芎附滴丸质量控制及抗偏头痛药效学研究

目的:建立芎附滴丸(XFDP)的质量标准,并对其进行抗偏头痛的药效学研究。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定XFDP中8种主要成分的含量。评价XFDP对偏头痛大鼠5-羟色胺(5-HT)、β-内啡肽(β-EP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(NOS)含量,及Calca、c-fos mRNA表达的影响。结果:建立的HPLC法线性关系、精密度、重复性、稳定性良好,各成分的平均加样回收率和相应的RSD分别为阿魏酸100.68(2.76%)、洋川芎内酯I 98.71(2.88%)、洋川芎内酯A 101.66(2.17%)、丁基苯酞100.15(2.60%)、Z-藁本内酯99.50(2.88%)、Z-丁烯基苯酞102.47(2.22%)、香附烯酮100.11(2.91%)、α-香附酮100.66(3.03%)。偏头痛造模后大鼠5-HT、β-EP含量显著降低(P<0.01,P<0.01),CGRP、ET-1、MMP-9、核因子κB、NOS含量显著升高(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),Calca、c-fos mRNA的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。XFDP可升高模型大鼠5-HT、β-EP含量,降低CGRP、ET-1、MMP-9、核因子κB、NOS含量,降低Calca、c-fos mRNA的表达,而发挥治疗偏头痛的作用。结论:本方法简单、快速、准确,可用于XFDP的质量控制;XFDP通过调节多种神经递质和血管活性物质的表达发挥治疗偏头痛的作用。

芎附方对利血平致偏头痛模型小鼠的药效学研究

目的:研究芎附方对利血平致偏头痛模型小鼠的主要治疗作用及作用机制。方法:ICR小鼠,雌雄各半,随机分为7组,即空白对照组、假手术组、模型对照组、阳性药组、芎附方高、中、低剂量组。采用皮下注射利血平并大脑皮层埋设自体血凝块的方法制备偏头痛模型。观察药物对小鼠脑组织DA、5-HT、5-HIAA等单胺类神经递质及脑组织、血清中NO、NOS的影响。结果:与空白对照组相比,模型对照组小鼠脑组织DA、5-HIAA、5-HT、NOS,血清NO、NOS差异均有统计学意义,脑组织NO差异无统计学意义。芎附方高、中、低剂量组可显著升高模型小鼠脑组织5-HIAA、血清NO含量,显著降低脑组织和血清NOS含量;芎附方高、中剂量组还可显著升高模型小鼠脑组织5-HT含量。芎附方主要调节偏头痛雄性小鼠的脑组织5-HIAA、NOS和血清NO含量,调节偏头痛雌性小鼠的脑组织5-HIAA、5-HT、NOS、血清NO和血清NOS含量。结论:芎附方可缓解利血平致偏头痛小鼠的症状,其作用机制可能与调节单胺类神经递质和血管活性物质的释放有关。

基于定向进化的雷公藤三萜C-29位羧化酶催化机制研究

雷公藤红素和雷公藤内酯甲是中药雷公藤的主要三萜活性成分,具有抗肿瘤、抗炎及免疫抑制等药理活性,是雷公藤相关中药制剂发挥临床疗效的物质基础。通过解析活性成分生源途径,优化基因元件并利用“细胞工厂”异源获取将是未来“低成本、高效率”获得雷公藤中三萜活性成分的有效途径。CYP712Ks是参与雷公藤木栓烷型和齐墩果烷型三萜骨架修饰的第一个细胞色素P450酶,发挥C-29位羧基化功能,可催化木栓酮生成美登木酸,催化β-香树素生成3-表卡通酸。本研究以四条多功能TwCYP712K1/2/3/5为研究对象,利用酿酒酵母体内功能表征,明确其催化功能及底物选择偏好性;通过同源建模和分子对接,明确蛋白与底物结合空间结构,进而对蛋白活性口袋内差异氨基酸进行互相突变,阐明决定催化功能和底物结构选择的关键氨基酸。本研究共构建了63个突变体元件,解析了影响TwCYP712Ks羧基化功能的氨基酸位点,特别是揭示了影响TwCYP712K2对齐墩果烷型和木栓烷型三萜底物选择性的关键氨基酸,TwCYP712K2F127I与TwCYP712K2A227T突变体将导致产物比例发生逆转。本研究以同源蛋白比对及相互突变的方式对TwCYP712Ks四条蛋白进行半理性设计,阐明多个决定蛋白催化功能的氨基酸位点,获得系列活性提升或改变的突变体,为雷公藤三萜活性成分的生物合成提供丰富的催化元件,并初步解析了C-29位羧基化机制。

化瘀胶囊制备工艺及主要成分含量测定研究

目的:制备化瘀胶囊,建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定其中5种主要成分含量,为化瘀胶囊质量控制提供依据。方法:取药材适量,采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用饱和水溶液法制备挥发油的β-环糊精包合物,将包合物与稠膏、辅料混合制备颗粒,整粒后制备胶囊。对颗粒进行外观、粒度、水分、流动性、溶化性检查;对胶囊进行水分、崩解时限检查。建立HPLC法测定化瘀胶囊中5种主要成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、羟基红花黄色素A和苦杏仁苷的含量,并进行方法学考察。结果:制得的化瘀胶囊,包合物得率为64.9%,挥发油包合率为55.2%,对颗粒和胶囊的各项质量检查均符合国家药典规定。所建立的HPLC分析方法,线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率等均符合要求。测得6份化瘀胶囊样品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、羟基红花黄色素A、苦杏仁苷的平均含量分别为7.56 mg/g、1.63 mg/g、4.84 mg/g、0.61 mg/g、1.13 mg/g。结论:该制备工艺简单可行,所建立的含量测定方法简便,重复性和稳定性好,精密度高,可为化瘀胶囊的质量控制研究提供参考。

芎附滴丸的制备工艺及主要成分的含量测定研究

目的:确立芎附滴丸的制备工艺,并建立一种同时检测芎附滴丸中6种主要成分的含量测定方法,为芎附滴丸的质量控制提供依据。方法:按照芎附提取物与PEG 6000=1 2比例水浴加热熔融,搅拌均匀后倾入滴丸机中,滴丸在二甲基硅油中冷却固化成丸,取出,吸干冷却剂,制得芎附滴丸。对芎附滴丸进行外观形状、重量差异、溶散时限检查。采用Kromasil-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,柱温25℃,测定芎附滴丸中6种主要成分含量。结果:所制芎附滴丸外观形状、重量差异、溶散时限均符合《中华人民共和国药典》要求。建立的HPLC法可同时测定芎附滴丸中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、Z-藁本内酯、香附烯酮和α-香附酮的含量,该方法精密度、重复性、稳定性良好,各成分平均加样回收率和相应的RSD分别为102.11%(2.16%)、99.78%(2.25%)、101.52%(2.06%)、97.93%(2.64%)、100.93%(2.43%)、102.29%(2.72%)。结论:芎附滴丸制备工艺简便可行,所建立的含量测定方法简单、快速、准确,可为芎附滴丸的质量控制提供科学依据。