9.5%(2/21)(P<0.05),而在食管癌、肝癌、大肠炎性息肉和大肠腺瘤性息肉以及健康人血清则未检测出相应的抗体反应。有IFITM1基因表达的结直肠癌多数直径大于5cm,侵及浆膜,有淋巴结和远处转移,多属DukesC期和D期,以高分化腺癌为主。结论IFITM1基因可能在结直肠癌的发生、发展和转移过程中起重要作用,有望成为临床诊断结直肠癌的一个良好标志物。

大肠癌抗原基因的筛选与初步分析

目的筛选鉴定大肠癌抗原基因,并进行生物信息学的初步分析。方法采用自体或异体大肠癌患者血清,应用 SEREX方法对大肠癌cDNA噬菌体表达文库进行免疫筛选。阳性克隆噬菌体在扩增、提取、纯化DNA后,用PCR方法和EcoR Ⅰ、HindⅢ双酶切鉴定cDNA片段的大小。阳性克隆cDNA捕入pUCm-T载体测序。序列生物信息学分析采用NCBI的All GenBank+EMBL+DDBJ+PDB Sequences Database进行BLAST基因比对分析。结果筛选出11个阳性克隆,cDNA片段大小分别为1100、1300、1000、2000、1200、1200、700、900、600、1200和1000 bp,代表9个抗原基因,7 个与已知基因同源。有3个阳性克隆为同1个基因片段,与干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因同源,具有抗增殖作用;另6 个阳性克隆分别与不同的基因同源,分别是:BAC clone RP11-453E17“肿瘤解剖计划”基因,功能尚不清楚;软骨-毛发发育不良区基因,发生软骨-毛发发育不良综合征;人5号染色体克隆的序列,有插入突变,功能尚不清楚;类似抗肿瘤坏死因子α抗体的轻链Fab段基因,与IgGl抗体的γ链(重链)和κ链(轻链)的编码和调控其生物功能有关,可能与肿瘤的生长有关;B2微球蛋白的mRNA,与肿瘤细胞的增殖有关;醛缩酶A基因,异常表达可能促进肿瘤细胞的增殖; 尚有2个阳性克隆的cDNA序列没有同源性,功能有待进一步研究。结论用SEREX方法筛选大肠癌cDNA表达文库,可直接获得有价值的大肠癌抗原基因,对大肠癌发病机制的研究以及探讨早期诊断方法有重要意义。

人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定

目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库.转化E.coli XL1-B1ue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用Sfi Ⅰ酶切鉴定插入的cDNA片段大小.结果构建成含2.39×106pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600～4000bp,平均长约1400bp.结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因.

NBI-ME对病变表面微血管分型在诊断结直肠早期肿瘤中的意义

目的通过窄带成像放大内镜技术(NBI-ME)对结直肠病变表面微血管形态进行观察分型,研究NBI-ME对检出早期结直肠肿瘤性病变的价值。方法肠镜检查发现新生性病变后,用NBI-ME模式观察病变表面微血管形态并进行分型,所有病变均在内镜下切除或手术切除,将NBI-ME判断病变的性质与病理诊断结果比较。结果 NBI-ME在2115例患者中发现新生性病变2778个,MP-0型诊断为炎性息肉的准确率为97.4%,MP-Ⅰ型诊断为增生性息肉的准确率为93.3%,MP-Ⅱ型诊断为管状腺瘤准确率为97.2%,MP-Ⅲ型诊断为绒毛状腺瘤准确率为98.3%,MP-Ⅳ型诊断为绒毛状-管状腺瘤准确率为94.5%,MP-Ⅴ型诊断为高级别上皮内瘤变准确率为96.9%,MP-Ⅵ型诊断为黏膜内癌准确率为90.9%,MP-Ⅶ型诊断为浸润癌准确率为88.0%,MP-Ⅷ型诊断为进展期癌准确率为100.0%。NBI-ME对病变表面微血管形态判断肿瘤性病变的准确性为98.8%,敏感度为99.2%,特异性为94.9%。结论 NBI-ME内镜技术病变表面微血管形态分型,对判断病变是否是肿瘤性病变的准确率高,对早期结直肠肿瘤或结直肠癌的病理诊断预测准确率高,NBI-ME将成为发现结直肠早期肿瘤的更有效的内镜检查方法。

