热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响

目的:观察重酒石酸去甲肾上腺素诱导后热休克蛋白70在体外心脏中的表达,并探讨热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响。方法:实验于2003-03/09在华中科技大学同济医学院药理实验室进行。取成年雄性Wistar大鼠12只,随机分为2组,每组6只:①生理盐水组:腹腔注射生理盐水0.4mL,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。②重酒石酸去甲肾上腺素组:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素3.1μmol/kg(0.53mg/kg),24h后取体外心脏,方法同生理盐水组。采用Westernblot法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量及生化指标。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①热休克蛋白70含量(吸光度):重酒石酸去甲肾上腺素组明显高于生理盐水组(t=10.16,P<0.01)。②生化指标:重酒石酸去甲肾上腺素组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力优于生理盐水组犤(13.67±2.60),(5.36±0.89)μmol/g;(2.44±0.14),(4.64±0.29)μkat/g;(6.77±0.90),(2.54±0.28)μkat/g;(124.22±13.58),(61.25±5.84)mmol/g;P均<0.01犦,丙二醛含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于生理盐水组(P<0.01)。结论:重酒石酸去甲肾上腺素诱导的热休克蛋白70的高表达对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护效应,可以减轻细胞内和线粒体内Ca2+超载而发挥其细胞保护效应,减轻再灌注损伤。

心肺移植术中对心肺保护的体会

目的总结室间隔缺损合并艾森门格综合征(Eisenmengersyndrome)患者施行心肺移植术的经验。方法2003年6月25日为1例先天性室间隔缺损合并艾森门格综合征患者施行心肺移植术,采用改良St.Thomas号液保护心肌和Euro-Collins液保护肺。结果术中供者心肺保护良好,术后受者血流动力学稳定,呼吸功能恢复较快,现已生存500d,生活质量良好。结论术中良好的心肺保护、术后防治并发症是提高心肺移植生存率的重要因素。

主动脉夹层动脉瘤的外科治疗

目的 :总结 1992年 6月至 2 0 0 2年 6月对 2 5例主动脉夹层动脉瘤病人的外科治疗经验。方法 :采用Cabrol手术 10例 ,Bentall手术 7例 ,升主动脉与腹主动脉搭桥转流手术 6例 ,升主动脉与双髂总动脉搭桥转流结合动脉内膜开窗手术 1例 ,升主动脉夹层缝闭加主动脉瓣成形术 1例。结果 :2 4例生存 ,1例Bentall手术左冠状动脉吻合口出血而死亡。结论 :主动脉夹层病人 ,手术中当冠状动脉开口直接缝合于人工血管有困难时 ,采用Cabrol手术 ,使吻合口无张力而且对合严密 ,避免了冠状动脉开口周围内膜撕脱和吻合口漏血。对于DeBakeyⅢ型的病人 ,采用升主动脉与腹主动脉或双髂总动脉搭桥转流术结合动脉内膜开窗术 ,治疗效果满意。对于手术中无法止血的主动脉漏血和左心室漏血 ,采用瘤袋或自体心包包裹漏血区 ,然后与右心房进行搭桥吻合 ,将漏血引入右心房而达到止血目的。

白介素10在心脏移植排斥反应中表达的实验研究

研究白介素 10 (IL- 10 )在大白鼠心脏移植排斥反应中心脏局部的表达变化情况 ,并探讨其参与排斥反应的可能机制。分五组 :A组 (对照组 )、 B组 (供体特异性全血输注组 )、 C组 (Anti- IL- 2 Mab组 )、 D组 (Anti- IL- 4Mab组 )、E组 (Anti- IL- 2 Mab+Cs A组 )处理受体 ,将大鼠移植心移植到受体的颈部 ,观察移植心存活时间、动态病理变化。并于移植术后第 1d、第 3d、第 5 d、第 7d、第 9d、第 11d、第 14d分别取移植心置于液氮中待测。应用半定量的 RT- PCR法动态检测移植心 IL- 10的表达情况。结果表明 :各组移植心存活时间分别为 (8.3± 1.7) d、 (2 9.2±7.1) d、 (2 6 .4± 5 .7) d、 (10 .2± 1.9) d、 (5 5 .0± 10 .6 ) d。其中 B组、 C组对 A组差异有显著意义 ,E组对 A组及 C组分别有极显著意义和显著意义。 IL- 10在 B组、 C组及 E组均有较强的表达 ,在 A组及 D组表达微弱 ,并与移植物的存活时间密切相关。结果提示 :IL- 10参与调节移植排斥反应 ,其表达水平与移植物存活时间正相关 ,机制可能为 Th类细胞因子的免疫偏离。应用 TH1类细胞因子单克隆抗体并联用免疫抑制剂可以有效的抑制移植排斥反应 。

