耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药基因及整合子研究

目的:了解临床分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(CRE)耐药性和分布特点及其携带的整合子和碳青霉烯基因情况。方法:收集2021年1月至2021年12月郑州大学第一附属医院郑东院区住院患者临床分离的非重复CRE共659株,使用VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏试验,头孢曲松、头孢呋辛和氨苄西林/舒巴坦药敏试验采用纸片扩散法(K-B法)检测,采用聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯基因基因及Ⅰ类整合酶基因。结果:659株CRE主要分布在重症监护室(45.22%)、呼吸重症监护室(13.96%)、急诊重症监护室(9.26%)、泌尿外科(7.74%)、呼吸内科(4.10%),对β–内酰胺类和喹诺酮类抗菌药物耐药率大于90%,bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)基因的检出率分别为81.33%、10.93%、0.30%,5株耐碳青霉烯肺炎克雷伯(CRKP)中同时携带bla_(KPC)和bla_(IMP)基因。CRKP、耐碳青霉烯大肠埃希菌(CREC)中Ⅰ类整合酶阳性率分别为90.94%、74.07%。结论:659株CRE中,CRKP分离率较高,耐药基因以bla_(KPC)、bla_(NDM)为主,Ⅰ类整合子检出率较高,应加强院内感染防控措施,有效控制此类菌的播散。

金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药性及耐药基因检测分析

目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)对万古霉素的耐药性及耐药基因分布情况。方法收集平顶山市第一人民医院2020年4月至2022年3月临床送检样本分离的288株SA菌株,采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定和药敏系统以及纸片扩散法进行菌落鉴定与药敏试验;采用聚合酶链反应检测pbp4、mgrA、agr、vraS、vraR、icaA、icaR基因表达。结果288株SA菌株中筛选出25株万古霉素异质性耐药金黄色葡萄球菌(hVISA)菌株,hVISA阳性率为8.68%,未检测到万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(VISA)菌株和万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)菌株;万古霉素敏感金黄色葡萄球菌(VSSA)菌株万古霉素最小抑菌浓度(MIC)主要分布在0.50 mg/L和0.75 mg/L,占比为41.83%和28.90%;hVISA菌株万古霉素MIC主要分布在1.50 mg/L和2.00 mg/L,占比为56.00%和28.00%;VSSA菌株pbp4、agr、icaR的相对表达量均低于hVISA菌株(P<0.05),而mgrA、vraS、vraR、icaA的相对表达量均高于hVISA菌株(P<0.05)。结论本次调查hVISA两年总流行率为8.68%。与VSSA菌株比较,hVISA菌株pbp4、agr、icaR、mgrA、vraS、vraR、icaA基因表达存在差异,可能与万古霉素的耐药性有关。

2006—2011年金黄色葡萄球菌耐药性变迁分析

目的分析我院2006年1月—2011年12月金黄色葡萄球菌的临床分布和耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法万古霉素采用E-test法检测最小抑菌浓度(MIC),其余抗菌药物敏感性试验采用纸片扩散法(K-B法),判断标准均按CLSI2011年规定标准判定结果,以WHONET5.4统计软件进行数据分析。结果共分离出金黄色葡萄球菌3156株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)1903株,检出率为60.3%,MRSA检出率呈上升趋势,且随年龄增长而逐渐上升。痰、分泌物为主要标本来源,普外科及ICU病房为金黄色葡萄球菌的主要分离病区。各病区以ICU MRSA检出率最高,为87.4%,其次为普外科和神经外科,分别为85.7%和84.3%。MRSA对除磷霉素、复方磺胺甲噁唑、克林霉素、红霉素及糖肽类以外的抗菌药物耐药性均在90%以上,MSSA对庆大霉素的耐药率由9.5%上升至16.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。复方磺胺甲噁唑对MRSA和MSSA均保持较好的敏感性,敏感率在80%以上。未发现万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺耐药的菌株。结论 6年间金黄色葡萄球菌的耐药率持续保持较高的水平,耐药现象严重,并且MRSA检出率有逐年上升的趋势,临床应合理使用抗菌药物,定期监测其耐药性变迁,避免院内传播。

