低T_3综合征

低T3综合征是一种非甲状腺的疾病现象,它本身不是一种疾病,而是由疾病等情况引起的一种生化现象,其表现,患有各种系统性疾病的患者以及临床用某些药物的病例或各种原因引起的营养不良者,甲状腺本身功能正常,而血清总T3浓度明显低于正常;总T4浓度降低,但大多数情况下变动在正常范围内,在患者健康状况较严重的情况下可降低到正常范围以下;血清反T3浓度极大多数高于正常,少数患者可正常或低于正常,其血清浓度的高低与当时的TT4浓度或病情有关;血清TSH水平及TSH对TRH的反应在正常的稳定水平;血清FT3和FT4浓度一部分增高,一部分正常或降低,取决于疾病的种类和病情的轻重。这种现象实质上是外周甲状腺激素代谢异常,因此也有学者称之为“末梢性甲低”以区别于原发性和甲状腺本身原因造成的甲状腺功能低下。

原代乳癌细胞体外药物敏感性观察

通过MTT方法，观察27例病人原代乳癌细胞对11种临床常用抗癌药物的体外敏感性。11种药物中，紫杉醇，顺铂体外抗乳癌效果明显优于其它药物。临床常用的CAP和CAF方案药物明显优于CMF方案药物。同一病人原代乳癌细胞对不同抗癌药物有不同的反应性；不同病人对同一抗癌药物有不同的反应性；甚至来源于同一病人的原发病灶和转移淋巴结癌细胞，对同一药物也有不同的体外药物敏感性。结果表明，原代乳癌细胞体外药物敏感试验能筛选敏感药物，预测耐药性，利于选择适合个体的化疗药物，组成有针对性的化疗方案。

HLA基因分型的最新进展

ＨＬＡ分型在人类学、法医学、疾病相关性及器官、组织移植等研究中有重要的意义。以往，用于ＨＬＡ分型的方法主要是血清学和细胞学方法，由于其方法学上的缺点，分型的准确性较差，且不能进行亚型分析。最近几年，随着分子生物学的不断进步，特别是ＰＣＲ技术的广泛应用，ＨＬＡ基因分型技术得到了迅速的发展，各具特点的不同ＨＬＡ基因分型技术不断出现，在方法学上达到了稳定、准确、精细、简便、实用的程度，为其临床推广应用奠定了技术基础。本文对ＨＬＡ基因分型技术的最新进展情况进行综述。

FLT3-ITD阳性与阴性急性髓细胞白血病的实验室特征及预后比较

目的比较伴FLT3基因突变(FLT3-ITD+)与不伴FLT3基因突变(FLT3-ITD-)的急性髓细胞白血病(AML)患者的实验室特征、疗效以及预后。方法 2010年10月-2012年10月收治的初诊AML患者93例,年龄10~66岁,包括21例FLT3-ITD+AML(22.6%)和72例FLT3-ITD-AML(77.4%,对照组)列入分析。比较两组患者的临床表现,HOX11、EVI、ETO、MLL、NPM1基因表达情况,细胞学抗原(CD34/CD38、淋巴抗原、CD7和CD4)表达情况,细胞遗传学表现(正常核型、复杂核型),2年无事件生存(EFS)和2年总生存(OS)情况。结果 FLT3-ITD+AML初诊时合并外周血白细胞增高(>100×109/L)及出血者多于FLT3-ITD-组(P<0.01,P=0.004),但两组在年龄、免疫表型及染色体异常等方面无明显差异。FLT3-ITD+AML完全缓解(CR)率28.57%,显著低于FLT3-ITD-AML的55.56%(P=0.03)。FLT3-ITD+AML 2年无事件生存率为29.2%,低于FLT3-ITD-AML组(37.7%,P=0.04)。FLT3-ITD+AML联合表达NPM1者占33.33%,明显高于FLT3-ITD-AML组(1.39%,P=0.001)。FLT3-ITD+AML中表达NPM1的患者均未达完全缓解。结论 FLT3-ITD+AML易合并白细胞增高,完全缓解率低,无事件存活率低,预后差。

