山东地区鸭坦布苏病毒流行病学调查及分子变异分析

为了解山东地区鸭坦布苏病毒(DTMUV)的流行及其分子的遗传变异情况,本研究自山东的菏泽、泰安、济宁、枣庄等9个地区搜集临床样品,利用RT-PCR、荧光定量PCR等方法进行检测,并进行分离株E基因及全基因的遗传进化分析;同时,采用阻断ELISA方法检测不同地区未免疫DTMUV病疫苗的不同品种鸭群的血清样品。结果显示,临床样品中DTMUV检出率为13.3%(36/270)。对分离株E基因的序列分析表明,本研究分离的DTMUV与已发布的禽坦布苏病毒基因的同源性在96.5%以上。两株分离株的全基因序列分析表明,部分氨基酸位点发生了变异。血清抗体检测结果显示,不同地区及品种的DTMUV感染情况差别较大,肉鸭在德州和滨州未检测到阳性,而在泰安的阳性率为42.2%,后备种鸭和蛋鸭在各地区的阳性率高低不一;从鸭的品种来分析,蛋鸭是感染最严重的鸭群,阳性率为55.6%。结果表明,坦布苏病毒对山东水禽养殖仍有一定的危害,目前山东地区流行的DTMUV与之前分离的禽坦布苏病毒同源性较高,未出现明显的分子变异。

抗H9亚型禽流感病毒血凝素广谱单克隆抗体的筛选与鉴定

本研究通过血凝抑制实验和间接免疫荧光实验,在前期利用表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2)(SH441)血凝素(HA)基因的真核表达质粒免疫小鼠,成功获得多株抗H9亚型HA蛋白的单克隆抗体中,筛选到4株与2009-2015年间分离到的H9N2 AIV具有良好反应性的单克隆抗体;中和实验表明,这4株单抗均对SH441毒株具有中和活性;通过细胞瞬时表达HA蛋白和间接免疫荧光实验发现,这4株单抗均可以与HA的HA1区域结合,不与HA2反应。以上结果表明,筛选获得的4株单抗均可识别H9N2 AIV HA1上相对保守的氨基酸序列,对H9N2 AIV具有广谱的血凝抑制活性,将为H9N2 AIV通用疫苗研制及高通量抗体检测方法的建立提供重要材料。