耐药结核病患者利奈唑胺血药浓度对血液系统毒性发生的影响

目的:分析应用利奈唑胺的耐药结核病患者的血药浓度对发生血液系统毒性的影响,并探索血液系统毒性发生的其他危险因素。方法:采用前瞻性队列研究方法,连续纳入首都医科大学附属北京胸科医院2019年1月至2021年2月应用含利奈唑胺化疗方案治疗的耐药结核病患者作为研究对象,共219例。收集研究对象的临床资料及服药后2 h的血液标本。应用高效相色谱-质谱法测定利奈唑胺的血药浓度。通过绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)确定血药浓度(峰浓度)对血液系统毒性的诊断价值,并确定最佳诊断临界值;采用多因素logistic回归分析研究对象发生血液系统毒性的影响因素。结果:219例研究对象中有92例(42.0%)发生了血液系统毒性反应,包括白细胞计数减少[15.5%(34/219)]、贫血[21.5%(47/219)]、血小板减少症[27.4%(60/219)]等,127例(58.0%)未发生任何相关毒性反应。发生血液系统毒性者利奈唑胺血药峰浓度为17.1(11.8,22.8)μg/ml,明显高于未发生者[14.7(10.4,18.0)μg/ml],差异有统计学意义(Z=-3.206,P=0.001)。未发生血液系统毒性者中的血清白蛋白<40 g/L者的比例为29.1%(37/127),明显低于血清白蛋白≥40 g/L者的比例[70.9%(90/127)],差异有统计学意义(χ2=7.998,P=0.005)。ROC曲线分析显示,利奈唑胺血药峰浓度对血液系统毒性有预测价值(曲线下面积为0.627),血药峰浓度为20.7μg/ml时是最佳诊断点。多因素logistic回归分析显示,血清白蛋白<40 g/L者血液系统毒性发生的风险是血清白蛋白≥40 g/L者的2.622倍(OR=2.622,95%CI:1.344~5.117);利奈唑胺血药峰浓度>20.7μg/ml者血液系统毒性发生的风险是血药峰浓度≤20.7μg/ml者的6.419倍(OR=6.419,95%CI:2.874~14.337)。结论:利奈唑胺引起的血液系统毒性发生比例高,尤其对于血清白蛋白<40 g/L和利奈唑胺血药峰浓度>20.7μg/ml的患者在应用利奈唑胺治疗时,应警惕血液系统毒性的发生。

脊柱结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的:探讨结核杆菌复苏因子(rpf)对脊柱结核脓液中结核杆菌生长的影响。方法:由宁夏医学院第一附属医院骨科提供的临床诊断为脊柱结核的住院患者手术获取的脓液标本25份,氢氧化钠溶液常规处理后,每份标本分为低浓度培养组、高浓度培养组和对照组。高浓度和低浓度组各设6管,分别含高、低两种浓度的rpfA、B、C、D、E及各种复苏因子组合,每管中加入7ml7H9液体培养基,并加入处理后的标本和相应的rpf;对照组1管,不加rpf。37℃培养,分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物600nm处的吸光度(OD值),同时于上述各时间点每管取10!l培养物涂7H11平板培养,取第30天培养物行抗酸染色检查,以证实培养物为结核杆菌。同时将处理后的脓液标本进行集菌法涂片抗酸染色和改良罗氏培养检测结核杆菌。结果:结核杆菌复苏培养阳性率(84%)显著高于涂片阳性率(60%)和改良罗氏培养阳性率(44%)(P<0.05或0.01)。复苏培养低浓度各组与高浓度各组在培养第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于对照组(P<0.05);复苏培养同一组内第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于第6天(P<0.01),而第16天和第30天与第11天比较无显著性差异(P>0.05);对照组第11天、第16天和第30天培养物OD值与第6天比较均无显著性差异(P>0.05);同一时间、同一浓度时,5种复苏因子单独应用与联合应用之间两两比较,除高浓度rpfA、B在培养第30天时分别与同一浓度、同一时间的rpfC、D、E和组合组之间及rpfA与B之间比较有显著性差异(P<0.05)外,其余均无显著性差异;同一种复苏培养,在同一时间高、低浓度比较,第30天时高浓度rpfA、B的OD值高于低浓度rpfA、B(P<0.05),低浓度rpfD高于高浓度rpfD(P<0.05),其余均无显著性差异。11例改良罗氏培养阳性和21例复苏培养阳性者的培养生长物抗酸染色检查均为抗酸杆菌,复苏培养生长物7H11平板培养第20d时可见淡黄色菜花状菌落,证实为结核杆菌。结论:结核杆菌复苏因子能有效促进脊柱结核脓液中结核杆菌的迅速生长,复苏培养法能提高脊柱结核脓液中结核杆菌的检出率。