树突状细胞介导的抗白血病效应的临床研究

肿瘤的免疫治疗作为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分,近年来受到了广泛的关注。树突状细胞(DC)是已知的功能最强的抗原呈递细胞,不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫,同样能够提高异体免疫组织的抗肿瘤效应。为了探讨外周血来源的DC体外培养扩增和临床治疗的可行性和安全性,分析DC免疫治疗对于急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植患者长期生存的影响,利用CS3000Plus采集13例急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植后的病人的外周血单个核细胞,经过2周的体外培养后行DC免疫治疗,治疗后长期随访观察其无病生存时间。结果表明,无一例发现有与DC免疫治疗相关的严重不良反应;KaplanMeier生存分析结果为:DC组5年生存率为75.52%,非DC组5年生存率为45.71%,DC组在累计生存率上明显优于非DC组。结论:外周血来源的DC体外培养和临床治疗是安全可行的,急性非淋巴细胞白血病病人在自体骨髓移植术后应用DC免疫治疗延长了其无病生存时间,提高了长期生存率。

伴t(11;17)(q23;q21)易位的急性早幼粒细胞白血病1例并文献复习

目的探讨伴t（11;17）（q23;q21）易位的急性早幼粒细胞白血病（APL）的临床特点、治疗及预后情况。方法报告1例APL伴t（11;17）（q23;21）,分析其细胞形态学、免疫学、细胞遗传学及分子遗传学特点,并对近20年国内外相关文献进行复习。结果本例患者为男性,35岁,白细胞计数38.17×109/L,骨髓早幼粒细胞88.5%,细胞核规则,无Auer＇s小体,PLZF-RARA融合基因阳性。染色体核型：46,XY,t（11;17）（q23;q21）。诊断：APL伴t（11;17）（q23;q21）。治疗采用亚砷酸、全反式维甲酸（ATRA）和大剂量阿糖胞苷（2g/m2,总量24g,3个疗程）联合化疗,随访至2013年2月,患者完全缓解已10个月。国内外文献已报道伴t（11;17）（q23;q21）易位的APL患者20例,年龄23-75（48.9±16.3）岁,其中男性占90%。3例单用维甲酸治疗的患者中2例死于早期并发症,应用维甲酸联合诱导化疗的10例患者中6例在11-56个月死于复发,1例死于早期脓毒血症,提示大多数病例对维甲酸治疗疗效欠佳。结论伴t（11;17）（q23;q21）易位的APL是一种少见变异型,具有重要的形态学和临床特点。延长亚砷酸治疗时间,采用亚砷酸、全反式维甲酸和大剂量阿糖胞苷联合化疗方案可能对缓解病情和患者存活有益。

宫颈癌患者外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞及血清中IL-10、TGF-β的表达及其临床意义

目的探讨宫颈癌患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Treg)、T淋巴细胞亚群以及血清IL-10、TGF-β1、TGF-β2细胞因子的表达及其临床意义。方法选取32例宫颈癌患者和24位健康体检者为研究对象,采用流式细胞术检测受试者外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg占CD4^+T淋巴细胞的比例、T淋巴细胞亚群细胞比例;采用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-10、TGF-β1、TGF-β2的含量。结果与健康对照组相比,宫颈癌组外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg占CD4^+T淋巴细胞的比值明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),T淋巴细胞亚群(CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、CD19^+)比例差异无统计学意义(P>0.05),血清IL-10含量明显增高,TGF-β2含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),TGF-β1的含量差异无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组手术后、化疗后CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg占CD4^+T淋巴细胞的比例,血清IL-10、TGF-β1、TGF-β2含量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg与TGF-β1之间存在正相关(r=0.673,P<0.01)。结论宫颈癌患者CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg占CD4^+T淋巴细胞的比值增高,且与TGF-β1含量呈正相关,可能在宫颈癌的肿瘤发生发展及肿瘤免疫逃逸中起着重要作用。

