酰胺单核苷酸在多囊卵巢综合征中的作用研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病,其病因及病理生理机制仍不清楚。烟酰胺单核苷酸(NMN)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)生物合成的前体,增加卵巢组织NAD+水平可改善PCOS的临床症状。NMN有非常广泛的生物药理学活性,在细胞生化功能、抗衰老、抗炎症、心脏保护、糖尿病、阿尔茨海默病和肥胖相关并发症中都起到了良好的作用。本文就NMN在PCOS患者炎症、肥胖、糖尿病及胰岛素抵抗中作用的研究进展进行综述。

STGC3基因突变载体的构建及其在CNE2细胞中的表达

目的:构建STGC3基因单碱基位点突变载体并观察CNE2细胞中STGC3蛋白表达情况,为探讨STGC3基因发挥抑瘤作用的功能性位点提供前期基础。方法:针对STGC3基因糖基化、蛋白激酶C磷酸化、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化3个(656C、725C、913T)可能性功能位点,运用Stratagene定点突变技术,对STGC3基因656C、725C、913T位点分别进行单碱基定点突变,使656C突变为G,725C突变为T,913T突变为G,构建突变表达质粒,同时构建野生型质粒为对照。质粒经转化、抽提、酶切及测序鉴定。将重组真核表达质粒,用脂质体转染至鼻咽癌CNE2细胞系,经G418筛选,得到稳定表达STGC3基因3种突变型CNE2细胞系。实验设6组,即空白对照组(Negative control)、空载体组(Vector)、野生型组(His-STGC3)和3个STGC3基因突变型组(His-STGC3-C656G、His-STGC3-C725T、His-STGC3-T913G)。运用RT-PCR、免疫印迹及免疫细胞化学,观察重组质粒突变型STGC3基因是否正常表达。结果:突变质粒经酶切和测序鉴定,酶切结果显示目的片段大小一致,测序结果显示突变序列正确,成功构建带His标签的3个突变型(His-STGC3-C656G、His-STGC3-C725T、His-STGC3-T913G)重组真核表达质粒。RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学结果显示,突变质粒均正常表达His-tag-STGC3基因及融合蛋白质,融合蛋白定位于细胞质和细胞核。结论:成功构建STGC3基因单碱基位点突变质粒,并在CNE2细胞中表达STGC3融合蛋白。

GRP78基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定

目的构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因短发夹RNA表达载体并鉴定,为探讨GRP78对胃癌发生发展作用及机制提供前期基础。方法运用核糖核酸(RNA)干扰技术构建靶向干扰GRP78蛋白短发夹RNA(GRP78-shRNA)载体,载体经转化、抽提及测序,用脂质体将GRP78-shRNA载体瞬时转染至SGC-7901胃癌细胞中,应用荧光显微镜、反转录定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)观察GRP78表达情况。结果GRP78-shRNA载体测序显示序列正确;转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞可见绿色荧光;qRT-PCR和Western blot结果显示,转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞中GRP78基因和蛋白表达降低。结论成功构建并鉴定GRP78基因短发夹RNA表达载体。

NMN激活SIRT2介导的糖酵解通路改善PCOS大鼠卵泡发育的作用机制研究

明确NMN激活SIRT2介导的糖酵解通路改善PCOS大鼠卵泡发育的作用及机制。来曲唑联合高脂饲料构建PCOS大鼠模型,观察血清生殖激素等变化,分析NMN对PCOS大鼠卵泡发育的影响;能量代谢组学结合转录组测序,分析差异糖酵解代谢产物及限速酶基因;免疫组织化学及质白质印迹检测限速酶基因表达,并检测卵巢蛋白质乙酰化水平和SIRT2表达。KGN细胞中添加睾酮、NMN及SIRT2特异性抑制剂AGK2,分析糖酵解速率变化。

