2020-2022年广州地区副溶血性弧菌病原学特征分析

目的了解广州地区副溶血性弧菌的血清型、毒力基因和分子特征,为副溶血性弧菌疾病的防控提供科学依据。方法对2020-2022年收集到的副溶血性弧菌菌株进行血清分型、毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE),并使用国家致病菌识别网的比对功能进行同源性分析。结果收集到132株副溶血性弧菌,其中50.8%(67/132)的菌株血清型为O10:K4,其次为O3:K6(34.8%,46/132);毒力基因结果显示所有的菌株tlh基因阳性(100.0%,132/132),有130株tdh基因阳性(98.5%,130/132),2株trh基因阳性(1.5%,2/132);PFGE聚类分析发现菌株可分为31个PFGE型别,菌株间相似值为23.54%~100.00%,有6个集中聚类。结论广州地区副溶血性弧菌引起的食源性疾病以O10:K4和O3:K6血清型为主,大多数菌株携带tdh基因,PFGE图谱提示基因多样性。

广州市输入性蚊媒传染病流行病学特征分析

目的分析广州市输入性蚊媒传染病的流行病学特征,为输入性蚊媒传染病的健康教育和健康干预提供科学依据。方法在“中国疾病预防控制信息系统——传染病报告信息系统”收集2005年1月至2019年9月广州市输入性蚊媒传染病的数据,进行描述性流行病学分析。结果2005—2019年广州市输入性蚊媒传染病1509例,登革热占总输入性蚊媒传染病病例数的50.23%,疟疾占48.24%,基孔肯雅热占1.12%,寨卡占0.33%。男性占75.94%,女性占24.06%。20~45岁为主要发病人群,占75.48%。职业分布,患病例数排名前5位:工人占13.52%,家务及待业者占1.93%,干部职员占7.62%,学生占4.17%,离退人员占2.52%。地区分布,亚洲的其他国家占51.82%、非洲占44.66%,是广州市输入性蚊媒传染病主要来源。结论广州市输入性蚊媒传染病的主要病种为登革热和疟疾,感染人群以男性、青壮年和工人为主,主要来源地为亚洲其他国家和非洲。在今后输入性蚊媒传染病防控工作中,应根据发病人群特点,加强健康干预,为相关防控工作提供依据。

2013年广州市即食食品微生物的污染情况

目的了解广州市即食食品的卫生状况,为卫生监督部门提供准确有效的方向,以预防食源性疾病的发生。方法根据2013年国家食品安全风险监测计划及广东省食品安全监测方案的要求,对全市12个区、县级市包含三类产品432份即食食品样本进行检测。结果 2013年广州市即食食品的污染问题比2012年更为严重,有近3倍的增长,其中最严重的是中式凉拌菜,合格率仅为10.0%;菌落总数、大肠菌群超标现象普遍,合格率只有17.2%;致病菌检出金黄色葡萄球菌11株,副溶血弧菌和创伤弧菌各6株,致泻大肠埃希氏菌5株,单增李斯特菌3株,沙门氏菌1株。结论食品清洁度指标超标情况严重,容易发生食源性疾病,应加强监督管理。

广东省两市熟肉制品微生物污染状况比较分析

目的了解比较广东省两市熟肉制品的微生物污染状况,一定范围内了解各城市熟肉制品的卫生质量差异。方法对2个城市的城区及乡镇大中型超市、集贸市场、食杂店的熟肉制品进行随机抽样,所抽取样品均按国家标准进行检验。结果 A城市与B城市的检出率差异有统计学意义(χ2=5.58,0.025>P>0.01),本次抽取的样品中检出2株沙门氏致病菌,均由B城市检出;在多个销售渠道中,集贸市场检出率最高,为76.3%;而城区与乡镇的检出率差异有统计学意义(χ2=5.22,0.025>P>0.01),乡镇高于城区。结论 2市熟肉制品微生物污染严重,应加强卫生监督管理。