基质金属蛋白酶-2对鼠心肌缺血再灌注间质损伤的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在鼠缺血再灌注心肌的表达,及其与心肌间质损伤和心功能变化的关系。方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,随机分为对照组、缺血再灌注组和强力霉素组,每组8只。分别建立改良的Langendorrf离体心灌注模型,测定左室收缩峰压及压力微分,氯胺T法测定胶原含量,免疫组化法测定Ⅰ/Ⅲ胶原比例,酶谱法测定冠脉回流液不同时间点的MMP-2及其酶原(pro-MMP-2)。Westernblot检测心肌MMP-2的表达。结果:MMP-2活性在心肌缺血再灌注早期即明显升高,且其活性与心功能的恢复呈明显的相关性。心肌胶原含量和Ⅰ/Ⅲ比值较对照组均明显下降。强力霉素组表现出明显的保护作用。结论:MMP-2在心肌缺血再灌注间质损伤中起关键作用,应用MMP-2抑制剂可能成为保护心肌缺血再灌注损伤的新方法。

VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达

目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。

婴儿完全性肺静脉异位连接外科治疗

目的总结23例婴儿完全性肺静脉异位连接(totalanomalous pulmonary venous connection,TAPVC)的外科治疗经验。方法全组均在中度低温体外循环下进行手术,其中急诊手术6例。患儿平均年龄(5.7±3.6)个月,平均体重(5.8±1.5)kg。心上型11例采用双房径路矫治并结扎垂直静脉,用可吸收缝线吻合肺静脉共干与左心房后壁切口;心内型12例,仔细辨认合并三房心畸形,避免损伤传导系统。均采用心包补片修补扩大的房间隔缺损。结果手术早期死亡2例(死亡率8.7%)。18例随访2个月～3年,患儿心功能明显改善,生长发育正常。结论TAPVC可由超声心动图确诊,应尽早手术矫治。对于新生儿或婴儿期反复出现肺炎、低氧血症、心衰等患儿,在临床症状相对改善的情况下应急诊手术;同时加强体外循环和监护室的密切协作,完善术后处理方法。

复杂先天性心脏病心脏移植杂交手术1例

1临床资料患者男,25岁。因＂复杂先天性心脏病（先心病）双向Glenn术后8年,乏力并下肢水肿6年,加重1年＂入住华中科技大学同济医学院附属协和医院。患者8年前外院诊断为先心病,右心室双出口（室间隔缺损远离两大动脉）,右心室流出道狭窄,行双向Glenn手术治疗,术后患者口唇发绀及体力均有所好转。6年前开始出现乏力、双下肢水肿,

10例单向与双向Glenn手术的评价

报道 10例单向与双向 Glenn手术。其中 7例单向 Glenn手术 ,上腔静脉与右肺动脉进行侧侧吻合 ,结扎右肺动脉近心端 ,环缩上腔静脉近心端。 3例双向 Glenn手术 ,上腔静脉与右肺动脉进行端侧吻合 ,上腔静脉近心端予以缝闭。手术结果 ,单向 Glenn手术患者 ,术后动脉血氧饱和度由术前的 5 0 %～ 6 0 %提高至术后的 70 %～ 80 %。双向 Glenn手术患者 ,术后动脉血氧饱和度由术前的 5 0 %～ 6 0 %提高至 85 %～ 90 % ,术后缺氧状态基本消失。手术结果表明 :双向 Glenn手术 ,上腔静脉的血流均匀地灌注左、右两侧肺 ,来自右心室的搏动性血流 ,促进了肺循环的血流灌注 ,因而双向 Glenn手术的患者 ,术后缺氧状态的改善远比单向

浅低温体外循环心脏不停跳心内直视手术的探讨

采用浅低温体外循环心脏不停跳进行心内直视手术16例,其中二尖瓣替换手术7例,二尖瓣替换加室缺修补1例,室缺修补1例,室缺术后残余漏修补1例,房缺修补2例,窦瘤破裂破入右房手术修补4例,16例病人手术满意,均顺利康复,痊愈出院。并就体外循环中的技术措施和注意事项进行了讨论。

