人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡

为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。

GFP-hDaxx融合蛋白在真核细胞中的表达与鉴定

目的构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,并在HeLa细胞中表达,为进一步研究hDaxx在细胞凋亡、病毒感染中的作用提供实验基础。方法 用T4DNA连接酶将hDaxx亚克隆入载体pEGFP,筛选阳性克隆。将质粒pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western—Blotting鉴定表达产物,荧光显微镜观察GFP—hDaxx融合蛋白在细胞内的定位。结果成功构建了GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,GFP—hDaxx融合蛋白成功表达并定位HeLa细胞核。结论GFP—hDaxx融合蛋白成功地在真核细胞表达并定位于细胞核。

hDaxx基因转染抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡

利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响。将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblot鉴定Daxx的表达 ,荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位 ,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡 ,细胞用Giemsa染色后 ,观察细胞形态变化并计算巨噬细胞凋亡率。结果显示 :GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中成功表达并定位于细胞核 ,且GFP hDaxx融合蛋白不影响Daxx的特异性 ;地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低 (P <0 0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡率。Daxx为调控蛋白 ,GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核 ,且hDaxx即时高表达可抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡。

hDaxx高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡

目的 利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在HeLa细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对HeLa细胞凋亡的影响。 方法 将pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western -blotting鉴定GFP -hDaxx融合蛋白的表达,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位,用地塞米松诱导HeLa细胞凋亡,细胞用Giemsa染色后,观察细胞形态变化并计算HeLa细胞凋亡率。 结果 GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中成功表达并定位于细胞核。地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低(P <0 .0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡率。 结论 Daxx为调控蛋白,GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中表达并定位于细胞核,且hDaxx即时高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡。

生殖器单纯疱疹病毒感染的常用检测方法比较

目的 比较评价检测生殖器疱疹病毒3种常用的实验方法。方法 采用病毒培养、抗原捕获PCR(AC-PCR)和间接免疫荧光法(IIF)同时对186份生殖器疱疹标本进行HSV检测。结果 病毒培养法、AC-PCR法检测HSV阳性率明显高于IIF法(P<0．01)。病毒培养法、AC-PCR法无显著性差异(P>0．05)。3种方法检测生殖器疱疹患者皮疹水疱内的阳性率无明显差异(P>0．05)，但IIF法检测糜烂结痂的阳性率较低(41．03％)。结论 3种方法均适用于生殖器疱疹水疱期患者标本的检查。而病毒分离培养法、AC-PCR法检测生殖器疱疹糜烂结痂患者标本较皿法敏感。

埕北断阶带油气成藏条件与模式研究

黄骅坳陷埕北断阶带具有含油气目的层多,油气藏类型多样,纵向叠置、平面连片,油气复式聚集的特点。油气藏形成的主要控制因素为:充足的油气源、良好储集条件和储盖组合、基岩潜山背景下的断阶构造、长期继承性发育的断层等,其中,断层和盖层是控制油气纵向成藏的关键因素;基岩潜山背景下断阶构造和输导体系是控制油气横向成藏的主导因素。油气富集规律为:平面上,油气沿近东西、北东向主断裂展布;纵向上,油气自北向南、自西向东呈阶梯状分布;储层厚度和物性以及砂体类型控制油气富集程度;圈闭的位置与砂体形态控制油气藏的厚度与含油范围;泥岩盖层控制了油气富集的层位;复式输导体系决定了不整合面上下是油气富集的有利部位;埕北断阶断裂、不整合面及砂岩输导层三者不同的配置关系,构成了研究区多种油气运聚方式,其中"多"字型成藏模式(即阶梯状输导成藏模式)是研究区的主导成藏模式。

歧口凹陷湖盆特征及对油气成藏控制作用研究

通过分析歧口凹陷湖盆基本特征,剖析构造断裂演化与油气成藏关系,探索其对油气成藏的控制作用.歧口凹陷湖盆自古近纪一新近纪经历了断陷期、断坳转换期、拗陷期三大演化阶段,现今表现为多隆多凹、盆岭相间的分布特征.受区域构造应力场及幕式演化影响,湖盆断裂以NE、近EW向为主,主断裂以侧接、转换为特色.凹陷主要发育潜山构造带、断阶构造带、盖层滑脱型断裂构造带,不同构造带油气成藏模式富集特点差异明显.根据断裂构造与油气成藏关系,认为海陆调解带裂缝油气藏的勘探、远源缓坡区沿断裂构造脊的中浅层勘探及大断裂控制的"Y"字型浅层构造及两侧火成岩勘探是下步工作重点方向.

