加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响

目的探讨加味四君子汤对泼尼松干预的阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响。方法制作大鼠阿霉素肾病模型,将50只SD大鼠随机分为5组,即模型组、激素组、中药组、中药加激素组及正常组。各组于造模后7、21、35天收集24 h尿标本,以双缩脲比色法测定大鼠24 h尿蛋白,以ELISA法测定各组血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for NF-κB ligand,RANKL)、骨钙素(osteocalcin,BGP)以及抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)水平,采用实时定量PCR和Western blot检测胫骨组织中OPG、RANKL的表达。结果 (1)与正常组比较,模型组第7、21、35天24 h尿蛋白均有不同程度增高(P<0.05,P<0.01);与模型组同期比较,激素组及中药加激素组24 h尿蛋白均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);并随着治疗时间的延长,降低更明显(P<0.05,P<0.01);中药组治疗35天,与模型组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。(2)与本组21天比较,激素组TRACP、RANKL均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,第21、35天,激素组TRACP、RANKL均升高(P<0.05,P<0.01),OPG、BGP均降低(P<0.05,P<0.01);与中药组同期比较,激素组、中药加激素组OPG均降低,RANKL均升高(P<0.05,P<0.01);且激素组TRACP升高,BGP降低(P<0.05,P<0.01);与激素组同期比较,中药加激素组OPG、BGP升高(P<0.05,P<0.01),RANKL降低(P<0.01);第35天,TRACP降低(P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组第21天OPG、RANKL mRNA升高(P<0.05,P<0.01),第35天OPG、RANKL mRNA降低(P<0.01)。与中药组同期比较,激素组OPG mRNA降低(P<0.01),RANKL mRNA升高(P<0.05);中药加激素组OPG mRNA降低(P<0.05)。(4)与本组21天比较,激素组OPG降低(P<0.05),RANKL升高(P<0.05),中药加激素组RANKL降低(P<0.05)。与模型组同期比较,激素组OPG降低(P<0.01),RANKL升高(P<0.01)。与中药组同期比较,激素组、中药加激素组OPG均降低(P<0.01),RANKL均升高(P<0.01);与激素组同期比较,中药加激素组OPG均升高(P<0.01),RANKL均降低(P<0.01)。结论泼尼松能通过OPG/RANKL/RANK通路诱导骨质疏松。加味四君子汤在降蛋白尿的同时,可通过上述通路促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞生成,从而减缓泼尼松诱导的骨质疏松的形成。

泼尼松对阿霉素肾病大鼠肾组织FAK/Pyk2表达的影响

目的观察泼尼松对阿霉素肾病大鼠FAK、Pyk2表达的影响。方法利用随机数字表将SD大鼠分为正常组、模型组、泼尼松组,建立阿霉素肾病大鼠模型,于阿霉素注射后第7天干预组以泼尼松10 mg/(kg·d)灌胃,于实验不同时间点测定24 h尿蛋白定量,观察肾组织电镜结果,实时荧光定量PCR检测FAK、Pyk2、Nephrin表达水平的变化,Western blot检测肾组织FAK、Pyk2蛋白及磷酸化蛋白,免疫组织化学法检测Nephrin表达水平。结果⑥与正常组比较,模型组尿蛋白升高(P<0.01);⑥与模型组比较,治疗组尿蛋白降低(P<0.01);⑥模型组电镜可见足细胞足突广泛融合,免疫组化示治疗组Nephrin较模型组有改善(P<0.05);⑥第21、35天,模型组、治疗组Nephrin mRNA表达较正常组低,FAK mRNA表达较正常组升高(P<0.01),治疗组Nephrin mRNA表达较模型组上升(P<0.05);⑥第21、35天,模型组FAK总蛋白及其磷酸化蛋白表达、P-FAK/FAK、P-Pyk2/Pyk2较正常组高(P<0.01),治疗组FAK总蛋白及其磷酸化蛋白表达、P-FAK/FAK、P-Pyk2/Pyk2较模型组降低(P<0.01);⑥多元相关分析显示,尿蛋白与FAKmRNA、FAK、pFAK、Pyk2mRNA及pPyk2/Pyk2比值呈正相关(r=0.819、0.750、0.838、0.762、0.934,P<0.01)。结论阿霉素可能通过激活FAK、Pyk2磷酸化导致肾病的发生;泼尼松能抑制FAK、Pyk2激活,降低阿霉素肾病大鼠蛋白尿,改善足突病变,从而保护肾小球滤过屏障。

骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对阿霉素肾病大鼠骨代谢的影响。方法制作大鼠阿霉素肾病模型,将50只SD大鼠随机分为5组,即A组:正常组,B组:模型组,C组:激素组,D组:干细胞组,E组:干细胞+激素组。各组于造模后7、21和35 d收集24 h尿标本,以双缩脲比色法测定大鼠尿蛋白,以ELISA法测定血清骨保护蛋白(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的水平,用实时定量PCR和Western blot检测胫骨组织中OPG和RANKL的表达。结果与A组比较,第7天,各组尿蛋白升高(P<0.05);与B组比,第21天和35天,C组、D组、E组尿蛋白降低(P<0.05)。与B组比较,C组血清RANKL增多,OPG减少(P<0.05);与C组比较,D组和E组血清OPG表达增多(P<0.05,P<0.01),RANKL减少(P<0.05);与D组比较,E组血清OPG减少、RANKL增多(P<0.05)。与B组比较,C组骨组织OPG蛋白及mRNA减少(P<0.05,P<0.01),RANKL蛋白及mRNA增多(P<0.01);与C组比较,D组和E组骨组织OPG蛋白及mRNA增多(P<0.05),RANKL蛋白及mRNA的表达减少(P<0.01)。与D组比较,E组骨组织OPG蛋白及mRNA减少、RANKL蛋白增多(P<0.05,P<0.01)。结论BMSCs可能通过OPG/RANKL/RANK通路促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞生成,从而减缓泼尼松诱导的骨质疏松的形成。

尿毒清颗粒对慢性肾脏病钙磷代谢及成纤维生长因子23的影响

目的：探讨尿毒清颗粒对慢性肾脏病（CKD）3-5期钙、磷代谢及成纤维生长因子23（FGF23）水平的影响。方法：选择符合美国2002年K/DOQI CKD诊断标准3-5期患者54例,随机分为治疗组（尿毒清颗粒）和对照组,同时选取正常组20例。测定外周血中FGF23、全段甲状旁腺激素（i PTH）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、Ca、P水平,以及尿肌酐水平;根据MDRD公式计算肾小球滤过率（GFR）。结果：随着GFR的下降,CKD3-5期患者的血P、FGF23、BUN、Scr较正常组均显著升高,血Ca较正常组显著下降,差异均有统计学意义（P〈0.01）。CKD3-4期：与治疗前比较,治疗组Scr下降显著（P〈0.05）,P、FGF23均显著下降（P〈0.01）,GFR显著提高（P〈0.01）,BUN下降但无显著差异（P〉0.05）;对照组FGF23显著下降（P〈0.05）,Scr下降、GFR提高,但均无显著差异（P〉0.05）;两组Ca均提高,无统计学意义（P〉0.05）;与对照组比较,治疗组的P、FGF23均显著下降（P〈0.05或P〈0.01）。CKD5期：与治疗前比较,治疗组GFR显著提高（P〈0.01）,Ca提高（P〈0.05）,两组的FGF23也下降（P〈0.05或P〈0.01）,BUN、Scr、P也下降,但无明显差异（P〉0.05）,对照组GFR提高,但无明显差异（P〉0.05）。结论：尿毒清颗粒具有改善患者钙、磷代谢以及FGF23水平的作用,且其可能通过改善血中钙、磷代谢水平,降低PTH、FGF23等因子的表达,从而延缓CKD-MBD的进展。

加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠FAK/p38MAPK途径的影响

目的:探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及对FAK/p38途径的影响。方法:建立阿霉素肾病综合征大鼠模型,以随机数字表随机分为正常组、模型组、激素组、中药组(加味四君子汤)、中药+激素组,每组10只。测大鼠24h尿蛋白;电镜下进行肾脏超微病理观察,实时荧光定量PCR检测肾组织FAK、p38mRNA表达,Western Blot检测肾皮质FAK、p38蛋白及磷酸化。结果:1第21天,激素组、中药组、中药+激素组尿蛋白均较模型组降低(P<0.05,P<0.01)。第35天,与模型组比较,3组尿蛋白均显著性降低(P<0.01)。第35天与第21天相比,模型组显著性升高、激素组和中药+激素组显著性降低(P<0.05)。2模型组足细胞肿胀,足突增宽、部分或弥漫性融合;各治疗组肾小球病变明显减轻,仅见部分足突融合。3与模型组比较,各药物干预组FAK mRNA、p38 mRNA表达显著性减少(P<0.01)。4模型组FAK总蛋白及FAK、p38磷酸化蛋白显著性增高(P<0.01),与模型组比,各药物干预组FAK总蛋白及FAK、p38磷酸化蛋白显著性降低(P<0.05)。结论:阿霉素可通过FAK/p38途径导致阿霉素肾病的形成;肾组织FAK磷酸化,可诱导下游p38通路激活,介导肾脏损伤;加味四君子汤、激素能抑制FAK/p38通路,降低阿霉素肾病大鼠蛋白尿。