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Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析
1
作者
刘振忞
孔晓燕
+3 位作者
沈炼桔
龙春兰
刘星
魏光辉
《海军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期152-159,共8页
目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PC...
目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb^(+/-))小鼠;Mafb^(+/-)小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb^(-/-))胎鼠。收集雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果成功构建、繁育Mafb^(+/-)小鼠并得到雄性Mafb^(-/-)胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠为尿道下裂表型。结论成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。
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关键词
v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B
基因敲除
基因型鉴定
尿道下裂
动物模型
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题名
Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析
1
作者
刘振忞
孔晓燕
沈炼桔
龙春兰
刘星
魏光辉
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿童泌尿生殖发育与组织工程重庆市重点实验室
重庆医科大学附属儿童医院儿科学重庆市重点实验室
重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究教育部重点实验室
重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科
重庆医科大学附属儿童医院儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地
重庆医科大学附属儿童医院国家儿童健康与疾病临床医学研究中心
出处
《海军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期152-159,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(81970571)。
文摘
目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb^(+/-))小鼠;Mafb^(+/-)小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb^(-/-))胎鼠。收集雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果成功构建、繁育Mafb^(+/-)小鼠并得到雄性Mafb^(-/-)胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠为尿道下裂表型。结论成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。
关键词
v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B
基因敲除
基因型鉴定
尿道下裂
动物模型
Keywords
v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B
gene knockout
genotype identification
hypospadias
animal models
分类号
R695 [医药卫生—泌尿科学]
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题名
作者
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1
Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析
刘振忞
孔晓燕
沈炼桔
龙春兰
刘星
魏光辉
《海军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
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