PRAS40与14-3-3蛋白各亚型相互作用的酵母双杂交系统检测

PRAS40是近几年新发现的Akt作用底物,14-3-3结合蛋白。为确定PRAS40与14-3-3蛋白7种亚基间相互作用关系,利用gateway方法构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒pEG-PRAS40及转录激活质粒pJG-PRAS40,将PRAS40和14-3-3各亚型质粒分别作为诱饵蛋白质粒及转录激活质粒共转化酵母细胞EGY48,通过氨基酸营养缺陷生长实验及β-半乳糖苷酶显色反应分析两种蛋白相互作用程度。酶切鉴定证实成功地构建了pEG-PRAS40和pJG-PRAS40质粒,酵母双杂交实验结果显示PRAS40可以和14-3-3亚型tau,beta,zeta及epsilon相结合,epsilon较强,beta和zeta次之,tau较弱。此结果将为深入研究PRAS40与14-3-3蛋白生物学功能及发现药物靶标奠定基础。

藻蓝蛋白亚基细胞渗透性及对肿瘤细胞光敏作用的研究

目的:研究藻蓝蛋白亚基对SP2/0、S180、COS7、C6的最佳渗透条件及由其介导的PDT对肿瘤细胞的抑制作用。方法:采用柱层析方法从藻蓝蛋白样品中分离得到藻蓝蛋白亚基,通过荧光显微镜观察其在细胞内的渗透特性,并以He-Ne激光器为激发光源,MTT法检测藻蓝蛋白亚基光敏作用对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果:藻蓝蛋白α、α/β亚基在75μg/mL浓度下可以在4 h时充分地进入细胞,并可以在细胞内稳定2 h以上;藻蓝蛋白中的α,β亚基稳定性和作用不相同,β亚基荧光性强但易于降解,由α亚基介导的PDT作用比α/βPDT作用强;100μg/mLα亚基介导的PDT对SP2/0和S180两种悬浮细胞的抑制率可分别达到78.6%和39.8%,强于贴壁细胞C6和COS7的29.2%和17.8%。结论:藻蓝蛋白α亚基在合适的渗透条件下表现出较强的光动力学抗肿瘤效果,且PDT效果与光敏剂浓度、照射剂量及细胞类型相关。

植物激素对大岩桐愈伤组织诱导和芽分化增殖的影响

以大岩桐(Sinningia specioca)的幼嫩茎、叶片为外植体,通过正交实验的方法探讨不同浓度和比例的植物激素对愈伤组织诱导和芽分化增殖的影响。实验结果表明:大岩桐愈伤组织的形成最佳激素组合为2,4二-氯苯氧乙酸2.0 mg/L+6苄-基嘌呤0.1 mg/L+萘乙酸0.3 mg/L;芽分化的最佳激素组合为6苄-基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.1 mg/L。

甘孜藏族自治州彝族人群18个STR基因座的遗传多态性研究

目的研究18个STR基因座(D5S818、D8S1179、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、vWA、D21S11、D16S539、D12S391、PentaE、FGA、TPOX、TH01、D6S1043、D19S433、D18S51、D13S317)在四川甘孜藏族自治州(以下简称:甘孜州)彝族人群中的遗传多态性。方法应用荧光标记复合扩增技术,结合毛细管电泳技术对甘孜州538名彝族无关个体的18个STR基因座进行遗传学分析研究。结果 538名甘孜州彝族个体在18个STR基因座上,共检出204种等位基因,788种基因型,其分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),等位基因频率在0.0001~0.5158之间。18个基因座的杂合度(H)在0.6301~0.8866之间,匹配概率(Pm)在0.0198~0.1855之间,个体识别概率(DP)在0.8145~0.9802之间,多态信息含量(PIC)在0.5810~0.8950之间,累积个体识别率(TDP)大于0.999999999999999999999,累积三联体非父排除概率(CPEtri)为0.999999861,累积二联体非父排除率(CPEduo)为0.99997664。结论 18个STR基因座在甘孜州彝族人群中具有较好识别能力。

连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研究

目的建立连接酶链反应(Ligase Chain Reaction,LCR)应用于法医学领域的初步方法探索。方法选择人Amelogenin基因座进行连接酶链反应。针对人染色体Amelogenin基因座Xp22.1-.3、Yp11.2上M55418、M55419的序列,自行设计特异引物,建立LCR最佳体系,对男性和女性Amelogenin基因座进行分型。结果巢式LCR能够对男性和女性Amelogenin基因座正确分型。结论 LCR技术能够应用于人Amelogenin基因座分型,但尚需进一步简化和改进。

中小企业融资方式和策略

中国要在未来保持健康高速的经济增长,需要中小企业有更快的发展。目前中小企业发展仍面临严重困难,其中最大的困难之一就是融资难。然而,中小企业融资难的问题,始终没有得到根本性解决,尤其是那些规模小、成立时间短的中型与小型企业,融资更为困难。融资问题已经成为制约中小企业发展的重要瓶颈。