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采用杆状病毒/昆虫表达系统纯化蛋白制备抗hUTP14a多克隆抗体
1
作者
张春凤
刘惠蛟
+1 位作者
任鹏伟
杜晓娟
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期341-348,共8页
为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱...
为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱纯化抗体。在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中过表达Flag-hUTP14a,或用小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)沉默内源的hUTP14a蛋白表达后,提取细胞总蛋白质。经Western印迹分析制备的多克隆抗体的特异性;通过细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光、免疫组织化学染色和免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验对hUTP14a抗体的特异性进行鉴定。研究证实,制备的抗hUTP14a多克隆抗体能够特异性识别内源及外源表达的hUTP14a蛋白。该抗体可以用于细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色、免疫组织化学染色、Western印迹及免疫沉淀等技术,为进一步研究hUTP14a的生物学功能提供了特异性抗体。
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关键词
hUTP14a
杆状病毒/昆虫表达系统
多克隆抗体
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职称材料
题名
采用杆状病毒/昆虫表达系统纯化蛋白制备抗hUTP14a多克隆抗体
1
作者
张春凤
刘惠蛟
任鹏伟
杜晓娟
机构
北京大学基础医学院医学遗传学系
北京大学基础医学院细胞生物学系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期341-348,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.81874143)资助~~
文摘
为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱纯化抗体。在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中过表达Flag-hUTP14a,或用小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)沉默内源的hUTP14a蛋白表达后,提取细胞总蛋白质。经Western印迹分析制备的多克隆抗体的特异性;通过细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光、免疫组织化学染色和免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验对hUTP14a抗体的特异性进行鉴定。研究证实,制备的抗hUTP14a多克隆抗体能够特异性识别内源及外源表达的hUTP14a蛋白。该抗体可以用于细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色、免疫组织化学染色、Western印迹及免疫沉淀等技术,为进一步研究hUTP14a的生物学功能提供了特异性抗体。
关键词
hUTP14a
杆状病毒/昆虫表达系统
多克隆抗体
Keywords
hUTP 14a
baculovirus/insect expression system
polyclonal antibody
分类号
Q511 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
采用杆状病毒/昆虫表达系统纯化蛋白制备抗hUTP14a多克隆抗体
张春凤
刘惠蛟
任鹏伟
杜晓娟
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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