急性白血病患者HLA不全相合非清髓造血干细胞移植后淋巴细胞亚群变化分析

本研究观察并比较急性淋巴细胞白血病及急性髓系白血病患者经HLA不全相合非清髓造血干细胞移植(NST)后免疫重建及其与感染和移植物抗宿主病(GVHD)的关系。6名急性淋巴细胞白血病(ALL),4名急性髓系白血病(AML)患者有HLA不全相合亲缘供者,接受以氟达拉滨,ATG,阿糖胞苷,环磷酰胺,TBI2Gy为主的非清髓预处理方案,移植前后给予环孢霉素A或他克莫司联合霉酚酸酯防治GVHD。采用流式细胞术分别于移植前化疗缓解期,移植后监测患者体内的总T细胞、辅助/诱导T细胞、抑制/杀伤T细胞、γ/δT细胞、CD4/CD8比值,B细胞、NK细胞、NKT细胞、调节T细胞、活化T细胞、原始T细胞、记忆T细胞移植后变化规律,分析各免疫功能细胞与移植后感染及急、慢性GVHD的关系;比较ALL与AML免疫系统恢复差别。结果表明,移植后患者各淋巴细胞量恢复有各自规律,发生GVHD患者各淋巴细胞亚群数量较高,而移植后1个月γ/δT细胞、调节T细胞、NK细胞量较低。移植后2-3月时CD4/CD8、B细胞、NK细胞、原始T细胞较低。6-8个月时B细胞,原始T细胞,NK细胞较低。移植后早期发生感染患者总T细胞及各淋巴亚群恢复较慢,NK,NKT细胞数恢复较快,移植后3个月出现感染的患者,其B细胞及原始T细胞量恢复较快。ALL与AML患者淋巴细胞恢复无差异。结论:不全相合NST后各淋巴细胞亚群分析可间接反映患者胸腺功能恢复状态,NK、B细胞、原始T细胞的变化对区分和监测GVHD及感染有重要意义。

内皮祖细胞作为干扰素基因载体靶向肿瘤的实验研究

目的:探讨人间充质干细胞(MSCs)诱导成内皮祖细胞(EPCs),作为携带人伽玛干扰素(hγIFN)基因的载体进行肿瘤免疫治疗的可行性。方法:分离和培养人MSCs,在体外经人血管内皮生长因子(VEGF165,20ng/ml)诱导2周后,用流式细胞仪检测细胞表面标志。用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因,检测腺病毒载体(Ad5-EGFP)对EPCs的感染效率。Ad5-hγIFN转染EPC(sEPCs-hγIFN),ELISA法检测EPCs-hγIFN培养上清液中hγIFN浓度。体外EPCs-hγIFN与Lovo结肠癌细胞混合培养,观察对肿瘤细胞的抑制作用。给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-EGFP,观察EPCs的体内分布特点。给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-hγIFN,观察对移植瘤的抑制作用和对存活期的影响。结果:MSCs用VEGF165诱导2周后,分化成CD133、KDR和CD34阳性的EPCs。Ad5-EGFP在感染复数(MOI)为150pfu/EPC时,EGFP阳性的EPCs可达95%以上。EPCs-hγIFN培养液中测得hγIFN,浓度达1400pg/ml以上,而且在一段时间内浓度保持稳定。EPCs-hγIFN与Lovo细胞按照1:5的浓度混合培养4天,对Lovo细胞的抑制率为30.48%±3.78%(P<0.05)。通过静脉注射的EPCs-EGFP主要分布在肿瘤组织,而非其他器官组织。尾静脉注射EPCs-hγIFN可以抑制肿瘤的生长(肿瘤重量:EPCs-hγIFN组0.48±0.78g,空白对照组2.47±2.58g,P<0.05),而皮下注射hγIFN和静脉注射EPCs-EGFP对肿瘤无抑制作用。尾静脉注射EPCs-hγIFN延长荷瘤裸鼠的存活时间(中位存活时间:EPCs-hγIFN组为35天,空白对照组为32天,P<0.05)。结论:EPCs可以靶向性的分布到肿瘤局部,可以作为免疫性基因载体在肿瘤治疗领域进行进一步的研究。

