不同日龄免疫母鸡后裔对H9N2亚型禽流感攻毒保护的比较试验

本试验以禽流感H9N2毒株翼下静脉注射雏鸡,诱发1、7、14、21、28日龄雏鸡排毒,从攻毒后第5d开始泄殖腔和咽喉取棉拭子,1次/d,连续3 d,用HANKS液稀释.用滤器过滤后取滤液接种于10日龄鸡胚,培养96 h后收取尿囊液,测定血凝性.根据母源抗体测定的结果和攻毒保护试验结果,认为不同日龄免疫母鸡的最佳免疫时间为每隔3～4个月,加强免疫1次,雏鸡应在2周左右第1次进行油苗免疫.

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析

【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性,单抗不能抑制3#和12#的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明,3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变(S→N),导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失,说明该位点(S145)为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT,可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势,出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用,对该病的防控提出了新的挑战。

非结构蛋白NS1-ELISA检测禽流感野毒感染抗体

利用RT-PCR技术扩增获得了H5N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为678 bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1 mmol／I的IPTG诱导表达5 h,经15％的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28 KD的 NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在,NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化或用尿素变性复性,获得纯度较高的NS1蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法。最佳包被浓度为2．5μg／ml,血清的最佳稀释倍数为1:200, 酶标二抗的最佳工作稀释度为1:5 000。重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,而不与ND、IB、IBD、EDS76的阳性血清反应。分别检测H9N2、H5N2和H5N1亚型灭活疫苗和H9N2纯化病毒免疫的血清,各5份,其平均OD490值分别为0．225、0．210、0．205和0．184．均为阴性;而对H9N2和H5N2亚型活毒感染10-15 d的血清进行检测,各5份,其平均OD490值分别为0．610和0．619,均为阳性。因此,NS1蛋白能特异地区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群,可作为一种鉴别诊断标记,但不能区分亚型．具有A型特异性。NS1-ELISA 方法的初步应用,不仅为生产提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法,为进一步组装成试剂盒奠定了基础,也为禽流感的早期诊断、适时监控和净化提供了行之有效的方法。

银加强金标免疫技术在鸡传染性支气管炎病毒检测中的应用

采用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)进行检测的银加强金标免疫技术(SECGA).先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于40×稀释的IBV单抗中作用10min,洗涤后再浸于体积比为1:4稀释的金标羊抗鼠IgG溶液中作用1h,银染10min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低测量值为0.703ng·点-1(约2μL),对含毒尿囊液的最低检测为102..9EID50.结果表明,IB VM41毒株在鸡胚中繁殖时以36～54h检测含毒量最高;SPF鸡感染3d后可从气管粘液中检出病毒.SECGA检测抗原可用于IBV早期检测,具有群特异性,快速、敏感、简便,不需特殊设备,结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用.

辽中凹陷原油物性特征及其控制因素

在对辽中凹陷3个主要油气藏原油物性分布特征进行研究的基础上,结合构造地质条件,分析了影响原油物性特征的主要因素.研究认为,原油物性不仅受到族组成的影响,还与油源差异、原油保存条件、重力分异作用等有密切关系.运移方向上,随着运移距离的增加,原油物性不断变差.纵向上,在保存条件较好的情况下,原油物性随着深度的增加而变差;反之,物性则逐渐变好.同时通过分析物性之间的关系,发现密度和粘度有很好的正相关性.与粘度相比,密度和含蜡量有着更密切的关系.

单抗介导的血凝试验对H_9N_2亚型禽流感病毒的研究

利用4株鼠源抗H9N2禽流感病毒血凝素单克隆抗体与标准H9N2禽流感多克隆抗体,通过血液凝集抑制试验(Haemoglutination inhibition test,HI)分别对25株H9N2禽流感病毒进行了检测,发现4株单克隆抗体均对其中的23株H9N2禽流感病毒反应,其最高HI效价分别为:A单抗12log2,B单抗12log2,C单抗12log2,D单抗12log2;最低分别为:A单抗3log2,B单抗9log2,C单抗4log2,D单抗6log2,而对其中的2株H9N2禽流感病毒没有HI反应,其HI价均为0;然而,标准多抗对25株H9N2禽流感病毒均产生HI反应。检测结果表明2株H9N2AIV毒株血凝素蛋白出现了抗原漂变。

油气资源评价关键参数研究进展

以成因法为主进行油气资源评价的过程中,一些关键参数选取具有不确定性,如生烃中的烃产率模拟、排烃中的排烃系数计算和油气聚集过程中聚集系数的选取等。随着实验设备水平的提高,烃产率实验模拟结果愈加可靠,应该采用生烃潜力法或压实排烃理论研究排烃系数。选取聚集系数则采用回归分析法,建立运聚系数与地质参数之间的统计关系,并通过层次分析法建立油气运聚单元定量评价结构模型。

