新城疫病毒弱毒株对鹅的免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)疫苗株La Sota和NDV基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ为免疫原,分别以活苗和灭活苗的形式免疫2周龄试验鹅,免疫后第7、14天和21天采血分离血清用于抗体效价测定。免疫后3周以基因Ⅶ型强毒分离株JS2-06进行攻毒,攻毒后每天观察各组鹅的发病情况,并于第2、4天和7天分别采集喉气管和泄殖腔棉拭样品,用于病毒的分离。试验结果表明,活疫苗免疫后不能产生有效的免疫应答,而灭活苗免疫鹅对强毒的感染具有较强的抵抗能力,但基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ能更有效抑制鹅体的排毒,其免疫效力明显高于疫苗株La Sota。

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)LaSota株与禽流感病毒(AIV)F株尿囊腔接种非免疫鸡胚。取72～120小时死亡鸡胚液,灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感(H9亚型)油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗。免疫7日龄非免疫雏鸡,一周后开始检测ND、AI血凝抑制(HI)抗体,两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上,3周达到高峰,后维持在较高水平达45天以上。在65日龄进行攻毒,结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。

活禽市场中4株鹅源新城疫病毒的分离与鉴定

过去，一般认为水禽对新城疫病毒（Newcasfie disease virus，NDV）有较强的抵抗力，感染后不容易发病和造成流行或暴发。然而，自上世纪90年代后期以来，我国大面积出现了鹅群感染NDV并严重发病、死亡的事件，给养禽业造成了严重的威胁和损失，引起了众多研究者和从业者的高度关注。

H9N2亚型禽流感病毒华东分离株的生物学特性及遗传进化分析

对从华东地区分离的6株鸡源H9N2亚型禽流感病毒进行了生物学特性及血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的分子遗传进化分析。发现这6株病毒对SPF鸡无致病性,IVPI均为0,可被单克隆抗体4E7分为2个亚群。序列分析表明,这6株病毒的HA基因裂解位点处的氨基酸序列均为RSSR↓GLF,Ck/HD/16/07和Ck/HD/112/05的潜在糖基化位点与其他4株不一致;NA基因为N2亚型,其中4个毒株的茎部缺失3个氨基酸,而另2个毒株无缺失。

一例小鹅瘟的诊治

1发病情况 2010年4月，江苏海安某养殖户饲养的1650只雏鹅，5Et龄开始发病并出现零星死亡，截至10日龄共死亡雏鹅611只，未使用任何疫苗进行防疫。送检部分病死鹅至扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室进行实验室确诊。

高邮某鸡场2005～2008年新城疫、禽流感抗体与带毒状况跟踪监测

新城疫（ND）和禽流感（AI）是严重危害养禽业的重要病毒性疫病，在给养禽业造成巨大经济损失的同时，在公共卫生上有其重要性。目前，在我国主要通过广泛疫苗的免疫接种来控制ND与AI的发生与流行。但是，在临床上由于疫苗使用不当或滥用疫苗，造成免疫失败的现象屡有发生。因此，制定合理的免疫程序对预防上述疫病的暴发具有重要作用。

新城疫病毒LaSota株在鸡胚中的繁殖动态

用新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ株尿囊腔接种１０日龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６，１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。

微量红细胞凝集抑制试验常见问题探析

微量红细胞凝集抑制（HI）试验作为一项抗体监测技术已在各大中型禽场和兽医门诊实验室工作中广泛应用。HI试验可检测新城疫、禽流感、减蛋下降综合征等HI抗体，依据抗体的监测结果，制定相关疫苗的最佳免疫程序，验证疫苗的免疫效果，进行疫病的辅助诊断，达到及早预报疫情的目的。但是如果试验操作技术不规范就会造成监测结果不准确。现就HI试验过程中出现的常见问题进行探析。

新城疫病毒Lastota株在鸡胚中的繁殖动态研究

用新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株尿囊腔接种１０月龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。

反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标,评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明:反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。

基于M基因的新城疫病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对临床样品中新城疫病毒检测的研究

根据新城疫病毒M基因的保守序列，设计合成1对引物和TaqMan探针，以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线，结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在106~101拷贝范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中3拷贝.μL-1的病毒核酸，与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性，二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数？阴性数符合率分别为90.0%、99.8%。经临床应用表明：荧光定量PCR的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础。

