压力对大鼠BMSCs增殖及成软骨能力影响

目的:通过观察静压力刺激对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖及成软骨能力的影响。方法:全骨髓贴壁分离法分离大鼠BMSCs,经表面标志物检测和成脂、成骨诱导分化鉴定后,随机分为0(对照组)、90、120、150 kPa 4个大组;每一大组按每天加载持续时间再分为1 h/d和6 h/d 2个亚组。然后在细胞液压加载装置内分别给予相应的静压力刺激,分别于实验后2、4 d时用RT-PCR检测BMSCs成软骨相关基因SOX-9、Aggrecan、Col-Ⅱ以及细胞增殖基因PCNA mRNA表达水平。结果:相同加压条件下不同时间比较,连续压力刺激2 d时BMSCs增殖基因及成软骨基因的表达量均明显高于4 d组(P<0.05)。同样在连续加压2 d时间点内,每天加压1 h组BMSCs的增殖基因及成软骨基因的表达量均明显高于6 h组(P<0.05),其中,每天压力刺激1 h连续2 d的条件下90 kPa压力组的PCNA、SOX-9、Aggrecan、Col-ⅡmRNA的表达均显著高于相同刺激时间的120 kPa和150 kPa压力刺激组(P<0.05)。结论:在诸多压力刺激条件中,90 kPa静压力每天1 h连续作用2 d促BMSCs增殖与成软骨向分化作用最显著。

P38MAPK/NF-κB信号通路在压力调控BMSCs/PRF双膜复合体成软骨响应中作用的研究

目的本课题组前期观察到120 KPa每天1 h压力刺激可以促进BMSCs/PRF新型软骨组织工程双膜复合体移植物中BMSCs细胞的增殖和成软骨分化,但其分子机制不明。本实验即从分子生物学角度出发,研究压力刺激兔BMSCs/PRF双膜复合体后BMSCs中P38MAPK和NF-κB信号相关分子的表达,探讨P38MAPK和NF-κB在压力调控兔BMSCs/PRF成软骨响应过程中的具体作用及其信号途径。

光动力疗法根管消毒效果的评价

目的:评价新型光动力抗菌化学疗法(PDT)的根管消毒效果。方法:取新鲜拔除的牛下颌切牙,垂直于牙体长轴将根管切割为冠方、根中及根尖三部分,高压灭菌后固定于培养皿中。冠方、根中1/3样品中加入粪肠球菌(TACC29212)混悬液建立根管感染模型,根尖1/3加入等量的无菌培养基,作为无菌对照。根中1/3标本只进行细菌接种而不进行根管消毒,作为阳性对照;冠方1/3的标本随机分为5组(n=10),分别经30 g/L次氯酸钠液消毒30 s、PACT 200系统消毒4 min及6 min、单独激光照射6 min、单独光敏材料作用6 min后,根管样品纵向剖开,自根管内壁向外0.5 mm处切取新鲜牙本质碎屑,常规琼脂铺板计数,以根中1/3集落形成单位(CFU)为阳性对照,计算抗菌率。结果:新型光动力疗法PACT 200系统消毒6 min可达到73.47%±5.36%的抗菌率,与次氯酸钠组(81.38%±5.26%)(P>0.05);而PACT 4 min组仅达到50.23%±4.34%的抗菌率,显著低于PACT 6 min组和次氯酸钠组(P<0.05);单独激光和单独光敏组均无明显抗菌作用。结论:PACT 200系统消毒6 min可有效杀灭感染根管模型内的细菌,有望成为感染根管消毒的新方法。

持续及周期流体静压力对大鼠BMSCs增殖及凋亡的影响

目的:通过观察持续及周期静压力刺激对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖和凋亡的影响,以期为软骨组织工程研究中力学加载方式的选择提供实验依据。方法:全骨髓贴壁分离法分离大鼠BMSCs,经表面标志物检测后,分为对照组(control)、持续流体静压力45Kpa组(45Kpa)、周期流体静压力45Kpa组(0～45Kpa)、持续流体静压力90Kpa组(90Kpa)及周期流体静压力90Kpa组(0～90Kpa),压力加载时间1h,连续加压2天,周期流体静压力的频率为0.1Hz。流式细胞术检测细胞周期和凋亡,激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架。结果:90Kpa及0～90Kpa流体静压力作用下细胞增殖指数显著高于对照组(P<0.05);BMSCs加载45Kpa、0～45Kpa、90Kpa及0～90Kpa流体静压力后,细胞骨架光密度值显著高于对照组(P<0.05);90Kpa及0～90Kpa流体静压力可导致细胞凋亡(P<0.05),其中90Kpa持续流体静压力中细胞凋亡率与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结论:高强度周期流体静压力可促进细胞增殖,而高强度持续压力则导致细胞凋亡,低强度周期压力可促使细胞骨架重组。