2010年武汉同济医院细菌耐药性监测

目的分析武汉同济医院2010年临床分离菌对常用抗菌药物的耐药情况。方法采用纸片扩散法(K-B法)进行抗菌药物敏感性试验,E试验检测肺炎链球菌对青霉素和头孢曲松以及葡萄球菌对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC),用WHO-NET5.4统计软件进行数据分析。结果 2010年该院5 287株临床分离菌中,革兰阳性球菌1 476株,占27.9%,革兰阴性杆菌3 149株,占59.6%,真菌662株,占12.5%。门诊病人前5位分离菌依次为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金葡菌和流感嗜血杆菌,住院病人前5位分离菌依次为大肠埃希菌、金葡菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌。MRSA和MRCNS的检出率分别为63.3%和74.7%;产ESBLs大肠埃希菌和克雷伯菌属的检出率分别为80.1%和55.6%,产酶株耐药性明显高于非产酶株;检出对万古霉素和(或)替考拉宁耐药的肠球菌属11株,经PCR检测均为VanA型。屎肠球菌耐药率均明显高于粪肠球菌(P<0.05);青霉素不敏感肺炎链球菌(PNSSP)分离率为33.0%(非脑脊液标本);铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为18.5%和14.3%,不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南耐药率在50%以上;流感嗜血杆菌产β内酰胺酶阳性率为31.9%,除对氨苄西林和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑敏感率较低外,对其他抗菌药物敏感率均在75%以上。结论临床常见病原菌仍以革兰阴性杆菌为主,与该院往年监测数据相比,本年度分离的病原菌对多数抗菌药物耐药性呈上升趋势,多重耐药情况严重,出现少数耐万古霉素肠球菌属及多重耐药革兰阴性杆菌,应引起临床重视。

呼吸道分泌物中分离菌的分布及耐药性分析

目的了解华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸道病原菌的分布及耐药特征,为临床合理使用抗菌药物、有效控制呼吸道感染提供依据。方法回顾分析该院2009年1月1日—12月31日痰标本分离菌分布情况,按照CLSI2009年标准判读结果,用WHONET5.4软件进行结果分析。结果共分离出3 032株病原菌,其中革兰阴性杆菌占74.1%,革兰阳性球菌占15.7%,真菌占10.2%。排名前10位的分离菌依次为肺炎克雷伯菌（13.8%）、鲍曼不动杆菌（12.7%）、金葡菌（12.1%）、铜绿假单胞菌（11.7%）、大肠埃希菌（7.0%）、嗜麦芽窄食单胞菌（4.9%）、白念珠菌（4.8%）、流感嗜血杆菌（4.3%）、肺炎链球菌（3.5%）和阴沟肠杆菌（3.1%）。门诊患者流感嗜血杆菌检出率较高。药敏试验结果显示,鲍曼不动杆菌对头孢哌酮-舒巴坦耐药率低,为7.3%,中介率较高,为39.1%,对其他药物的敏感率均在40%以下;铜绿假单胞菌对常用抗菌药物耐药率较高,为12.1%~89.4%;流感嗜血杆菌和肺炎链球菌对青霉素类抗生素敏感率仅为60%~70%,儿童株耐药性普遍高于成人株。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs率分别为52.6%和88.6%;MRSA检出率为75.1%。ICU和呼吸科多重耐药菌株最常见,其次为儿科。结论该院呼吸道分离菌以条件致病菌为主,其中苛养菌占7.8%。细菌耐药现象严重,临床医师应根据药敏试验结果合理使用抗菌药物。

