《猪生产技术》新型活页式教材开发与应用

猪生产技术是高职畜牧兽医专业的核心课程,具有技术更新迭代快、实践操作复杂、实训教学难度大的特点。在相关教材资源匮乏的背景下,开发活页式教材,对推进《猪生产技术》课程的“三教”改革意义重大。本文基于《猪生产技术》新型活页式教材的开发路径及其实践应用,深入探讨了这类教材的开发策略,以及在“三教”改革中的实际价值和重要影响。

非洲猪瘟病原学特征及其疫苗的研究进展

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起家猪或野猪感染的一种高度致死性、急性、出血性传染病。2018年8月,中国首次报道非洲猪瘟疫情,对我国养猪业的危害极其严重。本文以ASFV为研究对象,分别从病毒的结构特点、主要病毒蛋白、传播途径、致病机理等方面归纳总结了ASFV的病原学特点,分析讨论了ASF灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗的研究现状,提出目前我国ASF疫苗研发所面临的各种挑战,为疫苗的研发提供新的认识和途径,为科学防控非洲猪瘟提供参考。

胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官发育的影响

本试验旨在研究胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官发育的影响。选用125只14日龄健康AA肉鸡,按体重、性别随机分为5个处理,每个处理25只。从第14天开始,对照组注射生理盐水,4个试验组分别通过胸大肌注射50、150、300、500μg/kg体重的胸腺五肽,1次/d,连续注射5 d。试验分别于用药5 d(19日龄)及停药5 d(24日龄)测定各组肉鸡的胸腺、脾脏和法氏囊的干湿比。结果表明:在19日龄,各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比无显著差异,但50、150μg/kg组肉鸡胸腺g干湿比显著高于300、500μg/kg组及对照组(P<0.05)。在24日龄,各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比仍无显著差异,而50、150μg/kg组肉鸡胸腺干湿比依旧显著高于300、500μg/kg组及对照组(P<0.05)。高剂量胸腺五肽(500μg/kg)并未对肉鸡胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏及肾脏造成损伤。综上所述,注射低剂量(50、150μg/kg)胸腺五肽可促进肉鸡胸腺发育,增强机体免疫,且对脾脏和法氏囊无不良影响。

猪PRRSV和PCV2混合感染的诊断及全基因组遗传进化分析

为查明某猪场病猪的死亡原因,对该场的典型病死猪进行病理剖检,无菌采集肺脏、肾脏、脾脏和淋巴结病料,提取核酸,进行荧光定量PCR检测和高通量测序,最后确诊该猪场的发病原因为PRRSV和PCV2的混合感染。对PRRSV和PCV2全基因组进行遗传进化分析,发现检测到的PRRSV属于VR2332-like亚群,与国内外26株参考毒株的核苷酸同源性为61.7%~99.8%;PCV2属于PCV2d基因型,与国内外31株参考毒株的同源性为54.7%~99.7%。

猫自发性膀胱炎诊治

猫自发性膀胱炎(FIC)常引起猫下泌尿道疾病(FLUTD),其约占FLUTD病例总量的55%~69%。自发性是指猫发生膀胱炎的病因并不明确,排除结石、感染、肿瘤等因素后,病因可能与饮食改变、饮水少,出现结晶尿、应激以及绝育后激素水平迅速下降有关。

猪腺病毒血清3型PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查

为建立一种猪腺病毒3型（PADV-3）的检测方法，本研究根据PADV-3E1B基因保守序列设计一对引物，建立了PcR检测方法。特异性试验结果显示，该方法仅对PADV．3扩增出247bp的目的片段。而对猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传染性胃肠炎、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、大肠杆菌、猪链球菌均无特异性扩增；敏感性试验结果显示，该方法对PADV-3最低检测量为3．7×10-5拷贝／μL。应用该方法对我国四川省23个规模化猪场进行流行病学调查，结果显示PADV．3阳性率达到14．72％，在腹泻猪群中阳性率为17．34％，并且显著高于非腹泻猪群（6．41％），PADV．3在保育猪群中感染率最高（26．32％），表明PADV．3在我国四川省猪群中广泛流行。本研究建立的PCR检测方法特异性强、灵敏度高，可以应用于猪群中PADV．3的流行性调查。

猪肠道杯状病毒研究进展

猪的腹泻病一直困扰着养猪业.特别是病毒性腹泻危害最为严重,它可以引起仔猪的死亡,成猪的掉膘,降低饲料报酬率等。在我国,对于诺如病毒和札幌病毒研究还处于起步阶段,对该病毒的进一步研究有利于疾病的治疗和疫苗的开发研究。文章旨在简述其对流行病学、致病机理、诊断方法等总结。