早期结直肠癌内镜治疗效果、安全性及长期随访

目的探讨早期结直肠癌在内镜下微创治疗的效果、安全性及长期疗效。方法对76例患者的82个早期结直肠癌病变进行了肠镜微创治疗,对病变的内镜下特点、病理特征、临床疗效和安全性进行分析与评估,并连续随访5年,观察内镜治疗的长期效果。结果病变部位以直肠、乙状结肠为最多,占总数的75.6%,在左半结直肠占总数的89.0%。病变大小以1.1~2.0 cm为最多,占总数的47.5%。肠镜下病变形态以隆起型最多,占总数的57.3%。分别用高频电凝电切、EMR、EPMR、ESD、双镜联合方式电切治疗,全部完整切除,内镜下治疗的癌灶一次性完全切除率达100%。病理特点:82个病变中,有78个是在绒毛状-管状腺廇基础上发生恶变,绒毛状-管状腺廇的癌变率为95.1%。高级别上皮内瘤变62个,黏膜内癌12个,黏膜下癌8个,其中高分化腺癌4个,中分化腺癌14个,低分化腺癌1个,黏液腺癌1个。内镜下治疗的并发症:出血发生率为6.5%,内镜下止血或保守治疗可止血,未发生穿孔。远期疗效:连续随访5年,复查肠镜,创面愈合,全部病例均无复发及转移情况,存活率达100%。结论早期结直肠癌行内镜下微创治疗效果好,损伤小,安全性好,远期疗效好。

干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因的扩增、克隆及蛋白表达

目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-inducibletransmembraneprotein-1,IFITMP-1)基因的扩增、克隆及蛋白表达。方法以含IFITMP-1基因的cDNA为模板,用Pfu酶做PCR扩增,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将目的基因克隆到pUCm-T质粒测序。进一步克隆到pET-Trx蛋白表达载体质粒,优化蛋白表达条件。结果含有IFITMP-1基因的PCR产物约1000bp。重组pUCm-T质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,有相应大小的cDNA片段插入,测序结果显示其序列正确,证实目的基因的扩增、克隆成功,并成功克隆进pET-Trx蛋白表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)plysS中有融合蛋白表达。结论成功扩增克隆IFITMP-1基因,并成功表达该基因编码的蛋白,为进一步研究IFITMP-1基因在大肠癌中的作用奠定了基础。

人源性大肠癌抗原基因的SEREX筛选

目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的大小.结果:构建成3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,滴度分别为2.39×106nfu/L,2.07×106nfu/L和1.86×106nfu/L,插入片段长度为0.5-4kb,平均分别为1.4kb,1.6kb和1.3kb.筛选发现4个阳性克隆,插入cDNA片段大小分别为2.4 kb,1.8 kb,2.3 kb和2.2 kb.结论:用SEREX方法筛选大肠癌抗原cDNA表达文库,可获得有价值的大肠癌的重组抗原基因克隆,将有利于大肠癌的早期诊断和重组疫苗的研究.

NBI-ME内镜技术在结直肠早期肿瘤诊治中的价值

目的通过窄带成像放大内镜技术(NBI-ME)对结直肠病变进行观察,研究NBI-ME内镜技术对发现结直肠新生性病变的优势,以及对结直肠肿瘤性病变判断的精准度。方法 680例患者进行了完整普通肠镜、NBI-ME、色素内镜检查。对新生性病变分别用普通光镜、NBI-ME模式及色素放大方法观察病变表面结构,记录微血管形态(MP)和腺管开口分型(pit),对病变性质的判断结果与病理诊断比较。结果 NBI-ME在385例患者发现新生性病变513个,而普通光镜只检出其中的74.1%(380/513),有显著统计学差异(P<0.01)。色素内镜能检出86.0%(441/513),也有显著统计学差异(P<0.05)。普通光镜漏检主要为微小病变及平坦型病变。NBI-ME对判断病变肿瘤性或非肿瘤性准确率为94.2%,敏感性90.2%,特异性95.3%,显著高于普通光镜和色素内镜(P<0.001)。结论 NBI-ME内镜技术有利于发现微小病变和平坦型病变,能清晰观察病变表面pit形态结构、微血管形态,对判断病变肿瘤性或非肿瘤的准确率明显比普通内镜和色素内镜高,检查操作时转换模式方便,NBI-ME将成为发现结直肠新生性病变和鉴别是否肿瘤性的更有效的内镜检查方法。

