凝血指标与肝硬化患者肝功能分级的相关性研究

目的:探究凝血相关指标与肝硬化患者肝功能损伤程度和伴发腹水的相关性。方法:收集2020年8月-2022年4月于包头医学院第一附属医院消化科就诊的92名肝硬化患者临床资料,按照Child-Pugh分级、MELD评分、有无腹水对肝硬化患者进行分组;检测凝血相关指标,包括凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、凝血酶原活动度(prothrombin activity,PTA)和国际标准化比值(international normalized ratio,INR)。结果:健康对照组、低MELD组、肝硬化无腹水组PT、APTT、TT、INR低于肝硬化组、高MELD组、肝硬化伴腹水组(P<0.05),PTA、FIB高于肝硬化组、高MELD组、肝硬化伴腹水组(P<0.05);Child A级组、B级组PT、APTT、TT、INR低于C级组,PTA、FIB高于C级组(P<0.05),且A级组、B级组PT、PTA、APTT、TT、FIB、INR差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:凝血相关指标与肝硬化患者肝功损伤程度相关,且对是否发生腹水有一定预测价值。

某纯电动客车差速器损坏分析与优化

测试过程中发现某纯电动客车在高低附对开路面急加速时,后桥差速器传动失效。本文找出其失效原因,并通过增加速差保护功能解决该问题,最后通过实车验证。

青海血蜱重组蛋白Hq001的结构预测与原核表达

目的对从青海血蜱唾液腺cDNA文库中克隆出的1个新基因Hq001编码的蛋白质进行三维理论模型预测,并评估其与Kunitz型蜱源抗凝血蛋白质之间的关系。方法构建重组质粒pET-30a-Hq001并转化至感受态大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,对目的蛋白进行重组表达。使用开源软件AlphaFold v2对去除信号肽的Hq001氨基酸序列进行三级结构预测,以此得到三维理论模型。并使用开源软件GROMACS v2023对三维理论模型进行分子动力学(MD)模拟优化,应用ANOLEA和MolProbity等工具对模型质量进行评价。结果由Hq001构建的重组表达质粒pET30a-Hq001在E.coil BL21中表达后以包涵体形式存在。序列比对与结构建模结果均表明Hq001蛋白具有典型双Kunitz-BPTI型结构域,并与Bikunin、Boophilin、Ornithodorin、Ixolaris等具有抗凝血活性的KunitzBPTI型蛋白具有序列及结构相似性。经过1 ns的分子动力学模拟优化后理论模型均方根偏差在3?左右达到平衡,选取其中能量态最低的结构模型(总能量=-20716640 kJ/mol)作为最终模型。结论蛋白质三维理论模型证实Hq001蛋白具有保守的Kunitz-BPTI型结构域,与来自微小扇头蜱的Boophilin在序列与结构上均较为相似,Hq001蛋白可能具有Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂相似的结构与功能。

青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白表达及纯化条件的优化

目的对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化。方法将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[E.coil BL21(DE3)、E.coil Rosetta(DE3)、E.coil ArcticExpress(DE3)pRARE2],确定最适表达菌株后,对IPTG终浓度(0、0.5、1.0 mmol/L)、诱导温度(20、25℃)及诱导时间(0、2、4、6、8 h)进行优化。最佳诱导条件表达的菌体经高压均质破碎后,采用非变性(变性-复性-过柱)及变性(变性-过柱-复性)两种方式进行Ni-NTA亲和层析纯化。表达及纯化产物均经12%SDS-PAGE分析。结果重组Hq001蛋白最适表达菌株为感受态E.coil BL21(DE3);最适诱导条件为:IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间4 h。非变性纯化方式可获得相对分子质量约为18800的目的蛋白,大小与预期相符。结论采用优化的表达条件及纯化方式可获得青海血蜱唾液腺重组rHq001蛋白。

蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制分子的结构与功能研究进展

蜱是一类体外吸血寄生虫,在吸血过程中蜱会向宿主体内释放多种抗凝血物质以保证血液的供应。其中含Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗凝血作用中占主要地位。不同的Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂具有相似的保守序列,但总体结构不同,在凝血级联中通过抑制丝氨酸蛋白酶类的凝血因子而阻断下游凝血因子的活化,以达到抑制凝血的效果。蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂在凝血系统中的靶点繁多且抑制机制各异。本文对该类蛋白酶抑制剂的抗凝靶点及作用机制进行归纳,有助于抗凝和抗血栓药物的研发,同时进一步解释蜱与宿主间的相互作用以及蜱源抗凝药物的药理作用,为预防蜱对宿主的侵害提供参考资料。