氯氰菊酯异构体对黑胸大蠊神经钠钾通道的调制作用

用电生理油间隙、单纤维、电压钳位技术研究了氯氰菊酯顺、反异构体对黑胸大蠊[Periplaneta fulginosa(serville)]中枢神经大轴突钠通道的调节抑制作用,并探讨了反式异构体与钾通道的作用关系。结果证明:1.2×10^(-3)mol/L顺式异构体作用于钠通道,先使其开放,然后抑制。2.出现钠尾电流,表明有更多数量的钠通道处于开放状态。3.5.4×10^(-4)mol/L反式异构体可阻滞迟缓钾通道并降低钾电流I_K的峰值。

磷酰胺酯化学结构与昆虫谷氨酸受体通道的活性关系

用电生理细胞内微电极和膜片钳单通道记录技术,研究了21种磷酰胺酯化学结构对昆虫谷氨酸电位和谷氨酸受体单通道开关动力学门控过程的作用。结果表明:(1)21种化合物均能阻断谷氨酸电位,其中BSSN-01表现明显的兴奋过程;(2)BSSN-01可调制谷氨酸单通道的门控过程,通道道通时间延长,约τ_2=2.75ms,比正常值τ_1=2.1ms增加约31％,从而改变了通道的时间依赖性。

棉铃虫幼虫神经细胞的急性分离培养及其电压门控通道的膜片钳研究

探索了棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫神经细胞的急性分离与体外培养的条件 ,并利用全细胞膜片钳技术首次对棉铃虫幼虫急性分离神经细胞的电压门控性钠、钾和钙通道的基本电生理学特性进行了研究。结果表明 ,棉铃虫幼虫中枢神经细胞在TC 10 0、L 15和Grace培养基中均可贴壁生长 ,在DMEM培养基中基本不能存活。在TC 10 0培养基分别与其它三种培养基按一定比例混合形成的培养液中 ,TC 10 0与L 15等量混合培养液更适合于神经细胞的生长。全细胞电压钳条件下 ,可分别记录到电压门控性钠、钾和钙通道电流。钙电流特征为高电压激活、缓慢失活 ;钠电流对河豚毒素敏感 ;钾电流可被细胞外液中的氯化四乙胺和 4 氨基吡啶抑制。

三氟氯氰菊酯对棉铃虫神经细胞钠及钙通道作用机理研究

用膜片钳技术对比分析了棉铃虫三氟氯氰菊酯抗性品系 (R)及其同源对照品系 (S)幼虫离体培养中枢神经细胞Na+通道的门控特性及杀虫剂对R和S神经细胞Na+、Ca2 +通道门控过程的影响。结果表明 ,S神经细胞Na+通道电流 (S -INa)在 -50～ -40mV激活 ,-20mV左右达峰值 ,R神经细胞Na+通道电流 (R -INa)在-40mV左右激活 ,-10～0mV达峰值 ,即R -INa 激活电压与峰值电压均向正电位方向移动约10mV ,提示二者Na+通道门控特性不同 ,R神经细胞Na+通道功能发生了变异。三氟氯氰菊酯作用后 ,S -INa 与R -INa 的I～V曲线均向负电位方向移动约10mV ,S -INa 在20min后基本消失 ,而R -INa 被阻断需时约90min ,延长近5倍 ,其幅值有减小后再增大的现象。对Ca2 +通道分析表明 ,杀虫剂作用后 ,R及S神经细胞Ca2 +通道电流的I～V曲线均向负电位方向移动10～20mV ,提示三氟氯氰菊酯对Ca2 +通道的门控过程也有影响。与R -INa 幅值起伏变化相联系 ,可推知杀虫剂对神经细胞的毒性作用中 ,Na+、Ca2

中华绒螯蟹窦腺的显微和超微结构

借助光学和电子显微镜观察了养殖河蟹 1龄蟹种、早熟蟹种和 2龄成蟹窦腺的形态结构和神经分泌物质释放方式。河蟹窦腺位于眼柄视神经节内髓与终髓交界处背侧 ,活体为乳白色 ,扁球状 ,大小约为 0 5 5mm×0 45mm× 0 2 3mm。窦腺呈囊状 ,腺体壁由膨大的神经分泌细胞末梢和胶质细胞组成 ,神经末梢内充满电子致密的分泌颗粒。根据颗粒的大小、形态和电子致密度等特征 ,区分出 6种不同类型的神经分泌末梢。河蟹窦腺中的神经分泌物质以胞吐作用方式释放 ,一些现象表明 ,神经胶质细胞参与神经分泌颗粒的释放。 1龄蟹种、早熟蟹种和 2龄成蟹窦腺的形态、结构无明显差异 ,但神经激素颗粒释放情况明显不同 ,从形态结构上证实了窦腺对养殖河蟹性腺发育的调控作用。