IFITM1克隆测序及生物信息学分析

目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因（interferon induced transmembrane protein 1．IFITM1）克隆、测序，对序列进行分析，并获取生物学信息。方法以IFITM1的cDNA为模板，用Pfu酶做PCR扩增，在EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后，将IF—ITM1的cDNA片段克隆到pUCm—T质粒，对重组的pUCm—T-IFITM1测序后，采用All GenBank＋EMBL＋DDBJ＋PDBSe—quences Database和Simple Modular Architecture Research Tool（SMART）对IFITM1的eDNA进行生物信息学分析。结果扩增后，含有IFITM1基因eDNA的PCR产物约1000bp，IFITM1的eDNA成功克隆到pUCm—T质粒并进行测序。序列分析结果显示，IFITM1结构cDNA全长683bp，有2个外显子。IFITM1的mRNA编码的氨基酸在37～57和87～107有2个跨膜区，编码125个氨基酸的多肽，其蛋白相对分子质量为14kDa。结论，IFITM1基因的成功扩增、克隆、测序，获取了IFITM1基因的eDNA、mRNA以及编码蛋白质氨基酸的生物学信息，有利于研究IFITM1基因与大肠癌的关系。

人源性大肠癌cDNA噬菌体库的构建及PCR鉴定

为构建人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库 ,从人大肠癌组织中提取总RNA ,纯化mRNA ,用RT PCR反转录合成cDNA第一链 ,用LD PCR合成cDNA第二链 ,除去小于 5 0 0bp的小片段 ,与λTriplEx2噬菌体连接 ,体外包装。转化E .coliXL1 blue大肠杆菌 ,滴定文库的滴度 ,用IPTG和X gal测定重组率。用PCR鉴定插入cDNA片段大小。构建成含 2 .0 7× 10 6 pfu/ml重组子的人大肠癌cDNA噬菌体表达文库 ,重组率为 94.5 % ,插入外源cDNA片段大小从 60 0bp～ 4kb ,平均约 1.4kb。文库合符要求 。

血液灌流对抗癌药物肝血管内注射作用的影响:与阿霉素注射剂量的关系

本研究采用DAC-树脂同步作吸附剂血灌流(DHP)2小时与对照柱灌流相比能明显降低Wistar大鼠门静脉输注ADM5 mg/kg对心肌组织中ADM的浓度,由9.8±1.8降至6.0±1.7μg/g(P<0.005)在10mg/kg时由46.3±4.2降到35.6±3.8μg/g(P<0.005);能明显降低心肌组织中MDA含量,由0.7129±0.1631降到0.4054±0.049 nmol/mg蛋白(P<0.005)由0.9922±0.2070降到0.6892±0.0968nmol/mg蛋白(P<0.01);而对肝脏组织中ADM浓度无明显影响(P均>0.25)。心肌超微结构观察表明,DHP能明显减轻ADM心肌损害程度。ADM剂量增大一倍,经DHP后肝脏药物浓度增加3.3倍,而心肌丙二醛(MDA)水平刚无明显增加(P>0.25),且形态学上心肌损害程度并不明显加重。研究结果表明,DHP在不能减低心肌中ADM的情况下,能明显减轻大剂量ADM所致心脏的毒性作用,而对肝脏药物浓度无明显影响。该疗法有望成为改善肝癌化疗的一项有效措施。