HLA-DR.DQ基因与骨关节结核的易感性研究

探讨HLA -DR .DQ基因多态性与骨关节结核的遗传关联性 ,比较骨关节结核与肺结核之间易感基因的差异。方法 采用聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR -SSP)方法 ,对 86例骨关节结核 ,88例正常人及 34例肺结核的HLA -DR .DQ等位基因进行分析。结果 骨关节结核组与正常人比较 ,骨关节结核组DRB1 0 9、DQB1 0 30 1基因频率增高 (38.99%比 8.2 4 % PC <0 .0 0 0 1 RR =8.92 ;18.2 7%比 2 .6 6 % PC <0 .0 5 RR =2 .2 1) ,DRB1 13.2基因频率显著低于对照组 (4 .76 %比 2 0 .50 % PC <0 .0 0 1 RR =0 .18)。骨关节结核组与肺结核比较 ,DRB1 0 9、DQB1 0 30 1基因频率增高 (38.99%比 9.2 % PC <0 .0 0 0 1;18.15%比 1.85% PC <0 .0 0 1) ,而DRB1 15基因频率低于肺结核组 (17.17%比 36 .3% PC <0 .0 1)。结论 HLA -DRB1 0 9、DQB1 0 30 1可能是我国骨关节结核的易感基因 ,DRB1 13.2为保护基因。

结核分枝杆菌休眠菌的复苏培养与初始菌量的关系

目的探讨复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌复苏作用与初始菌量的关系。方法取培养100d的陈旧结核分枝杆菌(休眠菌),用7H9稀释成麦氏比浊1mg/ml,之后倍比稀释成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/ml。取12支无菌培养管,加入5ml7H9培养基并分为2组,每组依次加入上述各浓度结核分枝杆菌,第1组加入复苏因子蛋白质,第2组作为对照加入等体积7H9,37℃培养,分别在15、25、30、35d检测光密度值,并取1μl培养液涂7H11平板培养,进行菌落计数。重复上述实验。结果0、15、25、30、35d分光光度计检测光密度(OD)值结果显示:各浓度组间细菌增殖呈直线正相关性(P<0.05,P<0.01),即复苏因子对不同稀释浓度的复苏作用相同。7H11培养结果和OD值检测结果显示:各组两种方法检测结果呈直线相关性(P<0.05,P<0.01),即两种方法检测结果有一致性。结论复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌的复苏作用与初始菌量无关。

大学生问题指向应对方式影响心理健康的应激体验中介模型研究

目的:探讨大学生的问题指向应对方式,应激体验与不良情绪以及生活满意度之间的内在作用机制。方法:以380名大学生为研究对象,采用问题指向应对方式量表,知觉压力量表,生活满意度量表和症状自评量表,对他们的问题指向应对方式,应激体验与不良情绪以及生活满意度进行模型设定和验证。结果:沉思型问题指向应对方式分量表与生活满意度总分显著正相关(r=0.23),而与SCL-90总分显著负相关(r=-0.32);反应型和抑制型两个分量表与生活满意度总分显著负相关(r=-0.31和-0.26),而与SCL-90总分显著正相关(r=0.46和r=0.51)。问题指向应对方式通过应激体验间接作用于不良情绪和生活满意度的模型拟合指数为:χ2/df为1.72,NFI为0.93,CFI为0.94,GFI为0.92,TLI为0.94,RMSEA为0.03。结论:应激体验可能是问题指向应对方式和心理健康之间的一个重要的中介变量。

