连山香萸颗粒对人工感染鸡大肠杆菌的疗效试验

为探究连山香萸颗粒对鸡大肠杆菌的治疗效果,采用人工诱发鸡大肠杆菌病的病理模型进行试验。将SPF鸡180只随机分成6组,分别为空白对照组、阳性对照组、测试药物高、中、低剂量组和对照药物组,对照药物为地锦草颗粒,以治愈率和有效率为评价指标。结果显示,连山香萸颗粒高剂量组(4.0 g/L)、中剂量组(2.0 g/L)连续用药5天具有明显治疗效果,治愈率分别为76.67%、70.00%,有效率分别为93.33%和90.00%,与对照药物组相比差异显著(P<0.05),表明连山香萸颗粒可用于鸡大肠杆菌病的临床治疗。

真核表达载体pEGFP-N1-VP3的构建及在SGC-7901细胞中的表达和定位

构建真核表达载体pEGFP-N1-VP3并稳定转染人胃癌细胞SGC-7901,观察EGFP-VP3融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位,探讨凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。用PCR技术扩增出(凋亡素)VP3基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,鉴定无误后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-VP3经脂质体介导转染SGC-7901细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察凋亡素在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位。用AO/EB荧光染色法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应。经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入载体pEGFP-N1,稳定转染细胞中EGFP-VP3在肿瘤细胞中得以高表达,转染后逐渐从细胞质迁移至细胞核,最后定位于细胞核内。AO/EB荧光染色观察到大量细胞凋亡。成功构建真核表达载体pEGFP-N1-VP3,并成功培养出表达绿色荧光蛋白和凋亡素的SGC-7901稳定细胞株。EGFP-VP3融合蛋白在肿瘤细胞中具有核定位效应,并诱导肿瘤细胞凋亡。

澳大利亚与新西兰应对气候变化的新动向

澳大利亚与新西兰应对气候变化出现值得关注的新动向,专家建议政府加强气候变化研究,并广泛深入开展古气候、古地理研究以预测未来,进一步加强气候变化的防灾减灾力度等;为此政府制定永久性节水法规,降低用水标准,公布水体杀虫剂、除草剂的浓度安全标准;重新强调保护土壤的重要性,削减城市用地定额,建立严格的土壤安全标准。

美国离境外包经济动向的环境影响

最近美国离境外包经济发展很快,并引发继第一次产业革命(即工业革命)和第二次产业革命(即服务业超过制造业)之后的第三次产业革命,进而美国大批制造业向国外转移。这对我国承接制造业的产业转移是重大机遇,但同时也会遇到污染、能源转移的问题。建议我国抓住机遇,保持和发挥人力资源优势,迅速发展制造业,同时积极应对环境影响,分类管理,严格执法。

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用

根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。

分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70的构建及鉴定

目的用结核分枝杆菌热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)启动子改建分枝杆菌穿梭质粒pJEM11为分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70,并对其功能进行鉴定。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSP70启动子,克隆至pMD18-T载体,经鉴定后,再定向克隆入pJEM11的ApaⅠ位点与SnaBⅠ位点之间,构建pJHSP70载体,并对载体进行PCR及酶切鉴定,然后再将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)尿素酶B亚单位(urease B subunit,UreB)基因克隆入pJHSP70载体,评价其在耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M.smegmatis)mc2155中的表达情况。结果从BCG基因组中扩增出160bp的基因片段,所构建的穿梭质粒经酶切和PCR鉴定与预期结果一致。测序结果证实插入片段正确,UreB基因在M.smegmatis中成功表达。结论成功改建穿梭质粒pJEM11为穿梭表达质粒pJHSP70。

猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及NSP2和ORF5基因的变异分析

从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的NSP2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。

猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立

研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝。判定检测结果时不需要借助昂贵仪器设备,仅需加入1μL橙红色核酸染料就可以进行判断,颜色变绿判定为阳性,仍保持为橙红色判定为阴性。LAMP可以快速、直观、准确地检测PRRSV,是一种适合猪场现地应用的检测方法。

山东省规模化猪场PRRSV NSP2变异株的感染情况调查

为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)NSP2变异株的感染情况,2010～2011年本研究从山东省未免猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)疫苗猪场、免疫进口PRRS弱毒苗猪场和免疫国产PRRS弱毒苗猪场选择20个临床表观健康的规模化猪场,采集830份血清,利用RT-PCR方法对其进行PRRSVNSP2变异株病原学检测。结果表明山东省规模化猪场普遍存在PRRSV NSP2变异株感染,而且临床表观健康的未免疫PRRS疫苗猪场、免疫进口PRRS弱毒苗猪场及免疫国产PRRS弱毒苗猪场中PRRSV NSP2变异株的检出率由高到低,同一猪群中存在PRRSV NSP2变异株野毒和疫苗毒。