多药耐药细胞株A549/Gem的建立及其生物学特性研究

背景和目的多药耐药是导致非小细胞肺癌患者生存期缩短的重要因素。本研究建立了多药耐药细胞株A549/Gem;通过研究其生物学特性,初步从细胞水平分析其获得性耐药的可能机制。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用吉西他滨进行诱导,建立多药耐药细胞株A549/Gem,把诱导过程中的细胞命名为A549/Gem'。分别在诱导前、诱导过程中和诱导成功后的三个不同时间点,应用MTT法检测其耐药指数和对其他化疗药物的敏感性,置于倒置光学显微镜下观察形态学特征,通过绘制生长曲线计算倍增时间,流式细胞术分析细胞周期分布,免疫细胞化学染色检测P53、EGFR、c-erb-B-2、PTEN、PCNA、c-myc、VEGF、MDR-1、Bcl-2、nm23、MMP-9、TIMP-1和CD44v6蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测RRM1 mRNA表达。结果A549/Gem^++细胞对吉西他滨耐药指数为163.228,对长春瑞宾(耐药指数为5.587±1.210)、多西他赛(耐药指数为102.147±10.259)、氟尿嘧啶(耐药指数为38.694±9.635)、依托泊甙(耐药指数>1000)、顺铂(耐药指数为2.357±11.209)耐药,对紫杉醇(耐药指数为0.264±0.024)、奥沙利铂(耐药指数为0.596±0.128)敏感;倍增时间(146.941h)比A549细胞(186.479h)缩短,G0-G1期细胞(分别为77.07%、71.30%)增多,失去PTEN、PCNA和MDR-1表达,P53、Cerb-B-2和bcl-2表达减弱,出现EGFR(+)、c-myc(+)表达,nm23表达增强,而MMP-9、VEGF、CD44v6和TIMP-1表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量明显增多。A549/Gem细胞对吉西他滨的耐药指数为129.783,并保持长春瑞宾(耐药指数为4.969±1.203)、多西他赛(耐药指数为58.669±15.206)、依托泊甙(耐药指数>1000)、顺铂(耐药指数为92.594±0.269)耐药性和紫杉醇敏(耐药指数为0.584±0.115)感性,但均较A549/Gem'细胞有所降低,而对奥沙利铂的敏感性(耐药指数为0.259±0.195)和对氟尿嘧啶的耐药性(耐药指数为0.958±0.152)消失,倍增时间(155.749 h)比A549/Gem'细胞稍延长,G0-G1期细胞稍减少,P53、EGFR、PCNA和MDR-1表达与A549/Gem'相同,出现TIMP-1、PTEN表达,Cerb-B-2、MMP-9、c-myc和bcl-2表达增强,nm23表达消失,而VEGF和CD44v6表达始终无变化,RRMl mRNA的相对表达量较A549/Gem'明显减少。与A549细胞相比,A549/Gem细胞逐渐呈现出如下形态学特征:形态不规则、形态各异、大小不一,且透光性减弱。结论A549/Gem细胞的生物学特性较A549细胞发生较大变化,其多药耐药性的发生与多种基因表达有关。