广州市食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药分析

目的了解广州地区食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌产肠毒素和耐药性情况。方法按食品安全国家标准和相关文献对2010-2016年广州市疾病预防控制中心微生物实验室从食品和食物中毒样品中分离并保存的118株金黄色葡萄球菌进行了肠毒素和药敏试验。结果 118株金黄色葡萄球菌有70株产肠毒素,产毒率为59.32%,快餐类食品和食物中毒样品的产毒率偏高。以荧光PCR方法对70株肠毒素阳性的菌株进行肠毒素A-E分型,其中SEA检出率为29.20%、SEB 17.70%、SEC 11.50%、SED 15.93%、SEE 25.67%;携带两种或以上毒力基因的产毒菌株占41.42%。在受检的菌株中,有104株菌不同程度的对一种或多种的抗生素有抗性,占88.14%;青霉素G耐药率高达71.19%;检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)5株,占4.24%,mec A耐药基因检测阳性。结论广州市食源性金黄色葡萄球菌中产肠毒素菌株较多,且存在耐药株,甚至MRSA,应加强对广州市食品安全风险的监管。

2015年-2016年广州市食品中食源性致病菌监测结果分析

目的了解广州市市售食品中食源性致病菌的污染状况,为食源性疾病的监测和预警提供科学依据。方法2015年-2016年对广州市6类共计2 044份食品样品,依据《广州市食品安全风险监测工作手册》的要求,进行金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌5种致病菌的检测和分析。结果在2 044份样品中检出致病菌241株,总检出率为11.79%。水产品致病菌检出率为59.10%,生鲜肉为7.28%,焙烤食品为7.24%,即食食品为5.83%,快餐或小摊食品为5.29%,熟肉制品为4.32%。副溶血性弧菌检出率高达56.36%,其次为蜡样芽胞杆菌(3.68%)、金黄色葡萄球菌(1.56%)、单核细胞增生李斯特菌(1.13%)、沙门菌(0.49%)。结论广州市食品存在食源性致病菌污染,应有针对性地加强食品监督管理,以减少可能引起食源性疾病的因素。

猪链球菌2型感染胶体金诊断方法的研究

目的建立猪链球菌2型感染胶体金快速诊断方法。方法选择猪链球菌在进化上极为保守的蛋白谷氨酸脱氢酶的编码基因gdh作为研究靶基因,对其进行克隆、表达和纯化,应用硝酸纤维膜包被纯化的目的蛋白,运用胶体金溶液与生物大分子金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合制备SPA金标探针建立猪链球菌2型感染的胶体金快速诊断方法。结果胶体金检测标本阳性结果试纸条上出现两条红色条带,阴性结果试纸条上只有一条靠近吸水端的质控线出现红色条带,对370份标本进行检测,其中320份阴性结果,50份阳性结果。结论运用胶体金免疫层析技术可以快速诊断猪链球菌2型感染。

2015—2016年广州市食品中副溶血性弧菌的分子流行病学特征和耐药性

目的了解2015—2016年广州市食品中副溶血性弧菌分离株的血清分布、毒力基因携带情况、耐药性以及分子流行病学特征,为广州市副溶血性弧菌疾病的防治和溯源提供实验室数据。方法收集2015—2016年广州市市售食品中分离出的副溶血性弧菌20株,对其进行血清学分型、多重荧光聚合酶链式反应(PCR)检测毒力基因和药物敏感性试验,以及和56株同时期收集到的人群分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)聚类分析。结果食品中的副溶血性弧菌血清型呈现多样性,无优势血清型;毒力基因携带率较低,只有一株检出了tdh基因;药物敏感性试验显示对氨苄西林(100%)和头孢噻吩(80%)有较高的耐药率;PFGE试验显示食品分离株的基因差异较大,总相似度为43.7%,食品分离株和人群分离株的同源性较低。结论 2015—2016年广州市食品中的副溶血性弧菌血清型和基因型复杂多样,和人群分离株差异较大,对一些常用抗生素耐药率较高,需加强菌株的耐药检测。