不同根管封闭剂对根管治疗术后疼痛影响的临床观察

目的:观察分别使用AH-Plus和iRoot SP作为根管封闭剂对根管治疗术后疼痛的影响,以期降低根管治疗术后疼痛的发生。方法:选取2018年1月-2019年10月在笔者医院口腔科就诊需要根管治疗的患者140例,随机分为AH-Plus组和iRoot SP组,冷侧压法根管充填。对两组患者术前、术后0~6h、6~12h、12~24h、24~48h、48~72h、7d疼痛程度和根充情况进行比较。术后疼痛程度采用数字疼痛评分法(NPRS),采用SPSS19.0软件对每组数据进行两独立样本秩和检验进行统计分析。结果:iRoot SP组完成根管治疗术后24~48h、48~72h、3~7d三个时间段的疼痛程度显著低于AH-Plus组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患牙根管充填恰充率分别为93.6%和89.2%,无显著性差异。结论:采用冷侧压法根管充填,iRoot SP比AH-Plus会带来更少的根管治疗术后疼痛。

周期性流体静压力对BMSCs细胞增殖活性及超微结构的影响

目的:观察周期性流体静压力作用下骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Stem cells,BMSCs)细胞增殖活性及超微结构的改变。方法:贴壁法分离培养大鼠BMSCs。采用自主研发的流体静压力加载装置对大鼠BMSCs进行力学加载,加载压力为0~45kPa、0~90kPa,加载频率为0.1 Hz,时间1h,连续加载2d。对照组细胞不加压。采用CCK8法检测细胞的增殖活性,采用透射电镜观察大鼠BMSCs超微结构的变化。结果:0~45kPa、0~90kPa周期性流体静压力作用下BMSCs增殖活性显著高于对照组(P<0.05),透射电镜下观察发现,0~45kPa作用下BMSCs细胞内质网轻度扩张,胶原合成量增加。而0~90kPa作用下细胞出现了大量胶原及凋亡小体。结论:适宜的周期性流体静压力作用下可提高细胞的增殖活性,但过高的压力刺激可诱导细胞产生凋亡。

周期性流体静压力对牙周膜干细胞分化的影响

目的观察周期性流体静压力对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)分化的影响。方法酶消化法分离人牙周膜细胞,采用单克隆法分离hPDLSCs。流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,结晶紫染色观察hPDLSCs克隆形成。hPDLSCs成骨、成脂诱导分化后采用茜素红、油红O染色,观察hPDLSCs的多向分化能力。利用自主研发的力学加载装置,对PDLSCs加载0~120 kPa的周期性流体静压力7 d,采用Real-time PCR检测hPDLSCs中过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)、抗Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子(Scleraxis)及牙骨质蛋白1(CEMP1)的表达量。结果单克隆法分离的hPDLSCs高表达干细胞表面标志物CD90(95.2%)、CD105(95.5%),而低表达CD45(1.3%)、CD34(1.36%)。hPDLSCs具有克隆形成能力,并且成骨、成脂诱导后细胞出现红色钙结节和脂滴。经周期性力学刺激后,hPDLSCs中Scleraxis的表达显著高于对照组,而PPAR-γ、Runx2及CEMP1的表达与对照组相比无显著差异。结论周期性力学刺激可以维持hPDLSCs向牙周膜韧带成纤维细胞分化的潜能。

键槽缓压式附着体在中老年牙列缺损修复中的应用及疗效观察

目的:探讨牙列缺损的中老年患者用键槽缓压式附着体修复的临床效果。方法:对33例牙列缺损病例进行键槽缓压式附着体修复设计,临床随访与观察。结果:33例中老年患者应用键槽缓压式附着体制作义齿,随访4年,义齿获得良好的支持稳定效果,基牙无松动脱落且患者美观及咀嚼功能恢复良好,得到满意的疗效。结论:键槽缓压式附着体义齿是修复中老年牙列缺损的有效的临床方法之一。

根尖屏障技术治疗难治性根尖周炎的临床效果

目的观察iRoot BP Plus根尖屏障技术治疗成人难治性根尖周炎的临床效果。方法选取2017年1月~2019年8月来我院口腔科需根管再治疗的患者作为研究对象,共需根管再治疗患牙59个,随机分为试验组(30个)和对照组(29个),两组均常规去除原充填物,超声荡洗根管,机用镍钛锉预备至06/25#,试验组扩大根尖孔至大于30#,根管内封VITAPEX糊剂消毒,以iRoot BP Plus严密充填根尖段5 mm根管,热牙胶充填上段根管;对照组不扩大根尖孔,AH-PLUS加热牙胶充填根管;比较两组临床效果。结果术后3个月,试验组成功率为76.67%,对照组为48.28%,差异有统计学意义(P<0.05);术后半年,试验组成功率为73.33%,对照组为44.83%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用iRoot BP Plus根尖屏障技术治疗成人难治性根尖周炎可获得较为满意的疗效,值得临床应用。