复杂断块油藏组合模式研究与应用

复杂断块油藏由于受不同方向断层切割而形成大小不一、形态各异、断层上下盘相互分隔、彼此独立的封闭单元。其复杂性不单表现在十分破碎的形态上,更主要的是主断裂控制了油气的富集规律,与主断裂相伴生的一系列断层造成了油藏多重复杂性,油气发生多次运移和聚集,纵向上形成多套含油气层系,平面上断块之间含油性差异较大,为勘探开发带来了极大的难度。该文针对王官屯油田含油层系多、圈闭类型多、断块破碎、油气运移与分布复杂的特点,应用系统分析的方法对王官屯油田复杂断块储集层、圈闭类型、油气成因与分布等要素进行研究,深化油藏形成与分布规律认识,对复杂断块成藏条件、油藏组合模式进行系统归纳,建立一套复杂断块油藏组合模式,并指导王官屯油田滚动勘探开发,取得了较好的效果。

16S rDNA技术在鼻咽癌患者和正常人咽部细菌组成中的比较研究

目的比较分析鼻咽癌患者和正常人咽部标本中的细菌种类和比例,探讨细菌感染和鼻咽癌的关系。方法选择1 1例初次确诊的鼻咽癌患者以及1 1例与鼻咽癌患者年龄和性别匹配的健康对照者,两组1年内均未使用抗生素、化疗等药物。提取咽拭子中的细菌总DNA,针对1 6 S rDNA保守区设计通用引物进行PCR扩增,PCR产物克隆到T载体,在转化的白色克隆中随机挑选1 0 0个左右进行测序。将获得的1 6 S rDNA序列与网上已公布的1 6 S rDNA序列进行Blast比对,分析克隆群中细菌的种类和比例。结果1 1例鼻咽癌患者中9例结核分枝杆菌和奈瑟菌占优势菌群;另2例排第四和第五位,而在1 1例健康对照者中未发现结核分枝杆菌和奈瑟菌。鼻咽癌患者与健康对照者的菌群分布明显不同。结论用1 6 S rDNA技术发现鼻咽癌患者与正常人咽部细菌组成存在较大的差异,结核分枝杆菌和奈瑟菌感染可能与鼻咽癌相关。

GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位

目的 构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx并在巨噬细胞中表达 ,为研究hDaxx对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响提供实验基础。 方法 将hDaxxcDNA片段亚克隆入载体pEGFP ,构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblotting鉴定表达产物 ,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达与定位。 结果 成功构建了GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx ,GFP -hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。 结论 pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中即时高表达GFP

衡阳地区HIV阳性妇女宫颈HPV感染情况研究

目的了解本地区人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性女性宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,为HIV阳性人群中HPV感染的防治提供依据。方法采用ELISA法和胶体金法检测4576例女性患者血清或血浆中的HIV抗体,两种方法均为阳性标本再送检确认。PCR+膜杂交法检测病人宫颈脱落细胞及宫颈粘液标本进行HPV病毒基因分型。结果 4576例病例中,HIV感染率为0.83%;HPV感染率为21.02%。HIV阳性组中HPV感染率为60.53%,HIV阴性组中HPV感染率20.69%,差异有统计学意义(χ2=36.02,P<0.005)。在962例HPV阳性病例中,HIV阳性组的混合HPV感染率为56.52%;HIV阴性组的混合HPV感染率为20.98%;差异有统计学意义(χ2=16.62,P<0.005)。结论 HIV阳性妇女的宫颈HPV感染率高,且高危与多重HPV感染常见,提示HPV感染与HIV感染患者关系密切。

土壤微生物多样性及其作用研究进展

土壤微生物是土壤的重要组成部分,是土壤有机质和土壤养分(N、C、P等)转化和循环的主要动力,它参与土壤有机质的分解、腐殖质的形成等生化过程.另外,又是土壤养分的储备库和植物生长可利用养分的一个重要来源,是土壤肥力水平的活性指标,在土壤生态系统中起着非常重要的作用.本文从土壤微生物多样性的定义、研究方法、土壤微生物的作用来阐述目前国内外土壤微生物多样性及其作用研究进展,并探讨了分子生物学在土壤微生物研究中的应用前景.

