囊型包虫病患者外周血单核细胞诱导的树突状细胞形态及表型特点

目的研究囊型包虫病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)的形态及其细胞表型特点。方法囊型包虫病患者组(cystic echinococcosis,CE)15例,健康志愿者对照组(healthy donor,HD)15例,采外周血(肝素抗凝)分离单个核细胞后贴壁培养,施加重组细胞因子培养6d,诱导成DC,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测CD86、HLA-DR、CD1a、CD80的表达情况。结果与HD组比较,CE组PBMC诱导的DC表面的树突状突起较少,且细胞表面的CD86、HLA-DR、CD1a、CD80表达降低(P<0.05)。结论CE组患者PBMC诱导的DC形态不典型,表面分子的表达降低,细胞活力降低,对T细胞的刺激能力减弱。

人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较

目的 建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法 通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[（53.333±5.774）%、（38.333±7.638）%]明显低于第3天[（68.667±3.215）%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[（92.667±3.055）%、（94.000±1.000）%和（94.667±1.528）%]比较,差异无统计学意义（F=0.737,P＞0.05）;贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法（t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05）.PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为（32.457±12.351）%、（41.914±14.858）%,二者比较差异无统计学意义（t=1.295,P＞0.05）.单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[（35.267±4.658）%]高于培养1、5 h时[（15.033±6.189）%、（21.233±4.895）%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[（2.200±1.356）%]较第1天[（32.328±14.517）%]明显下降（t=5.467,P＜0.05）,CD1a的阳性表达率[（43.371±16.250）%]较第1天[（12.300±6.223）%]显著升高（t=2.545,P＜0.05）;而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[（16.857±5.686）%、（9.343±5.230）%、（72.800±17.881）%]与第1天[（12.550±16.758）%、（6.250±1.323）%、（64.671±15.588）%]比较,差异无统计学意义（t值分别为0.652、1.137、0.907,P均＞0.05）.同种混合淋巴细胞反应,随着淋巴细胞的增多,增殖能力下降.磁珠分选法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：50、1：100时,细胞增殖能力（1.502±0.055、1.507±0.029）较1：10时（1.859±0.049）降低（P均＜0.05）;贴壁培养法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：100时,细胞增殖能力（1.545±0.066）较1：10时（2.015±0.301）降低（P＜0.05）.在DCs与淋巴细胞的比例相同时,两种方法得到的DCs在刺激T淋巴细胞方面的能力相近（P＞0.05）.结论 与磁珠分选法比较,贴壁培养2 h后的人外周血PBMC再行诱导可获得形态与功能较优的DCs,且此法稳定、简便、经济,是一种适于基础、临床研究的DCs体外培养方法.

肝囊型包虫病患者血清白细胞介素(IL)-17的检测及其临床意义

目的探讨血清Th17细胞相关因子IL-17在肝囊型包虫病患者中的表达及其临床意义。方法将56例受试者分为3组,健康志愿者(healthy donor,HD)组20例、肝囊型包虫病(cystic echinococcosis,CE)组21例和肝囊型包虫病复发(recurrent cystic echinococcosis,RCE)组15例;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组受试者Th17细胞相关细胞因子IL-17的表达。对数据进行t检验。结果血清IL-17水平在CE组(13.4±3.5)ρg/mL和RCE组(13.2±4.7)ρg/mL比对照组HD组(16.4±4.8)ρg/mL降低(t=2.27,t=2.20,P<0.05);RCE组与CE组之间差异无统计学意义(t=0.143,P>0.05)。结论血清IL-17在肝囊型包虫病患者中显著降低,可能与细粒棘球蚴感染过程中免疫调节有关。

辅助性T淋巴细胞17在肝囊型包虫病患者外周血中的变化

目的 探讨肝囊型包虫病患者外周血中辅助性T淋巴细胞（Th）17的变化.方法 将56例受试者分为：健康志愿者（HD）组20例,肝囊型包虫病（CE）组18例,肝囊型包虫病合并胆瘘（BF）组18例.流式细胞仪胞内染色分析法检测各组受试者外周血中Th17细胞占CD4^＋T淋巴细胞比例,ELlSA检测血清Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23水平.数据行t检验和Pearson相关分析.结果 CE组患者外周血Th17/CD4^＋T淋巴细胞比例为（0.23±0.11）%,明显低于BF组的（0.76±0.43）%和HD组的（0.52±0.50）%（t=2.225,t=4.077,均P＜0.05）,而BF组和HD组间差异无统计学意义（t=1.931,P＞0.05）.血清IL-17和IL-23在CE组分别为（12.1±3.7）ng/L和（84.4±46.0）ng/L,明显低于BF组的（15.5±4.1）ng/L和（138.6±37.9）ng/L（t=2.515,t=3.649,均P＜0.05）,也低于HD组的（14.8±4.4）ng/L和（138.1±48.7）ng/L（t=2.401,t=3.706,均P＜0.05）,而BF组和HD组间差异无统计学意义（t=0.534,P＞0.05）.各组血清IL-17水平与IL-23水平呈正相关（r=0.657,P＜0.05）.结论 肝囊型包虫病患者外周血中Th17细胞比例明显减少,血清IL-17、IL-23水平显著降低.