植物抗体基因工程：I．分泌马铃薯Y病毒中和抗体杂交瘤细胞系的筛选

酶联免疫吸附试验证实，Ｄ７３、Ｄ９０和Ａ６９三个杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体均能够与马铃薯Ｙ病毒株系ＰＶＹ￣ｏ、ＰＶＹ￣Ｎ和ＰＶＹ￣ｃ发生反应，但以Ｄ７３的亲和性为最强。进而进行的侵染抑制试验也证实经Ｄ７３单克隆抗体处理后的病毒接种物，其在‘Ａ６’（ＳｏｌａｎｕｍｄｅｍｉｓｓｕｍｘＳ．ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）离休叶片引起枯斑的能力显著地受到抑制。因此，选用Ｄ７３杂交瘤细胞系作为分离马铃薯Ｙ病毒中和抗体基因的材料，对其分泌的抗体轻链和重链的亚类进行鉴定，结果发现组成该单克隆抗体分子的轻链和重链分别为Ｋ链（ｋａｐｐａ）和γ＿１链。

体外冲击波联合等速肌力训练对膝关节骨性关节炎患者的治疗效果分析

目的:分析体外冲击波联合等速肌力训练对膝关节骨性关节炎患者的治疗效果。方法:选择2022年3月—2024年3月泰安市中医医院收治的150例膝关节骨性关节炎患者为研究对象,以随机表法将其分为研究组和对照组,各75例。对照组采用等速肌力训练治疗,研究组在对照组基础上采用体外冲击波治疗,对比两组治疗效果、炎性因子、疼痛程度。结果:研究组治疗总有效率97.33%高于对照组的85.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组疼痛视觉模拟评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β,超敏C反应蛋白均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外冲击波联合等速肌力训练应用于膝关节骨性关节炎患者的治疗中效果较好,可改善疼痛感,抑制炎症因子水平,具有应用价值。

植物抗体基因工程：II．马铃薯Y病毒中和抗体cDNA基因文库的构建及含抗体轻链和重链基因阳性克隆的筛选

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模板，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔ１１中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。经免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出３０个含抗体轻链基因和１０个含抗体重链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｎＧＥＭ－７Ｚ（＋）质粒中，经酶切分析和电泳检测，证实在获得的轻链和重链阳性克隆中各有一个质粒（Ｋ６和Ｇ９）具有较长的外源ＤＮＡ插入（分别为１Ｋｂ和１．６Ｋｂ），它们可能编码完整的抗体轻链和重链蛋白。

植物抗体基因工程：Ⅲ．马铃薯Y病毒小鼠中和抗体链基因的序列分析及其植物表达载体的构建

序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体轻链基因（Ｋ６）全长为９５６个核苷酸碱基（不包括ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区３１个核苷酸碱基，编码轻链信号肽的５７个核苷酸碱基，编码成熟蛋白的６５７个核苷酸基和３＇端非编码区的２１１个核苷酸碱基。与已知的其它Ｋ轻链基因（ＭＲＫ１６）相比，核苷酸的序列同源性为９８．７％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为９７．０％，其变异主要发生在三个抗原识别位点内（ＣＯＲ）。将完整的抗体轻链基因正向插入植物表达载体ｐＢ１２１中的原ＧＵＳ基因位置上，置于花椰菜花叶病毒３５Ｇ启动子控制之下，获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Ｙ病毒中和抗体轻链基因的植物表达载体ｐＹＬ。

利用转基因植物生产人乳蛋白

ＡｇｒｉｃｅｌＲｅｐｏｒｔ１９９９年３２卷第３期第２０页报道：在人乳和其他人分泌物中存在的铁离子结合糖蛋白乳铁蛋白（ｌａｃｔｏｆｅｒｉｎ）是胎儿防御体系中的重要成分，具有抗细菌、真菌和抗病毒活性及其他多种功能。法国的Ｖ．Ｓａｌｍｏｎ，Ｇ．Ｓｐｉｋ（法...

