携带人尿激酶原cDNA的重组腺病毒载体的构建及其在体内的表达

目的 构建表达人尿激酶原的重组腺病毒载体,为临床基因治疗提供实验依据。方法 采用亚克隆获得的pCA14-pro-UK重组质粒与质粒pJM17共转染培养的293细胞,经同源重组,得到含有pro-UKcDNA的重组腺病毒。扩增纯化后,局部转染经球囊损伤后的兔股动脉。7d后,分别收集转染的血管段和对照血管段,以Western印迹和免疫组化检测表达。结果 (1)经PCR扩增及体外感染A549细胞结果表明,获得了具有生物活性的含人pro-UKcDNA的重组腺病毒;(2)重组腺病毒的滴度为1×109噬菌斑形成单位/ml(PFU/ml);(3)免疫组化及Western印迹分析显示:重组腺病毒能在损伤的兔股动脉内膜表达尿激酶原。结论 构建得到的携带人尿激酶原cDNA的重组腺病毒能在损伤血管部位表达。

PTCA术后再狭窄的基因治疗

1977年,瑞士科学家 Grüntzig 完成了世界首例 PTCA,经过近20年的发展,由于新技术的应用和经验的积累,PTCA 技术已在提高成功率及降低急性并发症方面取得了令人瞩目的成绩。但其术后的再狭窄却依然是困扰该技术应用的主要难题。所谓再狭窄,(Restenosis,RS),即是 PTCA