2018年广州地区水产品中致病性弧菌的污染调查及其毒力基因检测

目的了解4种致病性弧菌(副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌)在广州地区水产品中的污染状况及其毒力基因特征,为广州地区食源性疾病的溯源提供数据支持。方法参照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中的致病性弧菌的检测方法进行样品的采集和检验。结果2018年广州地区水产品中副溶血性弧菌检出率(47.22%,102/216)最高,其次分别为溶藻弧菌(36.11%,78/216)、创伤弧菌(8.80%,19/216),河弧菌检出率最低(6.48%,14/216),4种致病性弧菌检出率差异有统计学意义(χ^(2)=142.134,P<0.05)。在动物性淡水产品和动物性海水产品中,溶藻弧菌检出率之间差异有统计学意义(χ^(2)=6.502,P<0.05)。溶藻弧菌在动物性淡水鱼和动物性海水鱼之间检出率差异有统计学意义(χ^(2)=10.409,P<0.05)。对102株副溶血性弧菌进行毒力基因检测发现,2株菌株表达tdh基因,所有的分离株均表达tlh基因,均不表达trh基因。结论广州地区水产品受到致病性弧菌污染严重,特别是副溶血性弧菌和溶藻弧菌,应加强监测,预防食源性疾病的发生。

以重组融合蛋白为基础的钩端螺旋体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的初步研制

目的建立以钩端螺旋体融合蛋白LipL32-LipL41(LipL32:脂蛋白L32,lipoprotein32;LipL41:脂蛋白L41,lipoprotein41)为包被抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂。方法选择问号钩端螺旋体LipL32和LipL41作为研究靶标,采用连接引物PCR法构建lipL32-lipL41融合基因,原核表达获得重组蛋白,以该蛋白为包被抗原建立ELISA检测体系,对检测体系的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标进行评价。结果扩增获得了1 900 bp左右的lipL32-lipL41融合基因,原核表达出了90 kDa左右的重组融合蛋白LipL32-LipL41,建立了基于LipL32- LipL41的ELISA检测体系,采用77例确诊病例和85例阴性对照血清进行初步验证,检测体系的灵敏度为96.1%,特异度为97.6%,粗一致性为96.9%,约登指数为0.937。结论以LipL32-LipL41重组融合蛋白为包被抗原建立ELISA免疫检测初步验证的灵敏度、特异性和稳定性较好,可进行下一步验证工作。

2014年广州市生吃水产品中创伤弧菌污染状况调查分析

目的了解2014年广州市生吃水产品中创伤弧菌的污染状况,对可能发生的创伤弧菌疾病进行预测和预报。方法按照国家食源性疾病监测网监测方案中创伤弧菌检验方法进行检验。结果 146份水产品中检出创伤弧菌98份,阳性率为67.12%,其中生吃海产品检出率为66.67%(44/66),生吃淡水鱼检出率为67.50%(54/80)。不同季度生吃海产品创伤弧菌的检出率差异有统计学意义,不同月份生吃淡水鱼创伤弧菌的检出率差异有统计学意义。结论 2014年创伤弧菌在广州市生吃水产品中污染严重,政府部门应该加强监测。

问号钩端螺旋体LipL32-LipL41融合基因的克隆与原核表达

目的构建钩端螺旋体融合基因lip L32-lip L41重组表达质粒,并获得重组表达的融合蛋白。方法设计引物,聚合酶链反应(PCR)从各参考标准株中扩增Lip L32、Lip L41基因,连接引物PCR法构建Lip L32-Lip L41融合基因,连接到大肠杆菌表达载体p ET28a上,构建p ET28a-Lip L32-Lip L41重组质粒,并转化到大肠杆菌DE3菌株中进行诱导表达,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot鉴定融合蛋白的表达。结果扩增获得的Lip L32-Lip L41融合基因为1 900 bp,原核表达重组质粒p ET28a-Lip L32-Lip L41经酶切鉴定含有融合基因片段,在大肠杆菌中表达出Mr 90 000左右的重组融合蛋白Lip L32-Lip L41。结论成功构建钩体Lip L32-Lip L41融合基因,并在大肠杆菌中成果表达融合蛋白,为进一步评价Lip L32-Lip L41作为候选抗原诊断钩端螺旋体病的价值奠定基础。