白介素4单克隆抗体对心脏移植排斥反应中细胞因子表达的影响

为观察白介素 4单克隆抗体 (IL- 4Mab)对同种大鼠心脏移植物存活时间及局部细胞因子网络的影响 ,将实验对象分对照和实验组 ,分别静脉给予生理盐水及抗白介素 4单克隆抗体 (OX81) ,采用改良的移植术式建立移植模型 ,常规监测排斥反应发生情况。应用 RT- PCR的方法检测移植物局部细胞因子如 IL- 1β、IL- 2、CD2 5、IL- 4、IL- 5、IL- 6、IL-10、TNF- α、IFN- γ的表达水平。结果表明 :IL- 4Mab组移植心存活时间没有显著性变化 ,IL- 1β、IL- 2、IL- 5、CD2 5、TNF-α、IFN- γ的表达较强 ,而 IL- 4、IL- 6、IL- 10的表达较弱。提示单纯应用抗 IL- 4单克隆抗体可能调节 TH1/ TH2类 CK的表达 ,但对于移植物的存活时间却少有影响 ,其可能的机制为 :1CK网络中存在其它的独立于 IL- 4的 TH2类 CK;2TH亚群中存在除 TH1及 TH2亚群以外的亚群 THX;3IL-

强力霉素对心肌间质缺血再灌注损伤影响的研究

目的 :探讨不同浓度的强力霉素对离体鼠心缺血再灌注心肌间质损伤的影响。方法 :Sprague Dawley(SD)大鼠 40只 ,随机分为对照组、缺血再灌注组和强力霉素 1、2、3组 ,每组 8只。分别建立改良的Langendorrf离体心灌注模型 ,测定左室收缩峰压及其压力微分 ,氯胺T法测定心肌胶原含量 ,免疫组化法测定Ⅰ /Ⅲ胶原比例 ,酶谱法检测心肌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )的表达 ,电镜观察心肌超微结构。结果 :强力霉素对离体心缺血再灌注后心肌间质损伤 ,以及心功能有明显的保护作用 ,且与浓度有关。其保护作用与抑制MMP 2的表达有关。结论 :强力霉素对离体鼠心缺血再灌注后心肌间质损伤有与浓度相关的保护作用。

猪主动脉夹层模型的建立

目的在非体外循环下建立猪急性StanfordB型主动脉夹层模型,为临床探讨主动脉夹层治疗方法提供实验手段。方法将10头小猪分为两组,均在非体外循环下进行。组(n=4)通过主动脉侧壁钳钳夹部分降主动脉,切开主动脉侧壁,分离主动脉中、内1/3管壁,通过升高血压冲击主动脉壁,建立急性StanfordB型主动脉夹层模型;组(n=6)先建立猪左颈动脉-左股动脉转流,完全阻断降主动脉,其余步骤同组。结果组未形成夹层及假腔,组除1头猪因术中气管插管脱出而窒息死亡,其余5头主动脉夹层均形成,剪开主动脉壁,见夹层及假腔向远端扩展达膈肌水平,长度约14～18cm,光学显微镜下观察,见夹层在主动脉中层产生。结论通过预置左颈动脉-左股动脉转流,完全阻断降主动脉,机械分离主动脉壁,利用升高血压冲击主动脉壁,造成夹层分离,可以成功建立猪急性StanfordB型主动脉夹层模型。

1,6-二磷酸果糖冷心停搏液抗心肌缺血复灌损伤作用的实验研究

采用离体心脏工作模型，观察了1，6-二磷酸果糖冷心停搏液（FDP）抗心肌缺血复灌损伤的效果。结果表明，氧合或非氧合FDP都具有减轻90min缺血心肌复灌损伤的作用，效果相同。与对照组（St.ThomasⅡ号液）相比，FDP组复灌后心功能恢复较佳，心肌水肿轻，磷酸肌酸激酶释放少，过氧歧化酶活性也仅轻度升高。作者还对FDP抗心肌缺血复灌损伤的机理进行了初步探讨。

升主动脉夹层动脉瘤的外科治疗(卡布罗手术2例报告)

我科于1993年3月、1994年10月,采用卡布罗(Gabrol)手术治愈2例升主动脉夹层动脉瘤,现报告如下.