1株鹦鹉源多杀性巴氏杆菌的鉴定

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）属于革兰阴性球杆菌,定居于家禽和野禽的鼻咽部,能引起宿主出血性败血症,发病率和死亡率都很高,但不同类型的家禽易感性不同。多杀性巴氏杆菌有5个荚膜血清型,分别为A、B、D、E和F,引起禽类动物的多杀性巴氏杆菌荚膜血清型多为A型[1]。此外,有较多技术对多杀性巴氏杆菌进行分型,

ClassⅠ新城疫病毒NP基因分子特征的研究

为分析2002～2007年Class Ⅰ新城疫病毒分离株NP基因的分子特征,以及其在新城疫病毒演化过程中所起的作用,采用RT-PCR方法扩增分离株的核衣壳蛋白(NP)基因,并进行了测序,应用生物信息学软件分析NDVNP基因的分子特征。根据NP基因序列的遗传发生分析表明,ClassⅠ NDV2型毒株与DE/R49-99和美国株亲缘关系较近,而3型毒株与其他ClassⅠ毒株遗传关系较远,具有地区特色,形成一个独立的分支。生物信息学软件分析表明,NP蛋白N端1～400氨基酸比较保守,而C端序列(特别是氨基酸残基400～480)高度变异。ClassⅠ病毒2型毒株与国外分离株亲缘关系较近,可能有共同的起源;而3型毒株独立于其他ClassⅠ毒株,具有独特性,这两种毒株的来源不同;不同基因型NP蛋白之间比较保守,但是P蛋白的C端发生了多个氨基酸的变异,对其功能的影响还需进一步探讨。

关于兽医传染病学中重要人兽共患病实验教学改革的思考与实践

对于一些重要人兽共患传染病,因其可能存在的公共卫生安全隐患,在以往《兽医传染病学》实验教学的开设上通常受到限制,影响了教学效果。从强化生物安全措施、优化实验教学方法、开放科研实验室等多个角度入手,对传统的实验教学方式进行改革,以改善兽医传染病学中重要人兽共患病的教学质量,培养具有实践创新能力的高素质兽医人才。

应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究

应用新城疫单抗酶联诊断试剂盒对３群发生疑似新城疫的鸡群进行了快速诊断。采用肛门泄殖腔棉拭取样方法取样，分别取６０、３５和３８份样品，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检测出新城疫强毒抗原阳性分别为５、３和２份样品，诊断该３群发生非典型鸡新城疫。用病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法验证表明，新城疫单抗酶联试剂盒诊断非典型新城疫简便、快速。

马立克氏病疫苗免疫鸡群强毒攻击后羽囊排毒情况

分别以血清型Ⅱ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）疫苗株（Ｚ４、ＳＢ１）、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗株（ＦＣ１２６）及二价疫苗（Ｚ４＋ＦＣ１２６、ＳＢ１＋ＦＣ１２６）免疫鸡群，用琼脂扩散试验（ＡＧＰＴ）检查各鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原。结果，二价苗能使试验鸡羽毛囊强毒排出高峰推迟，排毒率显著下降。

1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

1株小熊猫口腔巴氏杆菌的分离与鉴定

巴氏杆菌是一类革兰阴性小杆菌,主要寄生于野生动物和家养动物的黏膜.目前已知巴氏杆菌属有10多种,主要有多杀性巴氏杆菌、犬巴氏杆菌、禽巴氏杆菌等.口腔巴氏杆菌（Pasteurella oralis）是一个新的种类,目前已在犬、猫和白鼬、非洲刺猬的口腔内发现此菌,能通过犬、猫咬伤引起人类感染[1],我们从1只病死小熊猫的肺部分离1株口腔巴氏杆菌.

LaSota毒株胰蛋白酶作用试验

在３７℃条件下，用０．１％和１％胰蛋白酶分别消化新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ毒株１２和２４ｈ后，接种１５日龄ＮＤＶ非免疫雏鸡，接种１５ｄ内雏鸡健活，采取血清测定血凝抑制（ＨＩ）抗体效价与对照组无显著差异；用０．１％和１％胰蛋白酶分别作用ＬａＳｏｔａ毒株２、４、１２和２４ｈ后，接种１０日龄ＮＤＶ非免疫鸡胚，鸡胚平均致死时间及尿囊液中病毒血凝（ＨＡ）效价与对照差异不显著；ＬａＳｏｔａ、Ｃｌｏｎｅ－３０和Ｖ４毒株在鸡胚成纤维细胞单层上形成病变需胰蛋白酶协助，而Ｆ８Ｅ４８毒株无需胰蛋白酶协助就能形成细胞病变．本研究表明：ＮＤＶ弱毒经胰蛋白酶消化后在鸡体内、鸡胚中毒力和增殖力未发生变化。