基于多信息融合的疫苗制备中鸡蛋胚体分拣系统

采用多信息融合方法研究疫苗制备中鸡蛋胚体状态的识别与分拣技术。在研究不同状态鸡蛋胚体图像特征、温度衰减和透光度变化情况的基础上,得出活胚图像中血管多、粗且呈放射状,弱胚图像中血管少、细且断裂,死胚图像内部均匀无血管,污染胚图像内部有明显黑块特征;鸡蛋胚体从37.8℃的孵化箱中取出置于25℃室温环境,活胚、弱胚、污染胚、死胚的温度衰减速度依次增大;活胚的透光度随孵化时间增加而逐渐降低,其他胚体透光度变化相对较小。将图像、温度、透光度信息特征融合,建立BP神经网络信息融合模型对鸡蛋胚体状态进行识别。最后,从37.8℃孵化箱中抽取80枚孵化6 d的鸡蛋胚体放置于室温10 min后,采集图像、温度和透光度信息,进行试验验证。结果表明多信息融合系统的识别准确率为96.25%,比单用图像、温度和透光度传感器进行识别的准确率分别提高了6.25%、13.75%和8.75%。

洛阳某猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定

为确定洛阳某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎的病原种类及其血清型,为其临床科学防疫和合理用药提供参考方案,本试验无菌采集了病猪肺脏等病料,采用病菌培养后形态观察、革兰氏染色、生理生化特性试验、PCR诊断等技术对病原菌进行实验室分离鉴定,通过基因测序和同源性分析方法对其进行确诊,通过动物攻毒试验和药敏试验分析分离菌株的致病性和耐药性,采用5对分型引物对分离菌进行基因分型以确定病原菌血清型。结果显示,分离菌2007菌落形态为光滑、透明、边缘整齐、圆形、隆起的小菌落,革兰氏染色特征为阴性杆菌且呈多型性,具有猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的典型培养特征,且生化结果符合猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的生化特性。同源性分析结果显示,分离菌株2007与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌菌株FJ848573.1同源性为99.4%,说明分离株2007是猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。动物攻毒试验结果显示,分离菌株2007对小鼠有强致病性。药敏试验结果显示,分离株2007对泰妙菌素、氨苄西林和头孢噻呋钠等高敏,对替米考星、红霉素、氟苯尼考等20种抗菌药完全耐药,对34种抗生素的耐药率高达76.5%,具有较强的多重耐药性。分离菌2007基因分型扩增到目的基因片段与血清型5型结果相符。本试验结果为发病猪场提出了解决该病的具体防治措施,并最终获得了良好的效果,为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌临床耐药折点的制定提供了一些参考。

一株血清9型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

【目的】确定河南某猪场送检病猪疑似副猪嗜血杆菌的血清型,为其提临床用药提供参考.【方法】经实验室分离培养,对分离到的病原菌进行生化鉴定、药敏试验和血清型分型.[结果]该分离菌革兰氏染色为阴性短杆菌,具有多形性;发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖,甘露醇、木糖、尿素、氧化酶阴性,硝酸还原酶、接触酶阳性,MR和VP试验阴性,有卫星现象;16Sr RNA扩增出了821 bp目的片段,测序结果与GenBank公布的副猪嗜血杆菌NR_118757.1同源性达98%以上;分离到的细菌对头孢噻呋、阿米卡星、硫酸黏菌素、甲砜霉素、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏,对阿莫西林、恩诺沙星耐药;采用14对分型引物对分离菌进行血清型分型,多重PCR扩增到700 bp左右大小的目的基因片段,测序结果与GenBank公布的KC795429.1副猪嗜血杆菌funV同源性达99.85%,确定该分离菌株为9型副猪嗜血杆菌.【结论】本研究结果将为副猪嗜血杆菌的防治提供参考.

