牛皮杜鹃叶乙醇提取物抗炎镇痛作用的实验研究

采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、甲醛致小鼠足肿胀及冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强的实验方法观察牛皮杜鹃叶乙醇提取物的抗炎作用;采用热板法和醋酸扭体法观察该药对小鼠的镇痛作用.实验结果表明,与生理盐水组比较,牛皮杜鹃叶乙醇提取物各剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、甲醛致小鼠足肿胀以及冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强均有一定的抑制作用,均能延长小鼠热板反应潜伏期、抑制扭体次数和提高扭体抑制率,且随给药剂量增加抑制作用增强;与给药前比较,均能提高小鼠痛阈值.因此,牛皮杜鹃叶乙醇提取物具有一定的抗炎镇痛作用,且高剂量组的作用最强.

大弹涂鱼皮肤黏液的抑菌活性和蛋白质组学

皮肤黏液是鱼类免疫防御的第一道防线。大弹涂鱼皮肤黏液对其免疫防御、渗透压维持以及适应水陆生活等方面具有重要意义。为深入了解大弹涂鱼皮肤黏液的蛋白质分子组成,对其皮肤黏液开展了抑菌活性分析和蛋白质组学分析。通过电刺激法收集大弹涂鱼皮肤黏液,采用打孔法比较了皮肤黏液和血清的抑菌活性差异;进一步利用鳗弧菌对大弹涂鱼进行诱导,采用生长曲线抑制法分析和比较了诱导前后皮肤黏液的抑菌活性差异。利用Shotgun质谱技术,结合大弹涂鱼皮肤转录组数据库,对大弹涂鱼皮肤黏液开展了蛋白质组学分析;进一步利用String软件对所鉴定的蛋白质开展了蛋白质相互作用预测。大弹涂鱼皮肤黏液具有广谱抑菌活性,鳗弧菌诱导后的大弹涂鱼皮肤黏液与诱导前相比,对部分革兰氏阴性菌的抑菌活性明显上升,但对其他菌株的抑菌活性差异不明显。从大弹涂鱼皮肤黏液中共鉴定各类蛋白质分子97种,基本分子组成与其他硬骨鱼类皮肤黏液蛋白相似,但也有少数蛋白如泛素蛋白、胸腺素蛋白等未在其他鱼类皮肤黏液中报道。此外,其他鱼类中所鉴定到的部分蛋白如热休克蛋白、抗菌肽等在大弹涂鱼皮肤黏液中未能鉴定到。大弹涂鱼皮肤黏液中已鉴定的蛋白多数具有与免疫功能相关的结构域,且存在一个以肌动蛋白为核心的相互作用网络。大弹涂鱼皮肤黏液具有明显的广谱抑菌活性,其蛋白质组成与其他鱼类皮肤黏液具有一定的相似性。本研究为深入了解大弹涂鱼皮肤黏液的分子多样性及功能机制奠定了基础。

一种新型贻贝足丝抗氧化蛋白的原核重组表达及功能

贻贝足丝及其足丝蛋白相关研究对于开发新型水下生物粘附剂具有重要的仿生学意义。足丝蛋白在其粘附过程中需要维持一定的还原态,而目前已报道的足丝抗氧化蛋白仅有MFP-6。此前在厚壳贻贝足丝中鉴定到一种新型的富含半胱氨酸和甘氨酸的足丝蛋白质,该蛋白质被命名为Cys/Gly-Rich-Protein(CGRP),但是CGRP蛋白在足丝中的作用及机制尚不明确。为此,针对CGRP蛋白,在序列分析基础上,利用原核重组表达手段获得其重组蛋白质,采用2,2-联苯基-1-苦基肼基(2,2-diphenyl-1-picryl hydrazyl radical,DPPH)法检测CGRP重组蛋白经不同条件处理后的抗氧化活性。序列分析结果表明,CGRP蛋白含16. 5%的半胱氨酸和10%的甘氨酸,其序列中含有两段半胱氨酸位置保守的重复序列,结构预测表明,其优势构象以无规卷曲为主。同源蛋白质搜索结果表明,CGRP蛋白在数据库中尚无高同源性蛋白质存在。通过密码子优化结合原核重组表达策略成功表达出CGRP重组蛋白,所获得的CGRP重组蛋白具有明显的抗氧化活性,且该活性在其半胱氨酸还原后显著增强(0. 91±0. 05 vs 0. 71±0. 11,P <0. 01)而在半胱氨酸烷基化之后显著下降(0. 08±0. 03 vs 0. 71±0. 11,P <0. 01),表明CGRP蛋白的抗氧化活性与其序列中半胱氨酸的自由巯基有关。本研究提示,CGRP蛋白是足丝中一种新的具有抗氧化功能的蛋白质,在足丝粘附过程中推测与MFP-6一起参与了富含多巴的足丝粘附蛋白的还原态维持,对贻贝足丝在固化和粘附过程中防止提前粘附具有重要意义。