某教学医院2014—2018年5年间血培养病原菌分布及耐药性变迁

目的探讨我院2014—2018年5年间血培养病原菌的分布及耐药性变迁,为临床血流感染的诊治提供依据。方法使用VITEK2 Compact细菌鉴定系统和VITEK MS质谱仪器进行细菌鉴定,抗菌药物敏感性试验采用VITEK 2 Compact和K-B法进行检测,采用WHONET 5.6软件进行药敏结果的统计分析。结果5年间血培养共检出病原菌11398株,其中革兰阴性菌占54.7%,革兰阳性菌占38.6%,真菌占6.7%,前5位分离菌分别是:大肠埃希菌(2517株,22.1%)﹑凝固酶阴性葡萄球菌(1951株,17.1%)﹑肺炎克雷伯菌(1572株,13.8%)﹑金黄色葡萄球菌(698株,6.1%)和屎肠球菌(570株,5.0%)。5年间大肠埃希菌对亚胺培南的耐药率由1.1%上升至5.0%;肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率由15.7%上升至56.1%;鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率平均高达88.1%;铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率平均为20.8%,对哌拉西林/三唑巴坦﹑环丙沙星和阿米卡星的耐药率均在10%以下;2014—2018年血培养中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检出率分别为42.6%﹑50.0%﹑40.4%﹑47.5%和35.1%,平均检出率为42.6%。结论我院血培养病原菌以革兰阴性菌为主,细菌耐药性呈总体上升的趋势,碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的检出率显著升高,给临床用药带来极大挑战。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的流行性及mgrA基因对万古霉素耐药性影响的研究

目的 监测郑州大学第一附属医院近5年来异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycinintermediated Staphylococcus aureus, hVISA)的流行性,并进一步研究金黄色葡萄球菌mgrA基因对万古霉素耐药性的影响。方法采用琼脂稀释法和E-test法检测万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC);MHA5T和菌群曲线分析法(PAP/AUC)检测hVISA,Real-time RT-PCR法测定hVISA和non-hVISA菌株中mgrA基因的mRNA表达水平,通过SOE-PCR+同源重组的方法敲除mgrA基因。结果 823株MRSA中共检出hVISA 147株,检出率为17.9%,hVISA菌株mgrA基因的mRNA表达水平是non-hVISA菌株的2.65倍,明显高于non-hVISA菌株(t=7.326, P<0.001),成功构建mgrA基因缺失株,并发现mgrA基因缺失株万古霉素耐药性有所下降。结论 本地区hVISA的流行率为17.9%,并且5年来检出率呈逐年上升的趋势,mgrA基因可能与万古霉素耐药性有关,本研究推测mgrA基因下调可使万古霉素耐药性下降,研究为进一步明确金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药机制提供了新的理论基础。

运用变性高效液相色谱快速检测TEM型产超广谱β-内酰胺酶菌株

目的建立一种快速检测TEM型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)临床分离菌及其流行病学监测的新方法。方法采用PCR技术从临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行分析并进行DNA测序,确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果共检测66株临床分离菌,其中42株扩增出TEM型基因。经过DHPLC分析,35株表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;5株表现为一种异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,测序结果表明它们均存在两种相同的基因突变,经比对后确定为TEM-10型;另外2株表现为另一种异常的洗脱峰,测序结果显示为TEM-116型。结论 DHPLC技术可用于细菌耐药基因的分型检测,不但灵敏度和特异度高,而且具有经济、快捷、高通量等特点,具有很大的潜在临床应用价值。

高血压患者高敏C反应蛋白与颈动脉粥样硬化的关系

高血压是多种心、脑血管疾病的重要危险因素。长期高血压导致的动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是造成高血压各种靶器官损害如动脉壁增厚、粥样斑块的主要原因,严重危害着人们的身体健康。颈动脉是全身中型动脉的窗口,其硬化程度可间接反映冠状动脉、脑动脉、外周动脉硬化的程度。

盐酸曲美他嗪联合益气复脉注射液治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床观察

冠状动脉粥样硬化性心胖病（冠心病）是指冠状动脉粥样硬化后造成管腔狭窄或阻塞而引发的心脏疾病，随着我国人口老龄化和人们生活水平的提高，该病的发病率和病死率近年来一直持续上升，占心血管疾病的首位，笔者近年采用盐酸曲美他嗪联合益气复脉注射液治疗冠心病疗效满意，现报告如下。

心理干预联合氟哌噻吨美利曲辛治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病患者抑郁症状的疗效观察

冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是临床上的一种常见心血管疾病，主要以心前区憋、闷、痛、胀，甚则濒临死亡感为主要临床症状，反复并长期的病情发作使不少患者均伴有一系列的抑郁情绪，笔者对冠心病、心绞痛伴有焦虑抑郁症状的患者，在常规用药基础上加采用心理干预联合氟哌噻吨美利曲辛治疗，收到了很好的效果，现报告如下。