装配式建筑施工阶段安全风险因素识别方法选择研究

装配式建筑施工阶段风险因素多,易发生安全事故,对施工阶段安全风险因素进行精准快速识别,对安全管理具有积极的参考作用。该文运用WBS-R BS-G1分析法、熵权法、层次分析法三种方法,对装配式建筑施工阶段常见安全风险因素进行识别与对比研究,探究了不同识别方法在技术与管理风险问题中得到的风险权重结果差异及价值。通过在某装配式办公楼工程中的实际应用实证,认为应根据装配式建筑施工阶段的不同特点和因素,合理选择施工风险因素识别方法,精准快速得到识别结果,为装配式建筑施工安全管理提供决策支持。

猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称为＂猪蓝耳病＂,是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染而引起的一种病毒性传染病,以仔猪的呼吸道疾病和母猪生殖障碍为主要特征。该病发生以来,给世界各地区养猪业造成了不可估量的经济损失,蓝耳病已经成为集约化养猪的主要疫病之一。就目前PRRSV基因的多样性及我国现阶段主要流行的PRRSV基因变异情况作一个概述。1 PRRSV的发现猪繁殖与呼吸道综合征是猪的一种破坏性疾病,感染后可出现发热、呼吸系统和生殖功能的衰竭、母猪流产、公猪生精功能下降等症状并具有高度传染性。20世纪80年代,美国率先报道了一种新型猪群传染病。其临床表现为母猪严重繁殖障碍,断奶仔猪发生肺炎,生长迟缓,新生仔猪死亡率明显增加。当时该病的病因不明,人们通常称其为猪的＂神秘病＂。

猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称为"猪蓝耳病",是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染而引起的一种病毒性传染病,以仔猪的呼吸道疾病和母猪生殖障碍为主要特征。该病发生以来,给世界各地区养猪业造成了不可估量的经济损失,蓝耳病已经成为集约化养猪的主要疫病之一。就目前PRRSV基因的多样性及我国现阶段主要流行的PRRSV基因变异情况作一个概述。

猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立猪萨佩罗病毒（PSV）的检测方法,根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对针对PSV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PSV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PSV与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪嵴病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒区分开,特异性强。检测下限为6.37×10^2 copies/μL,比普通PCR敏感100倍,敏感性高。扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RTPCR的批内变异系数为0.44%～1.14%,批间变异系数为0.70%～1.32%,重复性较好。应用该方法对采集自四川省部分地区的58份有腹泻症状的猪粪便进行检测,实时荧光定量RT-PCR检测阳性率为56.9%,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的实时荧光定量RT-PCR特异性较强、灵敏度高,可用于该病毒的临床检测、定量分析及流行病学调查。

学校教育风险的类型划分与治理策略

学校教育风险类型包括教育教学中的风险、组织管理中的风险与考核评价中的风险。风险意识薄弱导致管理频现漏洞;危机处理缓慢导致舆情不断发酵;治理经验不足导致难以有效治理。本文针对以上问题提出治理策略:提高教育风险防范意识、建立校园风险应急预案、推进风险教育走进校园、强化风险的全流程管理。

猪流感病毒M2多肽抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测猪流感病毒抗体的血清学方法,利用合成的甲型流感病毒M2蛋白多肽作为包被抗原,建立了检测猪流感病毒血清抗体的间接ELISA,并对各种检测条件进行了优化。结果显示,优化后确定的抗原最适包被量为250ng/孔,血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000。在优化条件下,阴阳性临界值的判定标准为0.249。用建立的间接ELISA对CSFV、PRRSV、PCV2、PPV、PRV、FMDV、JEV阳性血清进行了检测,均无交叉反应。用该方法对280份冬季采集的猪血清样品进行检测,有60份样品呈现阳性;同时用IDEXX甲型流感病毒抗体检测试剂盒进行平行检测,有61份样品呈现阳性,两者的符合率达到98.35%。结果表明,建立的ELISA具有良好的敏感性、特异性和可信度。本研究为猪流感的诊断和流行病学调查提供了一种准确、快速、简便的方法。