胞浆-5'-核苷酸酶-Ⅱ在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:胞浆-5'-核苷酸酶-Ⅱ(CN-Ⅱ)是一种核苷酸酶,具有水解酶及磷酸转移酶的活性,其异常表达可能与多种核苷类药物耐药有一定相关性。本研究旨在探讨CN-Ⅱ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测116例NSCLC原发及转移病灶中CN-Ⅱ的表达并分析其中67例曾接受过吉西他滨方案化疗的患者其CN-Ⅱ表达与吉西他滨近期疗效及生存的相关性,采用χ2检验及Fisher精确检验分析其表达水平与临床病理因素的相关性,采用Kaplan-Meier方法分析TTP及OS(overall survival,OS),采用对数秩和检验比较不同CN-Ⅱ表达情况之间的差异。结果:116例NSCLC标本中CN-Ⅱ阳性表达率为53.4%,其表达水平与患者的年龄、性别、KPS评分、临床分期、肿瘤病理类型及分化程度等均无显著相关性。NSCLC原发病灶与淋巴结等转移病灶中CN-Ⅱ的表达水平亦无显著性差异。对67例接受含吉西他滨方案化疗NSCLC患者肿瘤组织标本的检测发现,吉西他滨化疗有效组(CR+PR)、疾病控制组(CR+PR+SD)及无效组(PD)的CN-Ⅱ阳性表达率分别为30.4%、36.7%及57.6%,前两者与后者相比均有显著性差异(CR+PR vs.PD组,P=0.008;CR+PR+SD vs.PD组,P=0.013);28例CN-Ⅱ阳性及39例阴性患者中位肿瘤进展时间(progeression free survival,PFS)分别为4.0个月及5.5个月,有显著性差异(95%CI:4.452-6.148,P=0.041),两组患者中位OS分别为9.5个月及11.0个月,无显著性差异(95%CI:8.667-13.333,P=0.282)。结论:CN-Ⅱ异常表达与吉西他滨治疗疗效有一定相关性,有可能成为潜在的疗效预测因子。

环孢霉素A体外对白血病细胞作用的的研究

为了进一步探讨环胞霉素A (CSA)逆转白血病细胞耐药的机理 ,采用溴化四氮唑兰法(MTT)测定K5 62和K5 62 /ADM白血病细胞系对化疗的体外反应性 ,以脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,台盼蓝拒染法测细胞存活率。结果发现CSA在 1.0mg/L水平对两种白血病细胞存活无明显影响 ,但能够增强其对化疗药物的敏感性 ,促进化疗药物诱导的白血病细胞凋亡 ,当浓度大于 1.0mg/L时单独CSA也能杀伤白血病细胞并诱导其凋亡。结论提示 ,CSA可以通过促进细胞凋亡逆转白血病细胞的耐药 。

应用CBA法检测HLA单倍体相合非清髓造血干细胞移植中Th1/Th2/Th17细胞因子的变化

本研究探讨非清髓异基因外周造血干细胞单倍体相合移植(NAHSCT)中,Th1/Th2/Th17细胞因子的变化。用流式微珠阵列法(flow cytometric bead array,CBA)检测18例allo-NAHSCT患者移植前、后不同时间点,血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17水平的变化。结果表明,移植后所有的细胞因子均明显改变,其表达较移植前增加;IL-2、IL-4、IL-17发生变化的时间较早,移植后1周其表达开始明显上调;IL-6、IL-10、TNF-α移植后2周起显著改变,与移植前相比血清浓度明显提升;INF-γ变化较晚,移植后4周表达开始增高;所有的细胞因子都在移后4周内呈持继上升趋势,至第4周达峰值。结论:非清髓异基因外周血单倍体相合移植后患者血清细胞因子在早期均发生显著性提升;IL-2,IL-4,IL-17变化较早,IFN-γ变化相对迟缓,至第4周为其峰值;Th1/Th2/Th17细胞因子移植早期的变化规律可能与患者的综合情况相关。