2014~2019年郑州大学第一附属医院血培养分离病原菌临床分布及耐药性分析

目的了解郑州大学第一附属医院血培养病原菌的构成及耐药性。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2014年1月~2019年12月间临床血培养分离的13456株细菌药敏结果,按照CLSI2019年标准,使用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果血培养分离前5位的细菌分别为大肠埃希菌3121株(23.2%)、凝固酶阴性葡萄球菌2822株(21.0%)、肺炎克雷伯菌2038株(15.1%)、金黄色葡萄球菌844株(6.3%)和屎肠球菌727株(5.4%)。大肠埃希菌对亚胺培南、厄他培南的耐药率分别为3.7%和4.2%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、厄他培南的耐药率分别为43.5%和47.6%。鲍曼不动杆菌对大多数测试抗生素耐药性高,而铜绿假单胞菌对大多数抗生素保持较高的敏感性。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为42.1%和84.2%,未发现万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。结论郑州大学第一附属医院血培养分离细菌耐药情况较为严重,临床应合理应用抗生素,主动开展细菌耐药性监测,遏制细菌耐药性的上升。

应用16S rRNA宽范围聚合酶链反应快速检测临床无菌体液感染

目的应用16S rRNA宽范围聚合酶链反应(PCR)快速检测临床无菌体液感染,并与传统培养方法进行比较分析。方法收集94份临床无菌体液(血液、脑脊液、胸腹水、关节液)标本,提取细菌基因组DNA,应用16S rRNA宽范围PCR扩增,并将PCR阳性产物测序,然后将测序结果在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上进行BLAST比对,从而确定菌种。同时,应用常规培养方法检测94份无菌体液标本,并对2种方法的结果进行比较。结果 16S rRNA宽范围PCR敏感性高,最低扩增浓度为103 CFU/mL,且该技术特异性高,其阳性扩增产物经测序比对后结果和培养结果完全吻合。另外,94例临床标本中应用培养方法培养出阳性例数为9例,阳性率为9.6%,而应用宽范围PCR,除培养阳性的9例均为阳性外,另外扩增出6例阳性标本,阳性率为15.9%,而此6例经测序证实分别为4株铜绿假单胞菌、1株黏质沙雷菌、1株肺炎链球菌。结论 16S rRNA宽范围PCR与培养技术比较起来,敏感性高,特异性强,有望成为临床无菌体液病原体感染快速筛查的方法。

铜绿假单胞菌对致病真菌的抑制作用

目的观察临床分离的24株铜绿假单胞菌(PA)对致病性真菌(如白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、葡萄牙念珠菌等)的抑制作用。方法收集临床上24株PA,通过革兰染色、氧化酶试验及API 20NE(法国梅里埃公司产品)进行鉴定;通过纸片法、十字交叉划线法及共培养检测PA对致病性真菌的抑制作用。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对有抑制作用的PA和无抑制作用的PA分泌蛋白进行电泳。结果 24株PA中部分菌株对常见的致病性真菌有显著抑制作用,而部分PA菌株有一定抑制作用,另外一些完全没有抑制作用;共孵育试验显示PA可能是通过抑制真菌的菌丝生长而产生抑制作用。SDS-PAGE显示有抑制作用的PA和无抑制作用的PA分泌物蛋白间存在明显差异。结论PA对常见的致病真菌具有抑制作用,推测可能与抑制真菌的菌丝生长及分泌抑制真菌生长的各种蛋白类物质有关。

60株铜绿假单胞菌耐药性分析及流行病学调查

目的分析一段时期内60株铜绿假单胞菌(PA)的耐药性并及其DNA多态性。方法对临床分离的60株不重复铜绿假单胞菌采用Kirby-bauer(KB)法进行药敏试验,并进行随机引物多态性扩增。结果耐药率最高的是米诺环素和复方新磺胺甲恶唑,分别为100%和96.6%,其次是哌拉西林(55%),左氧氟沙星(51.6%),亚胺培南(48.3%)和美洛培南(46.6%),耐药率较低是头孢他啶(15.0%)和阿米卡星(38.3%)。各菌株基因型差别较大,在同一科室内有小范围的流行。结论 PA对多种抗菌药物耐药率均较高,仅头孢他啶与阿米卡星耐药率较低,临床可考虑选用。各菌株基因型差别较大,RAPD可以作为PA流行病学调查的手段之一。