植物抗体基因工程：Ⅳ．马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因的序列分析及其植物表达

序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体重链基因（Ｇ９）全长为１５０５个核苷酸碱基（不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区１６个核苷酸碱基、编码重链信号肽的５７个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的１３２９个核苷酸碱基和３＇端非编码区的１０３个核苷酸碱基。与已知的小鼠抗体Ｍｏｐｃ２１的重链基因（γ１）相比，核苷酸的序列同源性为９４．４％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为９２．６％，其中可变区内（ＶＨ）的氨基酸序列同源性达７４．５％，这表明二者起源于同一种系基因。将完整的抗体重链基因正向插入植物表达载体ｐＢⅠ１２１中的原ＧＵＳ基因位置上，置于花椰莱花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Ｙ病毒中和抗体重链基因的植物表达载体ｐＹＨ。

生物技术与农业——现状与展望

一、我国农业生产存在的问题我国是一个拥有12亿人口的农业大国,耕地面积仅占世界的70%,但必须养活占世界约五分之一以上的人口。到下个世纪初,我国的人口将达到16亿,粮食供给任务更加艰巨,因此,不断提高粮食产量和改善作物品质是摆在全中国人民面前一个急待解决的问题。目前我国的农业生产力水平与发达国家相比,还具有相当大的差距,这除了人为因素外,

兔骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及移植修复脊髓损伤实验研究

目的:探究骨髓基质源性神经干细胞对于修复脊髓损伤的可行性和可靠性。方法:采用新西兰白兔作为研究对象,提取骨髓基质细胞加以培养分化,手术方式将骨髓基质细胞源性神经干细胞悬浊液移植到脊髓损伤部位,观察损伤区域再生情况。结果:早期培养细胞在无诱导分化时能表达巢蛋白,表明其有干细胞活性;干细胞移植后脊髓损伤部位增殖细胞排列无层次,且Brd U染色呈阳性。结论:兔骨髓基质细胞在合适的体外培养条件下能分化成干细胞,具有增殖分化能力,可以应用于修复脊髓损伤等神经学科领域。

九仙山小流域不同植物群落土壤蓄水功能研究

采用森林水文学研究方法,对九仙山小流域不同植物群落的土壤水分贮存与入渗特征进行研究。结果表明:1)森林群落具有显著提高林地土壤孔隙度、土壤贮水量和土壤入渗速率的作用,其中麻栎林要好于侧柏林、刺槐林、杨树林,而枣树林最差;2)有林地的土壤入渗率明显高于荒草坡地,说明不同森林群落具有改善土壤入渗性能的作用。其中侧柏林提高土壤入渗速率的幅度最高,随后是麻栎林、刺槐林、杨树林,最差的是枣树林;3)Horton模型比较适用于模拟研究区的土壤入渗过程,但通用幂函数模型和Philip模型的适用性较差。

不同土壤水分下山杏光合作用光响应过程及其模拟

利用CIRAS-2型便携式光合作用测定系统,在黄土高原丘陵沟壑区,测定了山杏(Prunus sibirical L.)在8个土壤水分梯度下光合作用的光响应过程,并采用直角双曲线模型、非直角双曲线模型和直角双曲线修正模型对其进行拟合分析。结果表明:土壤相对含水量(RSWC)在56.3%—80.9%范围内,山杏在强光下能维持较高的光合作用水平,受到的光抑制不明显。在此土壤水分范围内,3个模型均能较好地拟合光合作用的光响应过程及其表观量子效率(Φ)、光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(Rd),对Φ、LCP和Rd的拟合精度以非直角双曲线模型>直角双曲线修正模型>直角双曲线模型。但超出此范围(即RSWC<56.3%或RSWC>80.9%)时,山杏的光合作用在强光下会发生明显的光抑制,表现为光合速率随光强增加而明显降低,量子效率和光饱和点明显减小,此时只有直角双曲线修正模型能较好地拟合山杏光响应过程及其特征参数。结论:山杏光合作用正常的土壤水分范围在RSWC为56.3%—80.9%之间;直角双曲线修正模型能较好地拟合各种土壤水分下山杏的光响应过程及其特征参数;直角和非直角双曲线模型适用于正常水分下山杏光响应过程及其特征参数的模拟,但不能用于拟合胁迫水分(或光抑制)下的光响应过程。

一种修正的自适应网格交互多模型算法

将径向速度引入到自适应网格交互多模型算法中,并针对自适应网格算法在跟踪过程中网格中心不稳定的问题增添模型集改变阈值,提出了一种修正的自适应网格交互多模型算法。同时对一些关键参数作了深入研究。仿真表明,提出的修正算法提高了算法稳定性,增强了模型滤波器与真实运动模式的匹配程度,减小了跟踪的速度误差和距离误差,很好地改善了跟踪性能,并具有全面自适应的跟踪能力。

