新霉素单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株,用体内诱生腹水法制备NEOmAb;对NEOmAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,成功制备了BSA-NEO人工抗原;筛选出1E9、4E8、1G1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶2.56×103、1∶1.28×103、1∶5.12×103,腹水效价分别为1∶5.12×105、1∶2.56×105、1∶1.02×106,1G1亲和常数(Ka)为3.75×1010(L/mol);1G1株对NEO的IC50为2.57 ng/mL,NEO mAb对庆大霉素、链霉素、土霉素、环丙沙星、二氟沙星等无交叉反应。试验获得了抗NEO高价、敏感、特异的mAb,可用于NEO残留检测的免疫学试验。

磺胺甲噁唑残留检测阻断ELISA试剂盒的研制

在建立磺胺甲噁唑单克隆抗体（SMZmAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上，研制出SMZ残留快速检测试剂盒（SMZ—Kit），并对其性能进行了测定。结果表明，SMZ—Kit的标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R^2=0，9901，检测范围为1．0～128．0μg／L，灵敏度为0．73μg／L，半数抑制浓度（IC50）为11．5μg／L，检测限为1．0μg／L；饲料样、牛奶样的平均添加回收率为83．9％，83．3％，平均批内和批间变异系数均〈15％；SMZ—Kit与磺胺嘧啶的交叉反应（CR％）为2．88％，与其他磺胺类药物无交叉反应；试剂盒在4℃可保存6个月。

磺胺二甲氧嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

用重氮化法将SDM(磺胺二甲氧嘧啶)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SDM和包被原OVA-SDM,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌SDM mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SDM mAb;对SDM mAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,BSA-SDM人工抗原制备成功,分子结合比约为1∶12.1;筛选出1B43、D9、4E1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶3.2×102、1∶5.12×102、1∶8.1×102,腹水分别为1∶2.56×105、1∶2.56×1051、∶5.12×105,4E1亲和常数(Ka)为1.25×1010L/mol;4E1株对SDM的IC50为16.64ng/ml,与磺胺-6-甲氧嘧啶交叉反应率为5%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。本试验获得了抗SDM高价、敏感、特异的mAb,可用于SDM残留检测的免疫学试验。

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。

喹乙醇的危害及检测方法研究进展

喹乙醇是化学合成的喹噁啉类广谱抗菌药物,具有蛋白同化作用,可提高动物的饲料转化率与瘦肉率,促进动物生长。但是不规范使用喹乙醇不仅直接危害动物机体的健康,还能对人类健康造成极大的危害。就喹乙醇对畜禽、鱼类和生态环境等的危害以及目前喹乙醇残留的检测方法进行了综述。

抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用

【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定。【结果】SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng.mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1﹕1600、1﹕800、1﹕800和1﹕800,腹水效价分别为1﹕2.05×107、1﹕5.12×106、1﹕2.56×106和1﹕2.56×106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng.mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%。【结论】本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础。

新霉素人工抗原的合成与鉴定

用水溶性碳化二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(O-VA),合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE法进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-NEO的红外光谱与BSA相比发生了改变,BSA-NEO的电泳条带与BSA的相比出现了明显的拖尾现象;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为NEO残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究

【目的】制备磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SD)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测。【方法】用重氮化法将SD偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SD和包被原OVA-SD,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE法进行鉴定。用BSA-SD免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA法筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立SD mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SD mAb,对SDmAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】BSA-SD人工抗原制备成功,SD与BSA的分子结合比约为10.3∶1;筛选出6B5-E4、6B5-E9、3A5-B4和2H8-G5 4株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶810、1∶256、1∶512、1∶512,腹水效价分别为1∶(8.6×106)、1∶(2.5×106)、1∶(5×106)和1∶(5×106)。6B5-E4株对SD的半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L。SD mAb与磺胺一甲基嘧啶交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。【结论】获得了抗SD效价高、敏感、特异的mAb,可用于SD残留的快速检测。

磺胺喹恶啉人工抗原合成及鉴定

国内首次用重氮化法将磺胺喹恶啉(SQ)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原SQ-BSA和包被抗原SQ-OVA。紫外扫描法与SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定表明偶联成功,偶联比分别为10.1∶1、9.8∶1。将SQ-BSA免疫BALB/C小鼠,获得了高效价、敏感性好的抗SQ血清,表明ELISA方法鉴定偶联成功,为进一步制备抗SQ单抗奠定了基础。