人乳腺癌细胞MTT药敏试验评价标准的研究

目的：建立人乳腺癌细胞体外药敏评价标准，预测乳癌病人的化疗疗效。方法：应用ＭＴＴ试验，检测１７５例原代乳腺癌细胞对８种化疗药物的敏感性，采用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ程序对药物敏感性的指标进行分析。结果：如果Ｉｍａｘ％＞（瘤群Ｉｍａｘ％均数＋标准差），说明药物的抑制作用较弱，临床不能应用该药；如果Ｉｍａｘ％≤（瘤群Ｉｍａｘ％均数＋标准差）药物的抑制作用较强，可以进一步考证其ＩＣ５０。ＩＣ５０≤Ｑ５０，即小于本组瘤群ＩＣ５０的中位值，则判定该例乳腺癌对药物相对敏感，反之则为相对耐药。结论：联合应用Ｉｍａｘ％和ＩＣ５０的药敏评价标准，能较客观地反映人乳腺癌细胞体外的药物敏感性，有利于预测乳癌病人的化疗疗效。

诱导方法对多药耐药细胞系A549/Gem建立的影响

目的:探讨诱导方法对多药耐药细胞系A549/Gem建立的影响。方法:以A549细胞为原代细胞,采用4种方法,建立多药耐药细胞系A549/Gem-1、A549/Gem-2、A549/Gem-3和A549/Gem-4(统称A549/Gem)。比较其诱导前后耐药指数和耐药谱、形态学特征、倍增时间、细胞周期分布及TPS、SCC、CEA、CY-FRA21-1、ERCC1和RRM1mRNA表达的变化。结果:4种细胞对吉西他滨的耐药指数分别为38.277、12.268、115.297和25.679,均获得多药耐药性,但耐药谱差别较大。其中,A549/Gem-1和A549/Gem-4细胞的G0-G1期细胞比例较A549细胞降低。A549/Gem细胞的倍增时间较A549细胞缩短,形态学变化显著,CEA、TPS、SCC和CYFRA21-1表达变化不大,RRM1和ERCC1mRNA相对表达量增多。结论:A549/Gem细胞获得多药耐药性,诱导方法对其建立影响较大。

携带hIFN-γ的内皮祖细胞增强肿瘤化疗后维持治疗的效果

目的:观察携带hIFN-γ基因的内皮祖细胞(endothelial progenetor cells carrying hIFN-γ,EPC-hIFN-γ)在肿瘤化疗后维持治疗的效果。方法:LoVo大肠癌细胞加入喜树碱-11(camptothecin-11,CPT-11),再分别加入hIFN-γ或(和)西妥苷单抗(cetuximab,C225),MTT法观察其对LoVo细胞的抑制作用。荷Lovo大肠癌细胞移植瘤裸鼠在给药CPT-11后,再给予EPCs-hIFN-γ或(和)C225,观察对肿瘤的抑制作用和对裸鼠生存期的影响。结果:在体外,肿瘤细胞中加入CPT-11后再加入hIFN-γ或(和)C225可进一步抑制肿瘤细胞的生长。荷瘤裸鼠在给予CPT-11 50 mg/kg后,分别给予EPCs-hIFN-γ、C225或者EPCs-hIFN-γ+C225,均可以进一步抑制肿瘤的生长[肿瘤平均体积(2 024.28±1 048.40)mm3vs(764.94±720.14)mm3、(233.85±186.97)mm3、(186.95±133.43)mm3、(163.9±173.39)mm3,P<0.05),均可进一步延长荷瘤裸鼠的生存期(中位生存期34.2 dvs39.4 d、44.5 d、48.5 d、51.3 d,P<0.05或P<0.01);其中以CPT-11+EPCs-hIFN-γ+C225的治疗效果最好。结论:EPCs-hIFN-γ用于化疗后维持治疗可以抑制肿瘤细胞生长,延长荷瘤小鼠的生存。