烟梗形变工艺参数对梗丝内在质量的影响研究

为提高梗丝内在质量,对烟梗形变工艺参数开展3因子2水平正交试验,经回归分析研究不同压梗厚度、切梗丝宽度和烟梗温度对梗丝填充值、出丝率和感官质量的变化规律。结果表明:压梗厚度、切梗丝宽度均同梗丝填充值呈负相关;切梗丝宽度在0.094mm,压梗厚度在1.025mm的基础上尽可能小,梗丝出丝率最优;切梗丝宽度和压梗厚度的交互作用为香气质提升贡献较大;切梗丝宽度对谐调性的提升,杂气的遮掩,刺激性的透发较为明显,压梗厚度几乎对三项指标无贡献性。

2型糖尿病小鼠模型的建立与评价

目的通过高热量饮食与小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病小鼠模型。方法采用随机数字表将30只雄性昆明种(KM)小鼠随机分为对照组和模型组(n=15),模型组小鼠饲喂高热量饲料1个月后,连续2~4 d腹腔注射30 mg/kg体重剂量的STZ;对照组则饲喂标准维持鼠料及注射等量柠檬酸盐缓冲液。观测小鼠食水量、体重等一般情况,并于造模后第1、2、4、5、12、21周尾尖采血检测血糖值,在小鼠血糖趋于稳定时检测血清胰岛素(INS),血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL),血浆糖化血红蛋白(Hb A1c)含量,并进行口服葡萄糖耐量试验。结果模型组小鼠存活率为100%。与对照组相比,模型组小鼠注射STZ后体重逐渐下降并于第4周降到最低,此后逐渐回升,直到第21周仍显著低于对照组(t=3.160,P=0.006)。模型组小鼠在造模后血糖水平均明显高于造模前和对照组(P均<0.05);随着时间推移,血糖值也在不断上升,至21周,小鼠血糖值仍旧保持在较高水平的(26.38±1.34)mmol/L。造模后第4周,模型组小鼠的空腹血糖为(11.86±3.33)mmol/L,明显高于对照组的(6.37±1.27)mmol/L(t=-3.830,P=0.002);空腹血清胰岛素水平与对照组差异无统计学意义[(5.73±0.24)m U/L比(5.48±0.32)m U/L;t=-0.863,P=0.416];胰岛素敏感指数为0.0145±0.0039,明显低于对照组的0.0267±0.0039(t=4.414,P=0.003)。造模后第6周,模型组小鼠在口服灌胃葡萄糖0、30、60、120 min后的血糖分别为(15.35±1.82)、(26.45±1.07)、(25.58±1.46)、(26.15±1.00)mmol/L,均明显高于对照组的(6.88±1.75)(t=-8.203,P=0.000)、(17.65±2.94)(t=-6.884,P=0.000)、(13.18±2.04)(t=-12.110,P=0.000)、(7.37±3.40)mmol/L(t=-12.969,P=0.000)。造模后第8周,模型组小鼠的血清TC和TG水平分别为(3.83±0.06)和(2.20±0.20)mmol/L,明显高于对照组的(3.10±0.10)(t=11.000,P=0.000)和(0.90±0.10)mmol/L(t=10.070,P=0.000);HDL水平为(2.03±0.06)mmol/L,明显低于对照组的(2.48±0.02)mmol/L(t=11.662,P=0.000);LDL水平上升但差异无统计学意义[(0.34±0.08)mmol/L比(0.26±0.02)mmol/L;t=1.680,P=0.168];Hb A1c含量为(7.30±0.31)%,明显高于对照组的(4.40±0.32)%(t=-11.587,P=0.000)。结论采用高热量饮食与小剂量多次腹腔注射STZ的方法成功建立了2型糖尿病KM小鼠模型。

造纸法再造烟叶单独制丝关键工序加工条件对加工质量的影响

为分析造纸法再造烟叶单独制丝关键工序加工条件对加工质量的影响情况,研究了造纸法再造烟叶切丝和烘丝工序加工条件对加工质量的影响。结果表明:①随切丝机刀门压力增大,再造烟叶丝跑片比例减少、粘连并条比例增加;切丝宽度与刀门压力无明显线性关系,刀门压力过低,切丝合格率下降;②随切丝过程物料含水率增加,再造烟叶丝跑片比例略有减少、粘连并条比例增加,飞灰情况逐渐减轻;切丝宽度和宽度合格率与物料含水率无明显线性关系;③随烘丝加工强度的增加,烘后再造烟叶丝卷曲度增加、填充值略有增加。