河蟹MTXO细胞的离体培养和细胞学研究

对河蟹眼柄神经分泌细胞的细胞学进行了研究，建立了河蟹眼柄视神经节终髓Ｘ器官 （ＭＴＸＯ）细胞原代培养的实用方法。ＭＴＸＯ神经分泌细胞在添加了谷氨酰胺和常量抗菌素的 Ｌ－１５培养基中表现出快速的再生生长，细胞生长可保持３—５ｄ，维持存活约１８ｄ。在ｐＨ６．８－ ７．８、温度 ２０℃－２８℃及渗透压 ９５０－１１００ｍＯｓｍ条件下，均能存活和生长，但在无 Ｃａ２＋或添 加 Ｃａ２＋通道阻断剂 ＣｄＣｌ２的培养基中不能生长。依据大小、形态、分布和超微结构特征及体外 生长方式区分出Ａ、Ｂ、Ｃ三种不同类型细胞。

新型非甾醇蜕皮激素类杀虫剂对棉铃虫幼虫蜕皮的影响

用透射电镜技术研究了新型非甾醇蜕皮激素类杀虫剂W2 0 0 0 13对棉铃虫 4龄幼虫蜕皮的影响。结果表明W2 0 0 0 13使棉铃虫产生早熟、致死的蜕皮。中毒试虫 6h表现出内表皮层沉积加快 ,皮细胞中粗面型内质网大量增加 ,糖原颗粒减少 ;12h蜕皮间隙开始形成 ,细胞质凝集 ;2 4h新、旧表皮同时存在 ,皮细胞空泡化严重 ;36h新上表皮覆盖于仅沉积几层的新原表皮上 ,旧表皮仍然保持 ,皮细胞呈恶化、降解状态 ,宏观上虫体不表现出蜕皮行为而死亡。而且比较研究可见W2 0 0 0 13在中毒症状、生物测定结果、超微结构水平与RH 5 992具有相似的作用。

不同甾醇类物质对河蟹眼柄神经分泌细胞I_(Ca)的影响

采用膜片钳技术测定了不同甾醇类物质对河蟹眼柄视神经节端髓X器官 (MTXO)神经分泌细胞钙离子通道电流 (ICa)的作用 ,探讨河蟹眼柄神经肽类激素分泌和养殖河蟹性早熟的调控机制。结果表明 ,河蟹眼柄MTXO三种类型神经分泌细胞均表达高电压激活L型钙通道 ,激活电压为 - 3 0mV ,+1 0mV达到峰值。甾醇类物质中 ,只有胆固醇对河蟹眼柄B型神经内分泌细胞的钙电流存在抑制作用 ,其作用具有浓度依赖性 ,抑制强度不随时间的延长而加强。 1 μmol L的胆固醇作用 4h可抑制B型细胞 5 0 .49%± 5 .

蟾酥的研究进展

综述了近几年国内外有关蟾酥主要药理作用及相关研究的进展。近5年来对蟾酥药理作用的研究主要集 中在强心、镇痛和抗肿瘤作用的分子药理学方面,且十分复杂,涉及多种机制,而蟾酥镇痛的细胞分子学机制尚待 研究。对蟾酥有效成分的分子药理学研究将大大加快其临床应用的步伐。

河蟹眼柄神经分泌细胞离子通道的膜片钳研究

采用全细胞膜片钳技术对培养12～24小时不同形态河蟹眼柄视神经节端髓X器官(MTXO)神经分泌细胞离子通道进行了研究。结果表明 ,河蟹眼柄MTXO中分布的A、B、C三种类型神经分泌细胞均可记录到由内向电流和外向电流组成的正常全细胞电流。内向电流由高电压激活钙离子通道电流 (ICa)和对TTX敏感钠离子通道电流 (INa)组成。ICa 的激活电压为 -30mV,在0～ +20mV电压下达到峰值 ,在 -40mV和 -70mV保持电压下记录的ICa 激活阈值、初始峰值及I -V曲线无明显差别。外向电流明显 ,幅值较大 ,包括对4-AP敏感的快速激活、快速失活钾离子通道电流 (IA)和对TEA敏感的缓慢激活、缓慢失活钾离子通道电流 (Ik)。正常蟹种、二龄成蟹和早熟蟹种MTXO神经分泌细胞均表达电压门控钠、钾、钙离子通道 ,通道电流和电压特征无明显区别。

溴氰菊酯对神经细胞钙通道和钙库的激活作用

应用膜片钳全细胞记录方式和显微荧光测钙技术 ,以MN9D神经细胞为材料研究了溴氰菊酯的作用机理。低浓度 (10 - 9mol/L～ 10 - 7mol/L)溴氰菊酯就能使神经细胞Ca2 + 电流显著增加。10 - 9mol/L ,1min时电流增加平均值为 2 0 6 4 % ,5min时为 15 4 8% ,表明溴氰菊酯能激活高电位激活钙通道 (L型和N型 ) ,促使Ca2 + 内流 ,显微荧光测定细胞内自由钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)发现 ,在含Ca2 + 和无Ca2 + 的胞外液中 ,溴氰菊酯均能使胞内自由钙离子数量增加 ,表明它能刺激胞内钙库释放Ca2 + 。 [Ca2 + ]i升高对细胞功能影响很大。

