人参总皂苷调控NK细胞活性促进5-氟尿嘧啶抗肿瘤的作用

目的探讨人参总皂苷(TSPG)调控NK细胞活性促进5-氟尿嘧啶抗肿瘤的作用机制。方法建立小鼠肝脏原位移植瘤模型,随机分为模型组、TSPG组、5-Fu组及TSPG+5-Fu组,给药观察14 d。实验结束分离肝脏并剥离肿瘤,计算肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率;应用HE染色观察肿瘤组织病理变化;采用免疫组化检测NK细胞在肿瘤组织中的浸润情况;通过流式细胞技术检测肝脏、脾脏中NK细胞含量;应用实时定量PCR检测肿瘤组织中穿孔素、颗粒酶B的mRNA表达水平。结果与模型组比较,各给药组肿瘤体积及质量均显著降低(P<0.05),肿瘤组织出现明显坏死;TSPG组NK细胞在肿瘤组织浸润增加(P<0.05);TSPG组与TSPG+5-Fu组肝脏、脾脏中NK细胞的含量均升高(P<0.05),肿瘤组织中穿孔素、颗粒酶B的mRNA表达水平亦升高(P<0.05)。结论TSPG可以增强5-Fu抗肿瘤的作用疗效,其机制可能与TSPG提高荷瘤小鼠体内NK细胞的数量及杀伤活性有关。

靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响。方法选取人肺癌A549细胞和SPC-A-1细胞,分为空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组,Nc-shRNA组为阴性对照RNAi慢病毒组,Notch1-shRNA组为Notch1抑制RNAi慢病毒组。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默Notch1基因,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting验证Notch1基因的沉默效果;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和成球实验检测细胞增殖能力;采用Annexin V/7-AAD 双染法检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)以及Notch1下游基因Hes-1的表达情况。结果 qRT-PCR结果显示A549细胞和SPC-A-1细胞中空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组Notch1相对表达量分别为1.000±0.000、0.937±0.025、0.490±0.036和1.000±0.000、1.077±0.070、0.373±0.038,差异均具有统计学意义(F=359.707,P<0.001;F=210.455,P<0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组Notch1相对表达量明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);Western blotting检测A549细胞和SPC-A-1细胞中Notch1蛋白表达的结果与mRNA结果一致。MTT实验显示A549细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在24 hA值分别为0.209±0.005、0.219±0.009、0.159±0.006,48 h A值分别为0.293±0.004、0.302±0.004、0.205±0.005,72 h A值分别为0.450±0.003、0.430±0.012、0.348±0.017,差异均具有统计学意义(F=79.487,P<0.001;F=508.664,P<0.001;F=57.156,P<0.001),进一步两两比较,24、48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);SPC-A-1细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在48 h A值为0.438±0.022、0.412±0.015、0.364±0.010,72 h A值为0.540±0.016、0.519±0.009、0.438±0.019,差异均具有统计学意义(F=15.667,P=0.004;F=37.299,P<0.001),进一步两两比较,48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05)。空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组A549细胞成球直径分别为(149.667±6.506)μm、(136.667±7.095)μm、(86.676±7.638)μm,差异具有统计学意义(F=65.940,P<0.001);SPC-A-1细胞成球直径分别为(118.667±6.658)μm、(128.000±7.000)μm、(60.675±4.509)μm,差异具有统计学意义(F=105.372,P<0.001);进一步两两比较,两种细胞Notch1-shRNA组成球大小明显小于Nc-shRNA组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测A549细胞和SPC-A-1细胞空白对照组、Nc-shRNA组、Notch1-shRNA组凋亡率分别为(0.489±0.014)%、(0.633±0.021)%、(1.683±0.221)%和(1.323±0.194)%、(1.690±0.188)%、(3.017±0.356)%,差异均具有统计学意义(F=77.660,P<0.001;F=32.200,P=0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组凋亡率明显高于Nc-shRNA组(均P<0.05)。Western blotting显示A549细胞空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组3组间PCNA、Bcl-2、Hes-1表达差异均具有统计学意义(F=155.343,P<0.001;F=22.576,P=0.002;F=70.108,P<0.001 ),SPC-A-1细胞空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组3组间PCNA、Bcl-2、Hes-1表达差异均具有统计学意义(F=49.419,P<0.001;F=28.090,P=0.001;F=12.040,P=0.007),进一步两两比较,两种细胞PCNA、Bcl-2、Hes-1表达在Notch1-shRNA组明显低于Nc-shRNA组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论靶向沉默Notch1能降低肺癌干细胞增殖活性,促进其凋亡,可能与其下游基因Hes-1下调有关。

Notch信号通路在肺癌和肺癌干细胞中的作用及其抑制剂

Notch信号通路参与肺癌干细胞的异常分化和自我更新,深入研究Notch信号通路在肺癌干细胞调控中的作用,有望在肺癌的诊断及治疗中找到新的靶点.作用于Notch信号通路的抑制剂可能成为有效治疗肺癌的药物.肺癌干细胞被认为是肺癌复发的主要因素,因此针对肺癌干细胞的靶向治疗可能比针对整个肿瘤的治疗更有效.

微小RNA在肺癌干细胞中的调控作用

肺癌干细胞在肺癌的化疗耐药以及侵袭转移中发挥着重要作用。越来越多的证据表明,微小RNA(miRNA)在肿瘤血管生成、耐药性和转移的调节中扮演着重要角色。鉴于肿瘤干细胞被认为是导致肿瘤复发、转移和化疗耐药的原因之一,因此更好地理解miRNA如何调节肺癌干细胞中的基因表达有助于识别新的肿瘤生物标志物和治疗靶点,并将有助于制定更好的肺癌治疗策略。