猪腺病毒3型SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种针对猪腺病毒3型（PADV3）的检测方法,根据PADV3E1B基因保守序列设计1对引物,建立了检测PADV3的SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR。结果显示,该方法不能对猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传染性胃肠炎、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、大肠杆菌、猪链球菌2型检测到荧光信号,特异性好;检测PADV3时在3.7×10^2-3.7×10^9 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单一特异峰,无引物二聚体,熔解温度为90.5℃;该方法组内变异系数为0.17%-1.23%,组间变异系数为0.73%-2.23%,重复性较好。应用该方法对临床56份腹泻粪便检测,检出11份阳性,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。上述结果表明,建立的实时荧光定量PCR为PADV3感染的早期诊断、流行病学调查奠定了技术基础。

猪环曲病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

为建立快速检测猪环曲病毒(PToV)的RT-LAMP方法,根据GenBank中发表的N蛋白基因序列,设计合成4条特异性LAMP引物,通过敏感性试验和特异性试验,建立了PToV RT-LAMP检测方法,并对71份临床粪便进行了检测应用。结果显示,本试验建立的PToV RT-LAMP检测方法在65℃60min条件下可扩增出特异性梯状DNA条带,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪环曲病毒的核酸无交叉反应;检测极限为10copies/μL,比普通RT-PCR的灵敏度高10倍,表明该检测方法具有较强的特异性及灵敏性。用建立的RT-LAMP方法进行的样品检测结果显示,受检的71份样品中有17份检测结果为阳性,该结果与常规RTPCR检测结果吻合,总的阳性率为23.9%。

猪NF-κB真核表达载体的构建及转染Marc-145细胞对PRRSV增殖的影响

为研究猪细胞核转录因子-kappa B(NF-κB,p50/p65)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外增殖的影响,从猪外周血淋巴细胞扩增NF-κB p65ORF和p50RHD功能区,分别克隆至pcDNA3.1(+),经酶切及测序鉴定,获得pcDNA3.1(+)-p50-RHD及pcDNA3.1(+)-p65。将其转染至Marc-145细胞,Western-blot检测胞核内p50、p65的表达水平。pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)-p50-RHD、pcDNA3.1(+)-p65和pcDNA3.1(+)-p50-RHD+pcDNA3.1(+)-p65分别转染Marc-145,18h后接种PRRSV,采用实时荧光定量PCR检测培养上清病毒粒子增殖时相,绘制一步生长曲线。结果表明,成功构建了猪NF-κB p50、NF-κB p65真核表达载体,且可在Marc-145细胞中表达。转染p50+p65、p65真核表达质粒可加速PRRSV感染Marc-145细胞后CPE进程,抑制PRRSV增殖,极大降低病毒效价,且p50+p65抑制作用更强;转染p50质粒则推迟CPE出现,减缓PRRSV增殖,但对病毒效价影响不大。本研究结果表明,NF-κB p50/p65、p65/p65对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有一定的抑制作用。

亲环蛋白A对日本脑炎病毒体外复制能力的影响

为研究亲环蛋白A(CyPA)对日本脑炎病毒(JEV)体外增殖能力的影响,构建了真核重组质粒pcDNA3.1-CyPA,并将其转染至BHK21细胞内,接种JEV后于不同时间点收集细胞上清液,采用荧光定量RT-PCR检测各时间点的病毒含量,绘制体外增殖曲线;同时检测不同质量浓度的CyPA原核表达蛋白对JEV复制的影响。结果显示,加入CyPA原核表达蛋白组的上清中病毒含量均显著高于对照组。结果表明,CyPA可以促进JEV的体外复制,为进一步揭示CyPA在JEV感染和致病机制中的作用及JEV抗病毒药物的研发或疫苗的大量生产奠定了一定的理论基础。

猪环曲病毒N基因的克隆及生物信息学分析

为研究猪环曲病毒(PToV)N蛋白的生物信息学特征,运用RT-PCR技术扩增猪环曲病毒N基因,测序并对其进行生物信息学分析。结果成功获得了492bp的PToV N基因(GenBank登录号为KM036209)。经生物信息学分析,此序列编码163个氨基酸,理论等电点(pI)为12.14,理论分子质量为18 695.5u,不稳定系数为77.47;不同密码子对同一氨基酸选择上呈现一定的偏嗜性;最大疏水指数为1.589,最小疏水指数为-3.533;无信号肽和跨膜区;抗原表位主要位于N末端和C末端。预测其可能包含4个N-糖基化作用位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个N-豆蔻酰化位点。进化树分析结果显示,KM036209与韩国株和上海株亲缘关系很接近,与荷兰及西班牙株不属于同一分支。