目的基于网络药理学初步预测大黄素治疗乳腺癌合并高脂血症的作用靶点及信号通路,通过分子对接和体外实验验证探讨其可能的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库及分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Datab...目的基于网络药理学初步预测大黄素治疗乳腺癌合并高脂血症的作用靶点及信号通路,通过分子对接和体外实验验证探讨其可能的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库及分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、Swiss Target Prediction数据库查询大黄素的作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库获取乳腺癌、高脂血症的相关靶点;通过在线Veny软件获得大黄素-乳腺癌-高脂血症的共同靶点,并将共同靶点导入STRING数据库构建靶点蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,再利用Cytoscape 3.9.1软件进行可视化处理,筛选核心靶点。通过Metascape在线基因功能注释分析工具进行基因本体(gene ontology,GO)生物学过程和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。选取关键靶点与大黄素通过AutoDock Vina等软件进行分子对接验证。在乳腺癌4T1细胞和肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)中检测大黄素在抑制乳腺癌发展中的作用。以CCK-8法检测大黄素对4T1细胞生长的影响并筛选最佳药物作用浓度,分别采用Real-time PCR及ELISA检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)、白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)及转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)的表达水平。结果共筛选得到43个大黄素-乳腺癌合并高脂血症共同靶点,核心靶点有肿瘤抗原p53(tumor protein p53,TP53)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、髓细胞增生原癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、90 kDa热休克蛋白AA1(heat shock protein 90 kDa alpha1,HSP90AA1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)等。涉及癌症通路、化学致癌作用-受体激活、脂质与动脉粥样硬化、膀胱癌、结肠直肠癌、癌症中的蛋白多糖、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)信号通路等。分子对接提示大黄素与核心靶点能较好地结合。实验结果显示,大黄素可显著下调乳腺癌4T1细胞MMP9和TGF-β1的表达。TAM与脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)共培养可诱导IL-1β表达,大黄素组可明显下调IL-1β的表达。结论大黄素治疗乳腺癌合并高脂血症的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、转移,诱导肿瘤细胞凋亡及调控肿瘤和高脂血症相关炎性微环境有关。展开更多