成人结肠镜在小儿出血性结直肠息肉诊治中的应用

目的:探讨成人结肠镜在小儿出血性结直肠息肉诊治中的应用价值。方法:对便血患儿进行成人肠镜检查并电切除治疗息肉,分析息肉的临床表现、镜下形态、病理特点,评估其安全性。结果:85%便血患儿发现结直肠息肉,临床症状主要为便血(35/35),腹痛(5/35),肛门有肿物脱出(9/35),粪便表面可见沟槽(6/35),直肠指检可触及肿块(8/35)。35例患儿发现息肉共38颗,单发占91.4%(32/35),多发3例,大小多数在2cm左右。息肉主要在直肠占73.7%(28/38),在直肠和乙状结肠共占92.1%(35/38)。息肉均在肠镜下成功微创电切治疗,术中、术后无肠出血、肠穿孔并发症,电切成功率为100%。息肉病理检查,多数为幼年性息肉占73.7%(28/38),少数为增生性息肉占15.8%(6/38)和炎性息肉占10.5%(4/38)。术后未再便血。结论:结直肠息肉是小儿便血的最常见原因,息肉主要在直肠和乙状结肠,多为单发,病理以幼年性息肉为主,电切息肉后未再便血。成人结肠镜对小儿出血性结直肠息肉的检查和微创电切治疗是安全有效的。

大肠癌抗原cDNA噬菌体表达库的构建及鉴定

目的 :构建人源性大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库 .方法 :从人大肠癌组织中提取总RNA ,纯化mRNA ,用RT PCR反转录合成cDNA第一链 ,用LD PCR合成cDNA第二链 ,除去小于 5 0 0bp的小片段 ,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体连接 ,体外包装 .转染E .coliXL1 Blue大肠杆菌 ,滴定文库的滴度 ,确定文库容量大小 ,用ITPG和X gal测定重组率 .用SfiⅠ酶切鉴定插入的cDNA片段大小 .结果 :构建成含 2 .39× 10 6重组子的人大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库 ,重组率为 97.5 % ,插入外源cDNA片段大小范围从 1～ 4kb ,平均长约 2 .4kb .结论 :成功构建人大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库 。

血液灌流对阿霉素所致心肌损伤的影响──超微结构观察

血液灌流对阿霉素所致心肌损伤的影响──超微结构观察刘宇虎，钮振，刘新伟重庆医科大学人工肝研究室（重庆６３００００）抗肿瘤药物阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）常因其严重心脏毒性使临床应用受到很大限制。近年国外有作者试用吸附剂血液灌流（Ｄｉｒｅｃｔ...

不同途径给药及联合应用血液灌流对表阿霉素血浆、组织浓度的影响

探讨不同途径给表阿霉素（ＥＰＩ）的优劣和血液灌流（ＤＨＰ）对ＥＰＩ的吸附能力。方法：观察肝癌病人肝动脉和外周静脉持续输注ＥＰＩ后外周血浆ＥＰＩ浓度的改变，并应用ＤＡＣ－ｒｅｓｉｎＤＨＰ吸附ＥＰＩ的临床研究。结果：肝动脉给药能降低外周血浆ＥＰＩ浓度（Ｐ＜００５）及血浆高峰浓度（Ｐ＜０００５），而两组ＡＵＣ的差别不明显（１∶１０５）。ＤＡＣ－ｒｅｓｉｎＤＨＰ对ＥＰＩ有明显吸附性能，吸附率达６７％。结论：局部给抗癌药优于全身给药。

DAC-树脂血液灌流与门脉输注阿霉素联合应用对心肌丙二醛含量的影响

本文的研究结果显示，心肌的丙二醛（ＭＤＡ）含量随门脉输注ＡＤＲ剂量的增加而增高呈正相关（ｒ＝０．８９７７）。联合应用ＤＡＣ－树脂血液灌流（ＤＨＰ）较对照灌流组明显降低了ＡＤＲ５ｍｇ／ｋｇ和１０ｍｇ／ｋｇ组急性期（Ｐ分别＜０．００５和０．０１）和亚急性期（Ｐ＜０．００５）心肌ＭＤＡ含量。以上资料表明，ＡＤＲ刺激产生的心肌脂质过氧化程度具有剂量和时间依赖性，而ＤＡＣ－树脂ＤＨＰ能明显降低急性期和亚急性期ＡＤＲ刺激产生自由基导致心肌膜结构脂质过氧化的程度。作者等认为本实验资料显示ＤＨＰ的同步应用能减轻ＡＤＲ所致的心肌急性期和亚急性期的损害程度，并有望于今后临床试用以提高ＡＤＲ的应用剂量和降低其毒性。