两种方法提取丢糟中酯类成分的比较研究

采用CO2超临界萃取法和60％酒精热浸提法提取丢糟中的酯类物质,气相色谱分析结果表明:①两种方法均未能提取丢糟中的乙酸乙酯;②CO2超临界萃取法能够提取丢糟中的乳酸乙酯、己酸乙酯、丁酸乙酯和戊酸乙酯,而酒精热浸提法只能提取出乳酸乙酯和戊酸乙酯,且后者乳酸乙酯的含量达275．9285 mg／100 g,远远超过了前者的11．8955 mg/100 g。因此,提取丢糟中主要酯类成分,CO2超临界萃取法优于60％(v／v)酒精热浸提法。

HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响

目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体,利用酵母双杂交系统检测HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用,并用Western印迹法检测二者在酵母菌中的表达。将E6与hDaxx的真核表达载体共转染HeLa细胞,用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡,FCM法检测凋亡率。结果:E6蛋白与hDaxx在细胞内存在相互作用。共转染pcDNA3.1(-)/E6和pcDNA3.1(-)/hDaxx的HeLa细胞,随pcDNA3.1(-)/hDaxx转染量的增加凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPV16 E6蛋白与hDaxx在细胞内相互作用,hDaxx过表达可提高表达E6蛋白的HeLa细胞对5-FU的敏感性,且这种关系存在剂量依赖性。E6蛋白可能通过和hDaxx的相互作用抑制细胞凋亡。

人乳头瘤病毒l6型E6-E7融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的构建人乳头瘤病毒l6型(HPV16)E6-E7融合蛋白真核表达载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E6-E7基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,双酶切及测序鉴定。将质粒转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E6-E7基因在HeLa细胞中的表达。提取质粒免疫小鼠,利用免疫组化方法检测在其肌肉组织中的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7;在转染pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7的细胞中检测到HPV16 E6-E7基因。在免疫该质粒的小鼠肌肉组织中可以检测到该质粒的蛋白表达。结论成功的构建的了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,该载体能在HeLa细胞内以及小鼠骨骼肌细胞内有效表达。

现阶段湖南农业推广现存问题及解决路径

文章在分析湖南农业推广现状的基础上,结合现阶段湖南农业生产的基本特征,阐明了农业推广人员素质低、农技队伍不稳定、农业推广经费严重短缺以及单一的农业推广体系是现阶段湖南农业推广工作面临的主要问题,并提出了构建湖南农业推广体系的基本思路。

hDaxx融合蛋白高表达降低活化巨噬细胞分泌IL-1β

目的 研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法 将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS刺激巨噬细胞后 0 .5h、4h、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子IL - 1 β的含量。结果 pEGFP/hDaxx在巨噬细胞内成功表达GFP -hDaxx融合蛋白。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β量明显降低 (在4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论 hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β。

GFP-hDaxx融合蛋白高表达抑制活化巨噬细胞分泌TNFα

目的 研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌TNFα的影响。方法 将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP hDaxx转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP -hDaxx在巨噬细胞内的表达与定位。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS诱导激活巨噬细胞后 ,在 0 .5、4、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子TNFα的含量。结果 GFP -hDaxx在巨噬细胞内即时高表达且定位于细胞核。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNFα量明显降低 (在 4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论 hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌TNFα。

响应面法优化PSSA/PVA共混膜催化酯化制备生物柴油

采用响应面法考察聚苯乙烯磺酸(PSSA)/聚乙烯醇(PVA)共混型催化膜催化酯化制备生物柴油工艺中催化膜用量、醇油质量比、反应时间和反应温度及其交互作用对酯化率的影响,结果发现,各因素对转化率影响顺序为:醇油比>催化剂用量>反应温度>反应时间;同时,醇油比与催化剂量的交互作用对转化率的影响最强,而与反应时间相关的交互作用则弱.最佳条件为:催化剂用量1.56mol(H+)、醇油质量比1.2∶1、反应时间7h和反应温度64.5℃.预测的酯化转化率(97.27%)与实验验证结果(94.60%)比较接近.

抗衣原体感染Th1/Th2细胞免疫应答的研究进展

衣原体是专性胞内寄生菌,具有独特的双相发育周期,能够在人类与动物之间引起多种疾病。衣原体感染诱导的机体免疫应答主要以1型辅助性T(Th1)细胞介导的细胞免疫为主,且Th1、Th2细胞通过分泌细胞因子参与调节机体对衣原体的防御。基于对细胞因子的产生、功能以及其相互作用的深入了解,基因工程重组细胞因子类药物和疫苗也在不断被研发出来。我们主要总结了Th1细胞/Th2细胞在衣原体感染中的分化、调控以及免疫防御中的作用。