结核分枝杆菌休眠菌复苏初期与活跃期的差异表达基因分析

目的 寻找休眠结核分枝杆菌复苏的关键基因，探讨结核分枝杆菌复苏的机制。方法 取7H9培养20天的H37Rv作为对数生长期的活跃结核分枝杆菌，并提取RNA。取一部份对数生长期的H37Rv加入亚甲兰作为无氧标志，37℃密封培养，无氧状态下生长的H37Rv会随着培养基中的氧气耗尽而进入休眠状态，继续无氧培养1个月的陈旧菌即为休眠菌，取休眠菌，加入适量5个复苏因子蛋白质组合，37℃有氧培养三天，提取RNA。用mRNA纯化试剂盒纯化RNA。利用抑制性消减杂交（SSH）技术分析复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌和对数生长期结核分枝杆菌的基因组mRNA的表达差异。并通过基因克隆技术、基因测序和序列分析，寻找差异表达基因。结果我们通过SSH杂交，以活跃结核分枝杆菌cDNA为Tester的正相杂交和以复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌cDNA为Tester的反相杂交的各自Tester高表达或特异性表达的片段都得到了选择性扩增，杂交产物经连接pTA2载体、转化DH5α、蓝白斑筛选，正相获得78个阳性菌落，反相获得46个阳隆菌落。阳性单个菌落经液体LB培养基培养，以菌液为模板，T7、M13为引物，扩增插入片段，能扩增到明显的带，且带大于350pb的为阳性。则正相得到66个阳性扩增带，反相得到39个阳性扩增带。这105个阳性扩增带的菌液经测序分析，将序列完全相同的特异性序列筛选合并，正相获得41个不同的特异性序列，反相获得32个不同的特异性序列。再去掉因消减杂交不完全而使正、反相中都获得的相同序列，则正相有30个特异性序列，反相有21个特异性序列。51个序列通过Genbank检索，因有不同序列检索得到对应同一基因的情况，因此，正相30个特异性序列经检索后对应22个不同的基因，反相21个特异性序列经检索后对应9个不同的基因。在我们的实验中有2个基因是正、反相共有的（ribosomal RNA 23S rrl和Rv3661）。最后正相获得了20个活跃结核分枝杆菌特异性表达或高表达的功能基因，反相获得了7个休眠结核分枝杆菌特异性表达或高表达的功能基因，根据其功能不同分为8大类。结论利用SSH杂交技术可以筛选到复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌和活跃结核分枝杆菌的差异表达基因。为寻找休眠结核分枝杆菌复苏的关键基因奠定了基础。

硝酸盐还原酶试验检测结核分支杆菌耐药性的研究

随着化疗药物的临床应用,全球耐多药结核病形势日趋严峻,给结核病的防治带来很大的困难.……

论“新失业群体”的特征及其解决对策

近年来,失业问题成为整个社会关注的焦点。在我们的社会中存在着一个特殊的失业群体,即“新失业群体”。”“新失业群体”的存在带来许多的社会和家庭问题。文中从对“新失业群体”的界定入手,分析了其特征,提出了解决“新失业群体”问题的对策。

结核分枝杆菌复苏促进因子基因克隆及其蛋白质的表达

目的通过对结核分枝杆菌复苏促进因子基因的克隆、融合蛋白的表达、纯化，以获得高活性的结核分枝杆菌复苏促进因子蛋白质。为临床标本结核分枝杆菌复苏培养及功能研究提供物质基础。方法通过PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv的5个复苏因子基因，经内切酶酶切、胶回收，将片段亚克隆到T载体中，转化至DH5α。以PCR鉴定的阳性菌落转至LB中培养，菌液进行质粒提取、酶切、胶回收，回收片段再克隆至表达载体pET30a中，转化至DH5α中。PCR阳性菌落转至LB中培养，测序确定插入片段的正确性，菌液提取质粒，并再转化至BL21（DE3）中。经PCR鉴定阳性的菌液通过适当的IPTG浓度诱导，适宜温度和时间下，诱导蛋白表达，经SDS—PAGE电泳分析，Western blot检测目的蛋白，在最佳条件下大量表达目的蛋白，并纯化。结果获得有活性的高纯度复苏促进因子蛋白，纯度〉90％。结论复苏促进因子蛋白的成功表达为下一步摸索临床标本结核分枝杆菌复苏培养最佳方案及复苏基因的功能研究打下良好基础。

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分支杆菌耐药性的研究

目的 建立一种快速结核分支杆菌耐药性试验方法。方法 以绝对浓度法为“金标准”，对已知耐药的结核分支杆菌菌株及敏感株采用硝酸盐还原试验(NRA)检测其耐药性。结果 两种方法可比性好，与绝对浓度法比较，硝酸盐还原试验敏感性为96.5％以上，特异性100％；NRA法比绝对浓度法平均提前3周出结果。结论 硝酸盐还原试验可作为一种快速结核分支杆菌耐药性试验方法。

结核分枝杆菌复苏因子Rv2450c基因的克隆、表达和纯化

目的对结核分枝杆菌复苏因子Rv2450c基因克隆、并测序正确后进行融合蛋白表达、纯化。方法通过PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv复苏因子Rv2450c基因，酶切，克隆至PGEM—TEasy质粒，测序确定插入片段的正确性．再克隆至表达载体pET30a中，并转化至BL21（DE3）中。经PCR鉴定阳性的菌液通过IPTG诱导，表达氨基端带6个连续组氨酸残基的Rv2450c蛋白，并纯化。结果获得了结核分枝杆菌复苏因子Rv2450c基因，构建了重组表达质粒，得到融合了6个连续组氨酸残基的Rv2450c蛋白，纯度〉90％。结论应用基因重组表达技术表达结核杆菌复苏因子蛋白，可为下一步摸索临床标本结核分枝杆菌复苏培养及复苏基因的功能研究打下一个良好的基础．