VP3和TRAIL基因共表达沙门菌载体对胃癌细胞生长作用的影响

目的:构建鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)VP3基因和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apopto-sis-inducing ligand,TRAIL)基因的真核表达载体,并观察其对胃癌细胞生长的影响情况。方法:采用分子克隆技术,将VP3基因插入真核表达载体pBud-TRAIL中,构建获得质粒pBud-TRAIL-VP3,采用电转化法将该重组质粒转入减毒沙门菌SL7207,再直接转染胃癌细胞株SGC-7901。48h后采用RT-PCR检测VP3基因表达状况并在荧光显微镜下观察细胞内有无绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达。MTT法检测重组菌株对SGC-7901细胞生长状况的影响。AO/EB荧光染色检测其对肿瘤细胞凋亡率的影响。透射电镜观察胃癌细胞形态改变。结果:获得VP3基因正确插入的真核表达载体;重组质粒经减毒沙门菌介导转染胃癌细胞后,RT-PCR检测到VP3基因存在;荧光显微镜下观察到在转染细胞内有GFP表达;转染48h后可见到TRAIL和VP3对胃癌细胞生长有明显抑制作用(P<0.05),荧光染色可见胃癌细胞有凋亡现象,pBud-TRAIL-VP3能够明显提高胃癌细胞的凋亡率(P<0.05),透射电镜观察到转染细胞发生凋亡形态变化。结论:减毒沙门菌可将外源基因VP3和TRAIL基因导入胃癌细胞并进行表达,TRAIL和VP3对胃癌细胞的生长起协同抑制作用并能促进胃癌细胞的凋亡。

互联网时代传统媒体的转型之路

互联网时代,传统媒体面临着越来越多的挑战,与新兴的互联网媒体公司进行业务、经营等方面的合作越来越成为传统媒体转型的重要方式。本文探讨分析了传统媒体与新兴的互联网媒体公司合作的具体模式,重点分析了传统媒体在合作过程中必须坚持的原则。

减毒沙门菌介导的TRAIL和VP3对胃癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的:利用沙门菌作为真核质粒携带载体,在体内外观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和鸡贫血病毒VP3基因对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:将重组质粒pBud-TRAIL、pBud-VP3、pBud-TRAIL-VP3电转化减毒沙门菌SL7207,经稳定性鉴定后直接转染胃癌细胞株SGC-7901,24h后利用荧光显微镜观察有无融合绿色荧光蛋白表达,MTT法检测表达载体对胃癌细胞的生长作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期变化,并用免疫组织化学方法检测该载体对胃癌细胞Caspase-3、Caspase-9表达的影响。荷瘤小鼠口服携带重组质粒的减毒沙门菌,8周后通过RT-PCR检测肿瘤组织内真核载体的表达状况,并测量荷瘤瘤体大小。结果:重组质粒能够在减毒沙门菌中稳定存在,经减毒沙门菌介导转染胃癌细胞后能够较好的表达,转染48h后可见到TRAIL和VP3对胃癌细胞生长有抑制作用,流式细胞仪观察到pBud-TRAIL-VP3能使胃癌细胞的凋亡率明显增高,TRAIL和VP3能够协同促进胃癌细胞Caspase-3、Caspase-9的表达。体内实验提示pBud-TRAIL-VP3沙门菌载体能够在肿瘤组织中表达并能抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论:减毒沙门菌将外源基因VP3和TRAIL基因导入胃癌细胞后,体内外实验证实该载体对胃癌细胞的生长起明显抑制作用,TRAIL和VP3联合作用机制与促进Caspase-3、Caspase-9的表达有关。

表达VP3重组减毒沙门氏菌的构建和融合蛋白纯化

寻求有效的肿瘤基因疗法,构建鸡贫血病毒VP3的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,并获得较纯的表达VP3基因的融合蛋白,初步研究其免疫原性。采用PCR技术扩增VP3基因,并将其与原核载体pET32α(+)重组。将重组后质粒转染E.coliBL21,得到表达VP3的融合蛋白,并将此蛋白通过50%的Ni+-NTA亲和树脂纯化。同时将重组质粒转染减毒沙门氏菌SL7207。经双酶切和PCR鉴定,成功构建了表达VP3的减毒沙门氏菌苗。融合蛋白通过50%的Ni+-NTA亲和树脂纯化,得到纯度在90%以上的纯化蛋白。成功构建了表达VP3的减毒沙门氏菌苗,并且获得纯化的表达VP3的融合蛋白,为进一步研究VP3的免疫保护作用及对抗肿瘤疫苗的研制打下基础。