苦皮藤素Ⅳ杀虫机理电生理研究初报

应用电生理技术研究了苦皮藤素 对兴奋性突触后电位 ( EPSP)和神经 -肌肉接头兴奋性接点电位 ( EJPs)的作用。甘露醇间隙法对美洲大蠊 ( Periplaneta americana)中枢神经离体标本兴奋性突触后电位 ( EPSP)的测定表明 ,质量浓度为 0 .1 g/L的苦皮藤素 在用药后 72 min阻断了 EPSP。细胞内微电极记录法对果蝇 ( Drosophila melanogaster)运动神经 ,即腹纵肌离体标本的神经 -肌肉兴奋性接点电位 ( EJPs)的测定表明 ,0 .1 g/L的苦皮藤素 作用 1 9.5min可阻断 EJPs。

抗性棉铃虫神经细胞的离体培养和超微结构分析

对棉铃虫幼虫神经细胞进行了离体培养 ,并建立了其体外培养的实用方法 .神经细胞在增补棉铃虫幼虫血淋巴的 TC-1 0 0培养基中可贴壁生长 ,存活 5～ 7d,培养基中不加血淋巴 ,而增补谷氨酰胺时 ,细胞也可贴壁生长 ,但接种 2 4 h后出现老化现象 .增补适量葡萄糖 ,细胞可存活 2 2～ 2 8d.细胞存活的最适 p H值为 6.4 .90 %的细胞具多条突起 ,与在体内生长有明显区别 .棉铃虫抗性种群、对照种群、同种群不同龄期幼虫以及同一个体胸、腹神经节的神经细胞体外培养时形态无明显差异 ,但抗性品系幼虫运动神经元内线粒体明显增多 。

苦皮藤素IV麻醉机理的膜片钳研究

用膜片钳技术研究了植物杀虫剂苦皮藤素Ⅳ对棉铃虫幼虫离体培养中枢神经细胞钠通道门控过程的影响。结果表明,苦皮藤素Ⅳ对钠通道具有迅速的浓度依赖性阻滞作用,使电流-电压关系(I-V)曲线上移。0.1、1和10μmol/L苦皮藤素Ⅳ作用3min后,分别使钠电流峰值(INaMax)较给药前下降27.35%±4.05%、62.72%±2.81%和88.53%±5.56%(P<0.05),1和10μmol/L苦皮藤素Ⅳ还使钠通道的激活电压和峰电压分别向正电位方向移动了10mV和20mV左右。同时比较研究了利多卡因对棉铃虫幼虫神经细胞钠通道的影响,利多卡因对钠通道也具有阻滞作用,但有效作用浓度明显高于苦皮藤素Ⅳ。1、70mmol/L的利多卡因注射液作用3min后,使INaMax较用药前下降21.21%±2.52%和95.63%±2.10%(P<0.05)。苦皮藤素Ⅳ对钠通道门控过程的影响与利多卡因等局部麻醉剂非常相似,因此,对钠通道的阻滞作用可能是其发挥麻醉作用的重要机制。

三氟氯氰菊酯对棉铃虫神经细胞延迟整流钾电流的抑制作用(英文)

用膜片钳技术首次研究了三氟氯氰菊酯对离体培养的棉铃虫中枢神经细胞延迟整流钾通道电流的影响。结果表明,药物作用前有81%和39%的细胞的通道分别在-30mV和-40mV激活(n=21)。三氟氯氰菊酯(10-5mmol/L)作用15min后,有63%和38%细胞的通道分别在-40mV和-50mV激活(n=8);作用1min后电流幅值明显降低,抑制率达到了37.7%(n=19);加药后激活曲线明显左移且Vh值变化显著,但k值没有明显变化。实验结果说明,三氟氯氰菊酯作用后,通道更容易激活,但显著抑制电流峰值,导致神经敏感性降低,棉铃虫中枢神经细胞钾通道也是拟除虫菊酯类药物的作用靶标之一。

苦参碱对棉铃虫幼虫神经细胞钠通道的影响

用全细胞膜片钳技术研究了生物碱类植物杀虫剂苦参碱对棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫离体培养中枢神经细胞钠离子通道门控过程的影响。结果表明 :苦参碱对棉铃虫幼虫神经细胞所表达的TTX (tetradotoxin ,河豚毒素 )敏感钠通道具有浓度依赖性阻滞作用 ,1,10和 10 0 μmol L的苦参碱作用 5min后 ,分别使钠电流峰值较给药前下降 (12 4 9± 1 6 7) %、(18 79±2 16 ) %和 (4 3 15± 8 17) % (n =8,P <0 0 5 )。苦参碱使钠电流的电流 电压关系曲线上移 ,但并不改变其激活电压、峰电压和电流 电压关系曲线的形状。

