河豚鱼基因组细菌人工染色体文库的构建

目的研究模式生物——河豚鱼的基因组以及利用河豚鱼基因组"小而全"的特点研究人类基因组。方法以红鳍东方豚(Fugu rubripes)的精子DNA为材料,以pBelo BAC 11为载体,构建河豚鱼基因组的细菌人工染色体(bacterial artifi-cial chromosome,BAC)格式化文库(gridded library)。结果该文库包含23 040个克隆,分别保存在240块96孔细胞培养板中。经对100个随机抽样的克隆分析表明,插入片段平均大小为100 kb,因此,该文库相当于河豚鱼单倍体基因组(400Mb)的6倍,即6个库容量。酶切分析10个克隆证明,经100代繁殖其插入片段仍然稳定不变。结论该文库符合BAC基因组文库的所有要求。

脊椎动物基因研究的理想模式生物——河豚鱼

模式生物对于人类基因组研究具有重要意义。大肠村菌、线虫、果蝇、小鼠等模式生物在比较定位（ｃｏｍ－ｐａｒａｔｉｖｅｍａｐｐｉｎｇ）、比较测序（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、基因结构与功能的比较研究中起了重大作用。但前四者在形态学、个体发生、发育等方面与脊椎动物相差甚远，基因组差异很大，而小鼠的基因组都丝毫不比人的简单，理想的人类基因组模式生物应该具有小而简单且基因数目与人类接近的基因组。河豚鱼就是这样一种新的模式生物。其基因组特点是大小只有３００～４００Ｍｂ（为人类基因组的１／７～１／８），重复序列少且成簇排列，基因间序列少而小，内含子普遍比人的小，基因数目却与人的大致相当。河豚鱼作为脊椎动物基因组研究的模式生物在比较测序、基因分离、基因结构功能的研究、基因转移等方面有着极高的科学价值和广泛的应用前景。

基因直接转化植物小孢子方法的探讨

将带有ｇｕｓ报告基因的质粒ＤＮＡ用电激法转入小白菜的小孢子中，培养两天后，检测ｇｕｓ基因的表达，观察到Ｘ—Ｇｌｕｅ反应。

基于混沌映射的分组密码算法

提出一种新的混沌分组密码算法。该算法基于扩展Feistel结构将128 bit明文加密为128 bit密文。轮函数中的S盒由Logistic混沌映射产生,算法密钥由128 bit的初始密钥通过Cubic映射迭代生成。采用硬件描述语言VerilogHDL设计实现该算法,并用Modelsim对加解密过程进行仿真,实验结果证明其具有高灵敏度的S盒,密钥空间大,混乱和扩散性能好。

马铃薯体细胞融合及杂交技术的研究

在原生质体培养再生植株成功的基础上，进行了体细胞杂交技术的研究，比较ＴＰＥＧ化学融合３种方法的融合效率及对细胞的毒害程度，发现在轻微摇动的情况下，于原生质体悬浮滴上逐渐加入ＰＥＧ的方法效果最好。电融合试验结果表明：１．电融合以其高效、无毒害及简便易行等特点优于化学融合；２．应用国产的仅能输出尖波的电融合仪（ＤＲ—１型），利用渡金平行多电极（电极间距０，２ｍｍ，３０个齿为一组交叉排列，总面积为１８×１８ｍｍ２），用１．１ＭＨｚ，１２０—１５７峰－峰电压场强（Ｖｐｐ／ｃｍ）的交变电场处理２５～５０秒，用１．２５～１．５０ＫＶ／ｃｍ的直流高压脉冲电击６３０μｓ左右，对大多数基因型可获得４０％—８０％的融合率和２０％以上的细胞分裂率；３．在电融合液中加入高浓度的Ｃａ２＋对融合有明显抑制作用；４．融合效果与两亲本亲缘关系的远近有关。

疾病相关基因克隆的意义与技术

疾病相关基因克隆的意义与技术杨焕明张秀清刘山鸣莫建洪刘国仰（中国医学科学医基础医学研究所中国协和医科大学基础医学部，北京１００００５）ＡＢＳＴＲＡＣＴＴｈｅ１９９０’ｓｈａｓｗｉｔｎｅｓｓｅｄｔｈｅ＂ｇｏｌｄｅｎａｇｅ＂ｏｆｈｕｍａｎｍｅｄｉｃａｌｇ...

河豚鱼基因组格式化粘粒文库的构建

目的构建河豚鱼基因组文库，为人类基因组的研究提供资料。方法以红鳍东方豚的精子ＤＮＡ为材料，采用含有“外显子捕获”元件的粘粒（ｓＣＯＧＨ２）作为载体，构建河豚鱼的基因组粘粒文库。结果该文库共有５７６００个克隆，分别被保存在６００块９６孔细胞培养板中，插入片段的大小平均为３５ｋｂ，相当于５．０个库容量，即从本文库中筛选到河豚鱼基因组任一单拷贝序列的机率为９９．２％。该文库能承受１０次以上的反复冻融，重组粘粒克隆在传代中仍保持高稳定性。以河豚鱼基因组ＤＮＡ为探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，结果显示出强阳性的杂交信号。结论该文库符合粘粒文库的质量要求。

利用外切酶Ⅲ建立次级亚克隆测序系统

外切酶Ⅲ（ＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅⅢ）具有从非４个碱基３’凸端逐个降解核苷酸及在一定的温度条件下降解速率恒定的两大特点。这使其已被广泛应用于构建各种亚克隆以满足测序、表达等不同的实验目的。

一个复合短串联重复序列的分离

ＳｈｏｒｔＴａｎｄｅｍＲｅｐｅａｔｓ（ＳＴＲ）即短串联重复序列，已广泛应用于连锁分析和致病基因的定位克隆等方面。近年来发现可表达的三核苷酸重复单位拷贝数的扩增在导致人类某些遗传病的可能作用，使重复序列的研究更受重视。本文采用自行设计的可筛选基因组中所有可能三核苷酸ＳＴＲ的“三联体”兼并寡核着酸探针来筛查５号染色体短臂区域部分Ｃｏｓｍｉｄ克隆中可能存在的三核苷酸ＳＴＲ。经过多次Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、酶切、亚克隆的方法，得到一复合ＳＴＲ。