结核分枝杆菌休眠菌的复苏培养与初始菌量的关系

目的探讨复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌复苏作用与初始菌量的关系。方法取培养100d的陈旧结核分枝杆菌（休眠菌），用7H9稀释成麦氏比浊1mg／ml，之后倍比稀释成0．5、0．25、0．125、0．0625、0．03125mg／ml。取12支无菌培养管，加入5ml7H9培养基并分为2组，每组依次加入上述各浓度结核分枝杆菌，第1组加入复苏因子蛋白质，第2组作为对照加入等体积7H9，37℃培养，分别在15、25、30、35d检测光密度值，并取1μ1培养液涂7H11平板培养，进行菌落计数。重复上述实验。结果0、15、25、30、35d分光光度计检测光密度（OD）值结果显示：各浓度组间细菌增殖呈直线正相关性（P〈0，05，P〈0．01），即复苏因子对不同稀释浓度的复苏作用相同。7H11培养结果和OD值检测结果显示：各组两种方法检测结果呈直线相关性（P〈0．05，P〈001），即两种方法检测结果有一致性。结论复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌的复苏作用与初始菌量无关。

骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的探讨骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养方法。方法应用含不同浓度复苏因子蛋白的7H9液体培养基培养标本，分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物的OD值、取10uL涂7H11平板培养、抗酸染色，并同时将标本进行罗氏培养和涂片抗酸染色。结果复苏培养阳性率高于涂片阳性率和罗氏培养阳性率．二者均有统计学显著差异（P〈0．05）；复苏培养平均在第10天进入对数生长期，其OD值与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论结核杆菌复苏因子能有效地促进骨关节结核脓液中结核杆菌的生长。

结核分枝杆菌复苏因子E的真核表达及鉴定

目的构建结核分枝杆菌复苏因子ENN的真核表达质粒。方法PCR扩增结核分枝杆菌复苏因子E基因片段。将片段克隆至PcDNA3．1（-）载体，重组质粒测序正确后，转染至CHO细胞中，表达复苏因子E蛋白质。RT—PCR检测克隆基因mRNA在真核细胞中的表达，收集并纯化表达的蛋白质，SDS—PAGE分析和Westenblot分析检测目的蛋白的表达，淋巴细胞增殖实验（CCK-8）鉴定表达蛋的免疫原性。结果成功构建了结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒。RT—PCR证实克隆基因mRNA在真核细胞中表达，SDS-PAGE分析和Westenblot分析均证实目的蛋白在真核细胞中成功表达，淋巴细胞增殖实验（CCK-8）进一步证实了表达蛋白具有免疫原性。结论我们成功地构建了复苏因子E真核表达系统。

红细胞免疫中RCIA活性及CIC水平在肺癌诊断中的临床价值

目的 建立红细胞免疫粘附活性 (RCIA)及循环免疫复合物水平 (CIC)测定的酶联免疫检测方法。方法 用此法同时对 2 0 2例正常人及 2 4例肺癌病人进行了检测。结果 RCIA活性正常值为 (1.5 5± 0 .90 ) ,肺癌病人为 (1.12± 0 .73)。CIC水平正常值为 (4.5 4± 2 .12 ) ,肺癌病人为 (7.0 3± 3.2 3)。结论 我们建立的测定红细胞免疫功能的方法 ,灵敏度高 ,方法简便可靠 。

鸟分支杆菌pncB基因的克隆及测序分析

目的 研究鸟分支杆菌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的代谢。方法 筛 选鸟分支杆菌基因组文库和亚克隆。结果 得到了鸟分支杆菌的编码烟酸磷酸核糖转移糖的基因pncB的全序列。结论 用筛选基因组文库的方法寻找新基因的方法是可行的。

红细胞免疫中RCIA活性及CIC水平在肺癌诊断中的临床价值

建立了酶联免疫检测红细胞免疫粘附活性（ＲＣＩＡ）及循环免疫复合物水平（ＣＩＣ）的测定方法，同时用此方法对２０２例正常人及２４例肺癌病人进行了检测，结果：ＲＣＩＡ活性正常值为１．５５±０．９０，肺癌病人为１．１２±０．７３，Ｐ〈０．０５，ＣＩＣ水平正常值为４．５４±２．１２肺癌病人为７．０３±３．２３，Ｐ〈０．０１。实验证明：我们建立的测定红细胞免疫功能的方法，灵敏度高，简便可靠，适合临床推广应用。