白藜芦醇通过糖酵解途径改善PCOS大鼠的卵巢功能

多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡发育障碍是导致育龄期女性不孕不育的重要原因之一。白藜芦醇是从植物中提取的多酚化合物,在体内具有抗氧化、抗炎等多项功能,对卵巢的功能也具有重要的保护作用,但机制仍不明确。本研究将SD大鼠分为对照组、模型组和治疗组,模型组用来曲唑灌胃联合高脂饲养构建PCOS大鼠模型,治疗组在造模成功后用白藜芦醇灌胃治疗。记录各组大鼠动情周期的变化;卵巢切片HE染色观察卵巢的形态结构及卵泡数量;TUNEL法检测颗粒细胞的凋亡,免疫组织化学及荧光定量PCR检测PCNA、凋亡基因、糖酵解限速酶及SIRT1的表达;经靶向代谢组学检测能量代谢的产物,ELISA等试剂盒检测糖酵解限速酶及代谢产物的水平。结果显示,与对照组比较,模型组的动情周期紊乱,卵巢内囊性卵泡数量增加,卵巢的形态结构紊乱,其颗粒细胞凋亡增加,PCNA表达下调,ATP含量下降,AMP/ATP比值增高,LDH-A、PKM2及糖酵解限速酶、SIRT1等的表达均下调。白藜芦醇治疗可使动情周期逐渐恢复,各级卵泡及颗粒细胞的数量增加,ATP的水平上升,AMP/ATP比值降低,糖酵解限速酶及SIRT1的表达较模型组上调。以上结果表明白藜芦醇可促进PCOS大鼠颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,改善卵泡发育状态;还可改善卵巢能量代谢状态,一定程度上逆转糖酵解紊乱,其作用可能与SIRT1有关。

高校学生实验室安全自我防护“知-信-行”现状研究

为了解高校学生在实验室工作学习中的安全自我防护知信行的现状及影响因素,该论文通过便利抽样方法,对湖南省高校259名学生进行问卷调查。高校学生的安全自我防护知识、学习态度及采取行为得分分别为(16.80±3.24)、(61.60±9.87)、(51.04±8.53)分。单因素分析结果显示,高校学生自我安全防护知识、态度及行为受多因素影响(医院实习经验、专业;性别、年龄、专业、医院实习经验;年龄、专业、每学期实验频率、是否独立担任实验负责人、医院实习经验)(P<0.05)。多元线性分析结果表明,高校学生自我安全防护态度及行为也受多因素影响(性别、年龄;年龄、专业、医院实习经验)(P<0.05)。实践证明,高校学生在实验室的自我安全防护态度较积极,采取的自我安全防护行为不如人意,知识储备亟待提高。高校应更重视实验室管理安全相关知识的培训,提高高校学生对实验室自我安全防护的认知,促进高校学生采取完善的自我防护行为,保证高校学生实验室安全。

鼻咽癌STGC3基因转录调控元件分析与鉴定

目的:分析并鉴定STGC3基因转录调控元件,探讨鼻咽癌STGC3基因的转录调控分子机制。方法:运用生物信息学,预测并分析STGC3基因核心启动子区的转录因子结合位点;将相关转录因子结合位点,制备3种探针即生物素标记野生型、突变型及未标记野生型;提取CNE2细胞核蛋白,利用电泳迁移率变动分析(EMSA)及染色质免疫共沉淀(ChIP)分析,体内外鉴定转录因子结合位点。结果:在STGC3基因核心启动子区存在21个转录因子结合位点,其中9个为Sp1转录因子结合位点;进一步严格限定参数,STGC3基因核心启动子区域含有转录因子结合位点5个,其中Sp1转录因子结合位点2个;EMSA和ChIP实验结果显示,STGC3基因中存在转录因子Sp1特异性结合位点,从而鉴定出STGC3基因转录调控元件。结论:STGC3基因核心启动子区含有Sp1特异性结合位点,为该基因的转录调控元件。

罗汉果甜苷调控糖酵解通路改善PCOS模型大鼠的卵泡发育和排卵

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的妇科内分泌疾病之一,目前无统一的治疗方案。罗汉果甜苷是从罗汉果中提取的三萜苷化合物,研究报道具有改善卵母细胞质量的作用。然而,罗汉果甜苷能否改善由PCOS引起的女性生殖功能障碍,其潜在机制尚不清楚。本研究采用来曲唑和高脂饲料喂养构建PCOS大鼠模型,模型组构建成功后用罗汉果甜苷灌胃干预后,进行动情周期、性激素、卵巢形态学和卵巢代谢组学和转录组学测序(RNA-seq)分析。结果表明,罗汉果甜苷能有效改善PCOS大鼠雌性生殖功能障碍。

白藜芦醇保护配子发生的作用及机制研究进展

白藜芦醇是一种天然的非黄酮类多酚化合物,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、保护心血管等多种药理学作用,对机体的多种疾病都具有积极的治疗作用。本研究着重总结了白藜芦醇在物理化学因素、代谢异常等不良因素下对卵泡发生、卵母细胞和胚胎发育以及精子发生过程中所发挥的保护作用。同时通过综述白藜芦醇调控下丘脑-垂体-性腺轴、氧化应激、PI3K/Akt等信号通路及表观遗传学修饰等方面的相关机制,为白藜芦醇应用于改善临床因卵泡发育和精子发生障碍诱发不孕不育提供理论参考。