海洛因依赖对T淋巴细胞核仁区酸性非组蛋白表达分析

目的：观察海洛因依赖者外周血T淋巴细胞核仁形成区（NORs）酸性非组蛋白（Ag-NORs）表达及与解毒有关的胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（CST-π）表达，分析海洛因依赖对T细胞代谢乃至功能的影响。方法：利用北京开隆公司提供的KL型免疫图象分析系统检测T细胞Ag-NORs；通过定量PCR技术分析病人外周血GST-π。表达。结果：72例海洛因依赖者外周血T淋巴细胞Ag-NORs检测平均值6．78％±0.50％（％±S），其中33例进行了GST-π表达分析，与正常人比较海洛因依赖者外周血GST-π表达明显增高，且Ag－NORs与GST-π表达呈明显负相关。结论：海洛因依赖者外周血T淋巴细胞Ag-NORs明显降低，表明其免疫细胞功能受到明显抑制。Ag-NORs降低的幅度明显小于肿瘤患者，说明海洛因依赖对T细胞的抑制可能在途径或机理上有别于肿瘤抑制因子对免疫细胞的抑制。GST-π表达增高，提示机体损伤修复机理加强。CST-π表达与Ag-NORs呈密切负相关，进一步证实海洛因依赖患者免疫功能损伤与修复对立调节的加强。

人外周血CD4^+ CD25^+细胞体外扩增T细胞亚群及功能检测

目的建立尼龙面柱法体外分选、扩增CD4+CD25+细胞的方法,并检测扩增后T细胞亚群及其功能,为临床输注供者来源的CD4+CD25+细胞抑制急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)提供实验基础。方法体外用尼龙棉柱法分离T细胞,加入含Anti-CD35μg/ml、IL-2 500 IU/ml、10%FCS的RPMI-1640培养基进行培养扩增CD4+CD25+细胞,分别在培养前、培养后3、8、16、21、28 d检测T细胞亚群CD3、CD4、CD8,CD4+CD25+及其功能;同时检测CD28+和fasL的表达。结果体外尼龙棉柱法分离的T细胞约16 d后,CD4+CD25+细胞可扩增(50.88±6.21)倍;但CD8+细胞也同时扩增,甚至略多于CD4+CD25+细胞。而T细胞活化指标fasL(介导细胞凋亡的死亡因子)的表达在培养前后的变化无统计学差异。结论尼龙棉柱法在体外扩增培养可获得数量较多的CD4+CD25+Treg细胞,这些细胞不会促进T细胞活化,可能不会增加对宿主细胞的杀伤力。

早熟凝集染色体环法在山西太原事故受照射者生物剂量估算中的应用

目的:探讨药物诱导的早熟凝集染色体环(prematurely condensed chromosomes ring,PCC-R)分析方法在辐射事故受照射者生物剂量估算中的应用。方法:山西太原辐射事故发生后16h收集5名受照射者(1、2、3、4和5号)的外周血,及1号受照者照射后23h的骨髓细胞和24h的外周血,采用冈田酸(Okadaic acid,OA)诱导的PCC方法计数PCC细胞中的PCC-R,以新建立的PCC-R剂量-效应曲线(1～20Gy)估算生物剂量。照射后31d对4名受照射者(2～5号)的PCC-R频率进行了分析。并采用常规染色体双加环(dic+r)、胞质分裂阻滞微核(cytokinesis-block micronuclei,CBMN)分析及物理方法对PCC-R法的结果进行验证。结果:最严重受照射者1号的外周血培养仅获得极少量的PCC细胞,而骨髓培养获得了一定数量的PCC细胞。以骨髓细胞PCC-R频率对1号及以外周血PCC-R频率对2～5号进行剂量估算的结果分别为12.4、3.6、3.2、1.7和1.5Gy。2～5号受照者照后31d PCC-R频率与照后16h相比下降幅度分别为51%、69%、69%及44%。结果与用dic+r、CBMN分析及物理方法估算的剂量接近,与临床表现基本相符。结论:经实际应用证明,药物诱导的PCC-R法简便、快速,新建立的PCC-R剂量-效应曲线准确、可靠。该法更适用于较高剂量照射的生物剂量估算,且应在照后尽早取血,最好在1个月之内。