光学活性拟除虫菊酯对棉铃虫神经细胞钠通道电流的影响

用全细胞膜片钳技术对比分析了alpha体氯氰菊酯与theta体氯氰菊酯对棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫离体培养中枢神经细胞Na+ 通道门控过程的影响。结果表明 ,alpha体氯氰菊酯作用后 ,神经细胞Na+ 通道电流 (INa)先增大 ,同时通道的激活电压向负电位方向移动约 10mV ,提示alpha体氯氰菊酯使通道激活电位降低 ,通道更容易被激活。药剂作用约 10min后 ,INa又迅速降低 ,表明alpha体氯氰菊酯对开放状态的Na+ 通道有抑制作用。另外 ,alpha体氯氰菊酯使INa到达峰值的时间缩短 ,但对失活时间无明显影响。theta体氯氰菊酯也使INa激活电位左移 ,幅值降低 ,但降低速率较慢。总的结果表明alpha体氯氰菊酯与theta体氯氰菊酯对棉铃虫中枢神经细胞处于关闭和开放状态的钠通道均有作用 ,且alpha体氯氰菊酯对钠通道电流的抑制作用强于theta体氯氰菊酯。

神经敏感性的降低是棉铃虫对拟除虫菊酯抗药性的重要机制

用扫描电子显微镜和光学显微镜的染色观察，研究了棉铃虫ＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ３龄幼虫腹部神经－肌肉的分布，表明其腹纵肌细胞适合于作电生理细胞内记录。用电生理细胞内微电极记录法研究了棉铃虫三个品系：对照品系、功夫菊酯抗性品系（Ｃｙ－Ｒ，抗性指数１３．４）和氰戊菊酯抗性品系（Ｆｎ—Ｒ，抗性指数３７．９）的３龄幼虫神经－肌肉材料对相应杀虫剂的神经敏感性。结果表明：用１０－６ｍｏｌ／Ｌ的功夫菊酯处理Ｃｙ—Ｒ，在３０ｍｉｎ内有４０％的个体对药剂无反应，另外６０％的个体产生反应所需的时间是对照品系的３．５倍。用１０－６ｍｏｌ／Ｌ的氰戊菊酯处理Ｆｎ—Ｒ，在３０ｍｉｎ内有４７％的个体对药剂无反应，另外５３％的个体产生反应所需的时间是对照品系的４．２倍。这些结果说明神经敏感性降低是棉铃虫对拟除虫菊酯抗药性的重要机制。

吡虫啉、杀虫双对美洲蜚蠊中枢神经的电生理影响

本文运用美洲蜚蠊（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａ）第ＶＩ腹神经节突触后电位细胞外记录方法研究了吡虫啉、杀虫双对中枢神经活动的影响。结果显示：１．７３×１０－７ｍｏｌ／Ｌ吡虫啉和１．３８×１０－５ｍｏｌ／Ｌ杀虫双处理后初期均能引起自发性突触后电位发放增强，随后导致突触传递阻断。而吡虫啉较杀虫双阻断传递快，且用Ｒｉｎｇｅｒ生理溶液冲洗不易恢复，表明吡虫啉较杀虫双激动剂活性更强。以３．３７×１０－５ｍｏｌ／Ｌ甲胺磷预处理中枢神经样品后，再进行杀虫双处理，则突触后电位的发放频率和幅值有明显增强，产生连续超幅排放（ｏｖｅｒｓｈｏｏｔｉｎｇ）现象．相反，甲胺磷预处理对随后进行吡虫啉处理无明显影响。这些结果说明，吡虫啉、杀虫双和乙酰胆碱受体发生相互作用过程存在差异。

苦皮藤素对果蝇幼虫神经肌肉兴奋性接点电位的影响

利用细胞内微电极技术,研究了杀虫植物苦皮藤中的麻醉成分苦皮藤素 和毒杀成分苦皮藤素 对果蝇3龄幼虫腹纵肌神经-肌肉兴奋性接点电位(EJPs)和自发电位(SP)的作用。结果表明,苦皮藤素 可使自发电位发放频率明显降低,而苦皮藤素 可使发放频率先增加,后降低,并且在某些标本中记录到明显的重复簇状发放;苦皮藤素 和 对神经-肌肉兴奋性接点电位(EJPs)的影响表现为逐渐抑制、最后阻断,其阻断时间与浓度有一定的相关性,高浓度下短时间内就能被阻断,而低浓度下则需较长时间才能被阻断。