异体移植术后茄病镰刀菌血流感染一例

目的 提高临床对免疫系统低下患者血流感染少见深部真菌的认识,加强实验室对其培养、鉴定的能力,了解其临床表现和治疗方案.方法 报道实验室发现的一例确诊重症再生障碍性贫血患者异体移植术后血流感染茄病镰刀菌的临床表现、实验室检查和病原体的培养鉴定,并进行相关文献的复习.结果 患者分泌物普通细菌培养为镰刀菌和大肠埃希菌,血培养为镰刀菌,分别对这两株镰刀菌进行乳酸酚棉兰染色、分子生物学基因测序,鉴定结果为茄病镰刀菌.结论 茄病镰刀菌对造血干细胞移植术后的感染在国内尚比较少见,但国外报道感染率明显高于国内,且治疗困难,应引起临床和实验室的共同重视.而分子生物学的鉴定方法对其快速准确诊断提供了依据.

针刺膝四穴配合中药外敷治疗KOA的疗效评价

目的观察针刺膝四穴配合中药外敷治疗退行性膝关节炎(KOA)患者的临床效果。方法对100例(符合纳入标准)退行性膝关节炎患者随机分为两组,即针刺"膝四穴"对照组,针刺"膝四穴"配合"膝痛方"外敷治疗组,每组各50例,7次为一个疗程,共治疗3个疗程。观察患者治疗前后PSS评分、VAS评分、患者的血清白介素6含量的变化以及安全性评价。结果治疗组临床治愈15例,显效18例,好转13例,无效4例,总有效率92%,高于对照组的78%,治疗组VAS评分、PSS评分以及白介素6含量和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗的过程中,安全性评价较高,患者均未出现明显的不良反应。结论针刺"膝四穴"加外敷"膝痛方"治疗退行性膝关节病变疗效稳定,可有效缓解KOA患者的临床症状,值得临床推广。

一种快速提取新生隐球菌及其他酵母样真菌DNA方法

目的寻找一种快速提取酵母样真菌DNA的方法。方法使用酶溶解法提取新生隐球菌及其他酵母样真菌DNA,并对提取的DNA通过特异性引物进行PCR,所得产物进行酶切验证。结果用此方法提取的新生隐球菌基因组DNA浓度为280～395ng/μL,OD260/OD280比值为1.6～1.8,所提取的DNA可用于PCR的扩增检测特异性酵母样真菌。结论该方法可以用于提取新生隐球菌及其他酵母样真菌。

miR-1292-5p对肝癌SNU-449细胞自噬与增殖及细胞周期影响

目的研究miR-1292-5p对肝癌SNU-449细胞自噬、增殖及细胞周期影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌HuH7、HCC9204、SNU-449细胞和正常肝L-02细胞中miR-1292-5p表达水平。肝癌SNU-449细胞中转染miR-1292-5p mimics,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测相关蛋白表达。以蛋白激酶B/磷脂酰肌醇3激酶(Akt/PI3K)信号激活剂处理转染miR-1292-5p mimics以后的肝癌SNU-449细胞,以同样方法检测上述指标。结果肝癌HuH7、HCC9204、SNU-449细胞中miR-1292-5p表达水平低于正常肝L-02细胞(F=260.440,q=13.159~20.505,P<0.05)。转染miR-1292-5p mimics后的肝癌SNU-449细胞存活率降低,G 0/G 1期比例升高,凋亡率升高,C-Caspase-3、P21蛋白表达水平升高,Cyclin D1、Beclin1、ATG5蛋白表达水平降低,差异有显著性(F=27.553~611.793,q=7.116~24.042,P<0.05);p-Akt、p-PI3K蛋白表达水平降低,差异有显著性(F=42.043、60.545,q=10.307、7.603,P<0.05)。Akt/PI3K信号激活剂可逆转miR-1292-5p mimics对肝癌SNU-449细胞增殖、周期、凋亡和相关蛋白表达影响(t=5.154~15.949,P<0.05)。结论上调miR-1292-5p可以抑制肝癌SNU-449细胞自噬和增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,机制可能与抑制Akt/PI3K信号激活有关。