植物耐盐碱基因工程研究进展

随着全球人口的增加,可利用耕地面积的减少,越来越严重的粮食危机使地球上的盐渍化土地的开发利用开始受到关注。人们正在通过各种途径改良盐渍化土地、培育高耐盐碱的农作物新品种。介绍了植物的耐盐碱机制以及植物耐盐碱基因工程目前的研究概况和未来的发展方向。

CP4-EPSPS转基因棉花植株鉴定方法比较分析

CP4-EPSPS是从土壤农杆菌CP4菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因,是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因。但是在CP4-EPSPS转基因植物后期筛选过程中仅凭简单的草甘膦抗性筛选并不能得到完全准确的鉴定结果,常会出现假阳性或漏选的情况。本研究以抗草甘膦转CP4-EPSPS基因棉花为材料,对PCR扩增、ELISA、CP4-EPSPS蛋白检测试纸条及草甘膦抗性四种转基因阳性植株筛选方法进行比较,从筛选结果的准确性、时效性、易用性及实惠性等不同方面综合分析了各种筛选方法的优缺点,结果表明ELISA、试纸条检测方法的准确性显著高于PCR检测与0.3%浓度草甘膦抗性检测,而试纸条检测操作更加便捷,因此建议将草甘膦抗性与试纸条检测方法结合起来使用。本研究结果为以CP4-EPSPS基因为标记筛选的转基因植物的室内及大田筛选提供实验依据。

大豆24kDa油体蛋白基因在大肠杆菌中的表达

分别构建了含全长大豆24 kDa油体蛋白基因、与大肠杆菌热敏毒素B亚基和定居因子CS6 B亚基基因以串联方式融合的全长大豆24 kDa油体蛋白基因、缺失N端74个氨基酸编码序列的油体蛋白基因及缺失C端152个氨基酸编码序列油体蛋白基因等4个大肠杆菌表达载体。除N端缺失的油体蛋白基因外,其它3个载体的IPTG诱导表达产物对E.coli生长表现出明显的抑制作用,菌液浓度与对照菌株相比,至少降低了3倍;而N端缺失了222个编码核苷酸的油体蛋白基因则对宿主细菌细胞的生长繁殖不再表现有任何毒性。进一步通过SDS-PAGE和Western印迹反应检测各表达载体的IPTG诱导表达产物时发现,仅有N端缺失的24 kDa油体蛋白基因片段在宿主细胞BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中有重组油体蛋白积累。

人胰高血糖素样肽-1的研究与应用进展

糖尿病的成因非常复杂,迄今为止,人们仍没有找到根治糖尿病的有效方法。尽管市面上销售和治疗糖尿病的化药不断涌现,但这些化药在降糖的同时,不可避免带来许多毒副作用,同时也并不能延缓一些糖尿病并发症的发展。人体自身分泌的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种小分子的多肽,长度仅有30个氨基酸,它属于葡萄糖浓度依赖型的,既可以特异性有效降低血糖浓度,又不会产生任何不良反应,加上GLP-1多重功效的发挥,使其成为II型糖尿病治疗的一个研究热点。要将GLP-1应用于临床,亟待解决它在体内的半衰期非常短的难题。因此,综述国内外对GLP-1的研究探索与应用的最新进展情况,旨在为研究人员和医务工作者在GLP-1相关药物研发上提供借鉴。

利用转基因植物生产乙肝口服疫苗

乙型肝炎危害全球大部分地区,由于没有切实可行的治疗方法,因此,控制和预防乙型肝炎便极其重要。转基因植物可表达外源乙肝表面抗原蛋白(HB_sAg)并保持自然状态的免疫原性,产生的疫苗不需纯化就可供口服使用,所以,本文提出,利用转基因植物生产廉价疫苗系统有巨大的前景,可代替微生物疫苗生产系统。

紫杉烷14β-羟基化酶基因片段的克隆及其植物表达载体的构建

采用CTAB法提取中国红豆杉基因组DNA,利用PCR技术克隆得到紫杉烷14β-羟基化酶(简称14OH)基因前半段,测序结果表明DNA片段序列为915bp,与报道的14OH基因同源性为98.3%。然后将获得的DNA片段(915bp)正反向插入到二元载体pZh01的GUS两端,构建成14OHRNAi植物表达载体pZ14a,又选其中与羟基化酶家族其他成员同源性低的部分(390bp),正反向插入到二元载体pZh01的GUS两端,构建成14OHRNAi植物表达载体pZ14b。同时将克隆得到的DNA片段(915bp)反向插入到二元载体pZh01中,构建成14OH反义RNA植物表达载体pZ14c。经PCR和酶切图谱分析鉴定,确认载体构建成功。