HLA—DR.DQ基因与骨,关节结核的易感性研究

目的 探讨ＨＬＡ－ＤＲ．ＤＱ基因多态性与骨、关节结核的遗传关联性，比较骨、关节结核与肺结核之间易感基因的差异。方法 采用聚合酶链反应一列特异引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对８６例骨、关节结核，８８例正常人及３４例肺结核的ＨＬＡ－ＤＲ．ＤＱ闰基因进行分析。结果 骨、关节结核组与正常人比较，骨、关节结核组ＤＲＢ１＾＊０９ ＤＱＢ１＾＊０３０１基因频率增高（３８．９９％比８．２４％ ＰＣ〈０．００１

909例结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测结果分析

目的分析结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测情况。方法选取2010年1月至2016年11月于首都医科大学附属北京胸科医院住院并进行一线抗结核药物血药浓度测定者作为研究对象，共909例；其中，服用INH者909例，服用EMB者783例，服用PZA者587例，服用RFP者503例。患者服药剂量：INH300mg／d、RFP450mg／d或600mg／d、PZA1500mg／d、EMB750mg／d。收集研究对象性别、年龄、并发糖尿病情况，以及血药浓度监测结果，并进行分析。结果服用INH、EMB、PZA和RFP（450mg／d和600mg／d）2h后，患者血药浓度低于目标浓度范围者分别占57．3％（521／909）、82．2％（644／783）、29．8％（175／587）、51．6％（190／368）和36．3％（49／135）。其中，男性患者中INH、EMB、PZA、RFP（450mg／d）出现低血药浓度者分别占67．2％（396／589）、85．9％（451／525）、39．9％（153／383）、60．0％（135／225），均高于女性患者[39．1％（125／320）、74．8％（193／258）、10．8％（22／204）、38．5％（55／143）]，差异均有统计学意义（X2值分别为67．26、14．59、54．10、16．24，P值均〈0．01）。体质量≥50kg的患者，INH、EMB、PZA、RFP（450mg／d）出现低血药浓度者分别占61．7％（428／694）、83．3％（513／616）、35．3％（159／451）、55．6％（154／277），均高于体质量〈50kg者[30．3％（40／132）、72．4％（76／105）、4．7％（4／86）、37．1％（23／62）]，差异均有统计学意义（X2值分别为44．44、7．12、32．00、6．95，P值均〈0．05）。结核病并发糖尿病患者，INH和PZA出现低血药浓度者分别占72．6％（143／197）和53．8％（71／132），高于未并发糖尿病者[53．1％（378／712）和22．9％（104／455）]，差异均有统计学意义（X2值分别为23．98和46．78，P值均〈0．01）。结论结核病患者服用一线抗结核药物后出现低血药浓度情况较为普遍，患者性别、体质量、并发症等因素均会影响其血药浓度水平；提示开展一线抗结核药物血药浓度监测工作，并根据患者个体情况调整治疗方案对结核病治疗是必要的。

高中生认知性情绪调节策略的性别差异

目的:探讨高中生在认知性情绪调节策略的使用以及其对抑郁症状预测作用的性别差异。方法:采用横断面研究设计,在湖南2所普通中学高中部的一年级和二年级各随机抽取5个班级,获得有效样本505人,其中女生262人,男生243人,完成认知性情绪调节问卷和流调中心用抑郁量表。结果:女生认知性情绪调节问卷的自我责难、沉思、灾难化分量表分均高于男生[(12.1±2.2)vs.(11.4±3.1),(12.2±3.3)vs.(11.3±3.6),(8.4±3.0)vs.(7.7±3.0);P=0.002,0.004,0.012],而积极重新关注、理性分析分量表分均低于男生[(11.2±3.0)vs.(12.0±3.4),(13.7±2.5)vs.(14.4±2.7);P=0.005,0.003]。多元回归分析的结果提示,在女性样本中,9个认知性情绪调节策略总的解释方差值为39%(R2=0.39),高水平的自我责难、沉思、灾难化可以显著增加抑郁发生的可能性。而在男性样本中,9个认知性情绪调节策略总的解释方差值为27%(R2=0.27),高水平的自我责难、沉思、灾难化以及低水平的积极重新关注和理性分析可以显著增加抑郁发生的可能性。与女生相比,男生的积极重新关注(β=-0.15)和理性分析(β=-0.18)均可以显著减少抑郁症状的发生。结论:高中生认知性情绪调节策略的使用以及其对抑郁症状的预测具有显著的性别差异。