基于多信息融合的疫苗培养基检测研究

针对疫苗培养基检测准确率较低的问题,首次提出利用机器视觉、红外温度和光照度的多传感器信息融合技术检测疫苗培养基。通过BP神经网络将3种传感器采集到的信息在特征层进行融合,在模型的建立过程中,对各个信息的主成分因子数进行了优化。从实验结果看,模型对预测集检测的识别率为97%,实验结果表明:通过多信息融合方法检测疫苗培养基是可行的,检测结果的准确性和稳定性相对于单个模型有明显提高。

禽霍乱多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

确定某鸭场疑似禽霍乱病的病原种类,为其临床用药提供参考。采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养,对分离到的病原菌进行了鉴定、动物攻毒试验、药敏试验和基因分型。结果显示,分离菌20170549具有多杀性巴氏杆菌典型培养特征,菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性,基因测序结果均与多杀性巴氏杆菌相符;该菌株对小鼠有强致病性;分离株对头孢噻呋、甲砜霉素、硫酸黏菌素、阿米卡星、恩诺沙星、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏;采用5对分型引物对分离菌进行基因分型,结果仅扩增到大小为1 050bp的目的基因片段,与A型结果相符。研究结果可为禽霍乱的防控提供参考。

金银花提取物的体外抑菌试验

分别用药敏片法、管碟法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌效果.结果表明：金银花黄酮类、绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌抑菌效果明显,对猪沙门氏菌抑菌效果次之.

鸡传染性支气管炎的防控

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属的鸡传染性支气管炎病毒引起的高度接触性传染病,表现显著的呼吸系统和肾脏病变,导致肉鸡增重和饲料报酬降低,混合感染引起气囊炎使肉鸡在加工过程中淘汰;蛋鸡产蛋下降(或完全不产蛋,即假母鸡)、蛋品质下降等。经济效益的损失往往比该病造成的死亡损失要大的多。该病毒血清型众多,因IBV(传染性支气管炎病毒)

一例猪水肿病和猪链球菌病混合感染的诊断报告

2018年5月河南洛阳某猪场保育猪出现咳嗽、喘气、关节肿大等症状,部分猪有下颌、眼脸肿大现象,发病率40%,死亡率20%。选取1头临床症状明显的病猪进行检测,检测结果为溶血性大肠杆菌和猪链球菌感染,猪链球菌的敏感药物为头孢噻呋、阿莫西林、甲砜霉素、杆菌肽、恩诺沙星、氟苯尼考;溶血性大肠杆菌的敏感药物为硫酸黏菌素和阿米卡星。根据临床和实验室检测结果,对此次疫情进行了分析总结,就防控方面提供了一些建议,对疫情的控制提供参考价值。

鸡新城疫病毒、禽流感病毒二联灭活疫苗免疫试验

禽流感(Avian Influence,AI)是由正黏病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的禽类(家禽或野禽,亦有部分哺乳动物)感染和/或疾病综合征[1～2].……

一例病毒性腹泻的诊断与防治

通过对河南省安阳市某规模化猪场仔猪腹泻的原因进行分析,并对猪群临床表现、病理变化的观察,结合病理学和分子生物学诊断,最终确诊为猪流行性腹泻病毒引起的仔猪腹泻。遗传进化分析结果表明,该毒株属于PEDV(猪流行性腹泻病毒)流行株;通过对发病猪群进行紧急免疫和饲养管理改进后,较为有效地控制了疫情。基于此,文章对该病的确诊与防控过程进行了分析和探讨,以期给广大养猪户防控该病提供参考和借鉴。

河南部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

试验对临床上可引起腹泻的部分病原进行了检测,并对河南部分地区的猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)进行了分子流行性病学调查。对从河南地区5个规模化猪场获得的10份腹泻病料进行了反转录PCR,并对检出的8份PEDV的S基因部分序列进行测序、同源性和遗传进化分析。结果显示,临床的腹泻病例部分为混合感染,作为主要病原的PEDV、猪A群轮状病毒(PoRV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的检出率有所不同。将8株PEDV的S基因与参考毒株CV777进行比较,S基因存在不同位点和不同程度的氨基酸突变。S基因的同源性比较和遗传进化分析表明:河南地区的8株PEDV毒株属于不同的分支,且181737-1、181737-2和180278-1为流行株,180276-3、180276-6、180435-1和181753-1更接近于经典株,181212-1更接近于疫苗株。结果表明,河南地区现阶段流行的PEDV毒株复杂多样,优势毒株可能发生了变化。

禽流感病毒H_9N_2亚型HL株与H_9亚型流行株抗原相关性及交互免疫的研究

禽流感病毒的基因结构的特殊性决定了该病毒的多变性。为了实时掌握H9N2亚型禽流感病毒的流行变异情况,本文研究了2001年从河南洛阳分离到的HL株H9N2亚型禽流感病毒与2005年以后从我国部分省份分离到的6株H9N2亚型禽流感毒株,就毒力、免疫原性和HA基因的变异等方面进行了比较,旨在为生产用毒种的选择提供理论依据。结果表明,HL株和2005年以后从其他几个省份分离的毒株有很好的免疫交叉保护性,能够对当前的流行毒株提供足够的抵抗力。