多种勘察方法结合解决工程勘察问题分析

随着城市化进程的加快,基础设施项目和高层建筑也将增加。由于公共建筑的发展,有许多不同的方面,在传统的研究中,建筑的结构发生了重大变化。尸体的地质问题:特别是在确定未知的地下物体、洞穴及其位置、埋葬地点和埋藏深度方面。在工程过程中,使用测试方法解决技术问题是非常困难的。研究数据在设计过程中起着重要作用,例如工程过程中的岩土工程分析。然而,在目前的测试中,有许多案例没有标准化,这破坏了整个适应序列,降低了建设项目的质量。石材工程研究技术可以反映出一个非常系统的研究过程。本文研究了不同分析方法的组合。

用于外墙保温涂层的相变复合微骨料的制备及性能表征研究

将相变材料应用于轻质建筑围护结构外表面,可起到增大建筑热惰性的作用.以低温石蜡作为相变蓄热材料,采用真空吸附法与膨胀珍珠岩相结合,制备出石蜡-膨胀珍珠岩复合相变微骨料,再与环保涂料按照一定比例混合制成潜热蓄热型保温涂层.通过最佳配比量测试、SEM微观形态特征扫描、DSC相变热物性测试及红外波谱测试,对相变微骨料的相变过程、热物性及稳定性进行对比与分析.实验结果显示:1)相变复合微骨料的石蜡与膨胀珍珠岩最佳吸附比为1.9∶1;2)相变复合微骨料具有较高潜热蓄热性能;3)石蜡完全被膨胀珍珠岩吸附且没有空隙余留;4)相变复合微骨料具有很好的热物性和化学稳定性.因此,相变复合微骨料可作为一种热熔型保温基材与涂料混合构成新型外墙保温涂层.

单核细胞增多性李氏杆菌生物学特性的初步研究

为了明确单核细胞增多性李氏杆菌的普通生物学特性,对3株单核细胞增多性李氏杆菌标准菌株(L208、L128-9、219/60)进行增菌纯培养、染色镜检、药敏试验及生化试验等;结果表明该三株菌种的培养特性、形态结构、生物学特性基本与已发表的相关资料一致。但药敏实验的结果显示,这三株细菌对多数的抗生素敏感,仅对少数的特殊抗生素表现出耐药性,这与目前菌株耐药性的相关报道相差较大。该研究为以后参照本菌株进行其它相关的深入研究提供了必要的基础。

一种经济、有效、简便、可靠的污水处理技术——人造湿地系统

本文从特点、构造、荷载特性以及污水处理机制等方面简要地介绍了当前污水处理技术方面发展比较活跃的人造湿地系统(Constructed Wetlands)。文章最后指出,人造湿地系统是一种比较适合我国国情的经济、有效、无耗能、运行维护简便、可靠的污水处理工艺。

Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

自山东寿光地区疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织中分离到一株鸭肝炎病毒,命名为SG株DHV-Ⅰ。该病毒能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,该病毒第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2 mL,对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2 mL。全基因组序列比较分析发现,SG株DHV-Ⅰ基因组结构为5’UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3’UTR,与A型DHV-Ⅰ毒株的核苷酸同源性为94.9%~99.7%,氨基酸同源性为94.5%~99.7%,表明SG株DHV为一株A型DHV-Ⅰ强毒。

高效液相色谱——串联质谱法在蜂王浆高风险药物残留检测中的应用

蜂王浆作为一种天然保健品,备受国内外消费者青睐。随着国内外标准对蜂王浆中高风险药物残留限量要求的提高,对其检测技术的要求也越来越高。高效液相色谱--串联质谱(HPLC-MS/MS)以其快速、高灵敏度、高选择性等优点被广泛应用于蜂王浆高风险药物残留检测,在蜂王浆复杂基质中的痕量成分检测中发挥了独特的技术优势。本文综述了近十多年来HPLC-MS/MS在蜂王浆高风险残留检测中的应用和进展,并对其应用潜力和未来发展前景进行展望,以期为HPLC-MS/MS技术在蜂王浆高风险药物残留检测领域更好地推广应用提供参考。

市售瘦肉精三联快速检测卡质量检测

为评价和控制瘦肉精三联快速检测卡的质量，本试验配制系列标准添加浓度的猪尿样品，经UP-LC—MS／MS方法确证后，对6个厂家生产的瘦肉精三联快速检测卡的检测限、准确率进行测定，并与仪器方法进行比较。结果表明：大多数厂家生产的瘦肉精三联快速检测卡不完全与其标示检测限相吻合；实际检测阈值高于标示检测限的情况较多；6个厂家生产的检测卡都存在一定的假阴性率（2％～14％）和假阳性率（2％～8％）；与仪器方法进行比较发现两者的符合率介于75％～100％之间。总之，不同厂家生产的瘦肉精三联快速检测卡质量存在明显差异。