基于密码子优化策略的厚壳贻贝几丁质酶原核重组表达及功能

厚壳贻贝mytichitin-1是一种特殊的,可通过裂解方式产生抗菌肽的几丁质酶。对该酶的研究有助于了解贻贝的免疫防御以及几丁质酶的功能多样性机制。为深入研究厚壳贻贝mytichitin-1的结构与功能,采取原核重组表达方式,结合密码子优化策略,获得适于大肠杆菌表达体系的目标基因。通过表达以及表达产物的分离纯化,获得重组mytichitin-1蛋白。经过SDS-PAGE,western blot以及质谱验证,表明重组mytichitin-1序列无误,表达成功,在此基础上,对重组mytichitin-1开展了几丁质催化活性,几丁质结合活性和抑菌活性研究。研究结果表明重组mytichtin-1具有明显的几丁质催化活性和几丁质结合活性;同时重组mytichitin-1表现出对细菌和真菌的抑制活性,且对真菌的抑制活性相对较强。上述研究不仅成功表达出厚壳贻贝mytichitin-1,同时也为后续研究几丁质酶的功能多样性及其分子机制,以及基于厚壳贻贝几丁质酶的蛋白质工程和应用研究奠定了基础。

浅谈地质条件对煤层瓦斯赋存的影响

地质条件对煤层瓦斯赋存起着至关重要的作用,而成型的地质由多种要素构成,每一种要素都会对煤层瓦斯的赋存产生影响。主要从煤层掩埋的深度、煤层周遭的地质因素、煤块质量的好坏、煤层附近自然因素出现的岩浆活动、煤层自身的构造以及煤层附近的水质条件等因素,阐释分析地质条件对瓦斯赋存产生的影响,以期为预防煤矿事故提供相关的理论依据。

翡翠贻贝外套膜转录组及贝壳珍珠质层和肌棱柱层蛋白质组分析

贝类贝壳在生物材料学及仿生学研究中占据着重要地位。贝壳基质蛋白质是贝壳中的主要有机质成分,对贝壳的形成以及贝壳的力学性能至关重要。翡翠贻贝(Perna viridis)贝壳主要由肌棱柱层和珍珠质层两种微观结构组成,其结构层次较简单,是研究贝壳基质蛋白质及其与贝壳形成关系的极好材料。为深入研究翡翠贻贝贝壳基质蛋白质的分子组成以及分布特点,首先采用扫描电子显微镜,观察翡翠贻贝贝壳内表面珍珠质层和肌棱柱层的微观结构;采用刮取法获得贝壳内表面珍珠质层和肌棱柱层的粉末;对不同层次的贝壳粉末,利用酸溶法去除碳酸钙成分,所获得的有机质组分通过离心将其分为酸可溶性组分和酸不溶性组分。采用Illumina深度测序技术对翡翠贻贝外套膜组织进行大规模测序和序列组装,在此基础上,采用LC-MS/MS质谱技术结合外套膜转录组数据库搜索,对翡翠贻贝肌棱柱层和珍珠质层贝壳基质蛋白质开展组学分析。扫描电镜观察结果表明,翡翠贻贝贝壳有两种不同形貌结构的层次,其中珍珠质层为片状堆叠结构,而肌棱柱层为柱状结构。翡翠贻贝外套膜转录组测序共计获得69 859条Unigene。蛋白质组学鉴定结果表明,翡翠贻贝贝壳中总计鉴定到蛋白质54种,其中38种为肌棱柱层所特有蛋白质,3种珍珠质层特有蛋白质,另有13种在珍珠质层和肌棱柱层均被鉴定到。肌棱柱层特有蛋白质的分子多样性明显强于珍珠质层。上述研究为进一步探讨贝壳不同微观层次的形成机制,以及贝壳基质蛋白质对贝壳不同结构层次的调控作用机制奠定了基础。

厚壳贻贝足丝超氧化物歧化酶的重组表达及功能

为探明厚壳贻贝足丝中一种新型超氧化物歧化酶(Byssal superoxide dismutase,BSOD)类蛋白的结构与功能,对厚壳贻贝BSOD开展了序列分析并采用密码子优化结合大肠杆菌重组表达系统,开展BSOD重组表达以及表达产物的分离纯化和功能鉴定。序列分析结果表明,厚壳贻贝BSOD序列中含信号肽和典型的SOD结构域,属于分泌型SOD分子;其一级结构与数据库中已报道的其他物种SOD具有一定的相似性,但进化树分析结果表明厚壳贻贝BSOD是一种较为新颖的SOD分子,与水生甲壳类生物的胞外SOD同源。重组表达结果表明,重组BSOD主要通过包涵体形式表达。经复性后,重组厚壳贻贝BSOD具有明显的歧化酶酶活性;该活性在重组BSOD鳌合铜离子和锌离子后明显增强;且鳌合了铜离子和锌离子后重组BSOD对DPPH具有较强的清除率,表明BSOD是一种需要金属离子辅助的抗氧化蛋白。推测BSOD在足丝黏附过程中参与了其他富含多吧的足丝蛋白的保护以及还原态维持,并对贻贝足丝在固化和黏附前维持还原态具有重要意义。

木贼乙醇提取物对小鼠抗炎作用的实验研究

采用二甲苯致小鼠耳肿胀、甲醛致小鼠足肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强的实验方法,以地塞米松磷酸钠作为阳性药对照,研究木贼乙醇提取物高、中、低剂量(4.5g·kg-1、2.25g·kg-1、1.125g·kg-1)对小鼠的抗炎作用及其与剂量的关系.结果表明:与生理盐水组比较,各剂量组的木贼乙醇提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀、甲醛致小鼠足肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强均有抑制作用,而且随着浓度的增加抑制作用逐渐增强,其中高剂量组有显著性差异.因此,木贼乙醇提取物具有一定的抗炎作用,高剂量抗炎作用最佳.