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其免疫学鉴定

采用混合酸酐法合成SAL-BSA和SAL-OVA,用紫外法和凝胶电泳法鉴定,使用细胞融合技术建立沙丁胺醇杂交瘤细胞株,通过体内诱生腹水法大量制备沙丁胺醇高亲和力单克隆抗体。结果显示,所免疫的小鼠抗体效价均达到10^-4;融合后筛选出的3株杂交瘤细胞单抗亚型均为IgG1,细胞培养上清间接ELISA效价为1∶2.5×10^2-1∶1.02×10^3,用4D3E7细胞株制作的腹水效价为1∶5.12×10^5,对SAL的IC50为1.35μg/L,除与瘦肉精有10.8%交叉外,与其他β2-受体激动剂的交叉反应均小于0.2%。且具有较好的特异性。试验获得了高效价、敏感、特异的SAL mAb,为动物性食品中SAL残留的免疫学检测奠定了基础。

酶联免疫吸附技术在食品安全检测中的应用研究进展

介绍了酶联免疫吸附实验原理,阐述了该技术在食品安全检测中的应用研究进展。讨论了该技术的发展趋势及其应用前景。

游泳跳水馆泳池防水及泳池砖施工技术

西安奥体中心游泳跳水馆作为第十四届全运会游泳跳水项目主场馆,建筑总面积为104109 m^(2),建筑高度为29.05m,地下1层、地上4层,观众容量4000座,是集游泳、跳水、花样游泳、水球比赛及文化休闲活动于一体的多功能体育场馆,游泳馆要求具备举办国际、国内单项游泳、花样游泳、水球项目的比赛条件,并兼顾训练和对外经营开放的综合功能。整个场馆共有一个训练区一个标准训练池和一个短标训练池,设标准比赛区一个标准比赛池和跳水池,符合国际游泳比赛、花样游泳比赛、水球比赛的标准[1].

祛风止痛汤治疗痹证156例

目的 :探讨祛风止痛汤治疗痹证的疗效。方法 :采用祛风止痛汤 (寄生、杜仲、川断、川芎、白芷、土元、血藤、牛膝、葛根、蜈蚣、羌活、白术、双花等 )治疗痹证 1 56例 ,总有效率 91 % ;提示本方具有祛风止痛、活血通痹。

游泳跳水馆水处理系统施工技术

西安奥体中心游泳跳水馆项目,位于西安市国际港务区。北为柳新路,南为向东路,东侧为杏渭路,西为迎宾大道,建筑总面积为104109m^(2),建筑高度为29.05m,地下1层、地上4层,观众容量4000座,是集游泳、跳水、花样游泳、水球比赛及文化休闲活动于一体的多功能体育场馆,游泳馆要求具备举办国际、国内单项游泳、花样游泳、水球项目的比赛条件,并兼顾训练和对外经营开放的综合功能。整个场馆共有一个训练区一个标准训练池和一个短标训练池,设标准比赛区一个标准比赛池和跳水池各一座,符合国际游泳比赛、花样游泳比赛、水球比赛的标准。

预制清水混凝土看台应用与研究

预制清水混凝土看台板以其质量优良、美观大气、施工迅速、绿色环保等优势,成为未来高标准体育场馆建设和改造的首选方案。但是由于预制清水混凝土看台板工程应用案例较少,很多技术仍处在发展阶段,本文主要阐述了针对预制清水混凝土看台板各施工工序的整体施工方法。预制清水混凝土看台板依靠严格的施工工艺和科学的管理,采用一系列适宜的生产技术和质量控制手段,完成高品质精品构件的施工。

沙丁胺醇ELISA方法的建立及应用

为建立1种快速检测沙丁胺醇的ELISA方法,以制备的抗沙丁胺醇（salbutamol,SAL）高亲和力单克隆抗体为基础,从影响ELISA检测结果的因素出发,优化间接竞争ELISA条件。通过添加标准沙丁胺醇溶液进行验证。试验结果表明：ELISA反应的最佳反应条件：包被温度37℃,包被时间1 h,竞争时间0.5 h,包被质量浓度1μg/mL,抗体稀释度1∶32 000。在此条件下建立标准曲线。该方法对沙丁胺醇的检测线性范围为0.1~128μg/L,IC50为1.35μg/L,最低检测限（LOD）为0.2μg/L,添加回收率83.8%~89.7%,变异系数均小于11%。采用该方法检测喂药动物尿液中的沙丁胺醇残留,特异性高,适用于猪尿中沙丁胺醇残留的初步筛选。