不同缺血预处理对未成熟心肌细胞功能的影响

目的比较不同方法的缺血预处理对未成熟心肌细胞功能的影响。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型。分为4组:缺血/再灌注(I/R)组,离体心脏灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;心脏缺血预处理(MIP)组:离体心脏灌注15min转为工作心15min后反复2次缺血5min/再灌注5min,然后重复I/R组缺血/再灌注方法;肾缺血预处理(RIP)组:反复三次阻断左肾动脉5min,放开5min,切取心脏,重复I/R组方法;双下肢缺血预处理(DLIP)组:反复3次捆扎双下肢5min,松开5min,切取心脏,重复I/R组方法。以血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、心肌组织三磷腺苷(ATP)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性及其Ca2+含量、心肌线粒体合成三磷腺苷能力[ATP]m作为观察指标。结果MIP、RIP及DLIP组ATP含量、SOD活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均高于I/R组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量均低于I/R组(P<0.01)。结论肾缺血预处理、双下肢缺血预处理与心脏缺血预处理有同等的心肌细胞保护作用。

完全性肺静脉异位连接外科治疗的经验与体会(附11例报告)

目的 报道 11例完全性肺静脉异位连接的外科治疗。方法 心上型 7例 ,其中 6例经右房行左房后壁与肺静脉共同干吻合 ,1例于心外行左房后壁与共同干平行吻合。心内型 4例 ,采用扩大房间隔缺损将异位的肺静脉开口矫正入左心房 ,其中肺静脉开口于冠状静脉窦者 ,采用补片沿隔瓣根部环绕至冠状静脉窦后下方将冠状静脉窦开口于左心房。异位静脉开口于上腔静脉入口处者 ,切开上腔静脉外后侧壁 ,并用自体心包扩大上腔静脉的入口。结果 11例患者全部存活 ,顺利康复。结论 最大限度地扩大左房与共同干的吻合口 ,远离共同干结扎垂直静脉 ,扩大左心房容积 ,加宽上腔静脉的入口 。

艾森曼格复合征前期病人的手术治疗

报告1986年9月～1990年6月期间9例艾森曼格复合征前期病人的手术治疗。9例肺血管阻力均高于100.0kPa·s／L，平均为138.95kPa·s/L，手术存活8例。术后6例病人接受2～5年的长期随访，显示治疗效果满意，心功能均达到1级。文中就围手术期的处理，手术时机，手术的适应证及禁忌证，手术的预后与估价进行了讨论。

热休克蛋白70对缺血再灌注未成熟心肌间质的保护作用

目的观察热休克蛋白70在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌间质的影响。方法①实验于2001-12/2002-06在华中科技大学同济医学院药理实验室完成。选用出生14～21d的健康新生长耳大白兔12只。随机将兔分为2组对照组和实验组,每组6只。②对照组腹腔注射生理盐水0.4m L,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15m in转为工作心15m in后停灌45m in,恢复灌注15m in改为工作心30m in;实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取体外心脏,方法同对照组。③采用蛋白印迹法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量。按公式计算羟脯氨酸含量(样本A值/标准A值×10×稀释倍数×1/组织质量)。采用均相放射免疫竞争法直接测定血浆内皮素1水平。④计量资料差异比较采用t检验。结果兔12只均进入结果分析。①实验组心肌细胞中热休克蛋白70含量(A值)明显高于对照组(P<0.01)。②实验组兔心肌羟脯氨酸含量明显高于对照组(P<0.01),血清内皮素1水平明显低于对照组(P<0.01)。结论腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素诱导未成熟大白兔心脏热休克蛋白70表达,在注射24h后热休克蛋白70表达明显增多,热休克蛋白70可明显减轻未成熟心肌内皮素的释放和心肌胶原的降解。

体外与非体外循环下冠脉旁路术中肺组织黏附分子-1 mRNA的表达及其意义

目的观察体外循环下冠状动脉旁路移植术(CABG)及非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCAB)术中肺组织细胞间黏附分子1mRNA(ICAM1 mRNA)的表达及细胞定位。方法将冠状动脉粥样硬化性心脏病患者24例随机分为OPCAB组(8例)、CABG组(8例)和CABG+N乙酰半胱氨酸(NAC)组(8例)。所有肺组织标本均采用右上肺边缘组织制作,采用免疫组化、原位杂交、计算机图像分析、病理学观察方法,探讨术中肺组织ICAM1 mRNA的表达、分布以及组织细胞超微结构变化。结果OPCAB组,ICAM1 mRNA在所取组织中仅少量表达。CABG组,肺组织ICAM1 mRNA表达强度明显增强,阳性细胞主要定位于支气管内皮细胞、肺间质细胞、血管内皮细胞及血管壁组织细胞。CABG+N乙酰半胱氨酸组ICAM1 mRNA表达明显受抑。结论非体外循环下CABG能明显减少ICAM1 mRNA表达。体外循环下肺内ICAM1 mRNA的表达增加是CPB后CABG术后肺损伤发病的分子基础之一。