双歧杆菌微生态制剂的研究和应用现状

双歧杆菌为机体肠道内数量占绝对优势的生理菌，对维持人体健康起着重要作用。文章从双歧杆菌的基础研究、产品开发、保健和药用作用等方面，介绍了双歧杆菌微生态制剂的国内外研究和应用状况。

生化实验改革和实验室建设的体会

生物化学是揭示和研究生命活动本质及其机理的学科，在医学教育中，它占有很重要的地位和作用。而生化实验课则是培养学生基本操作、基本技能亦即实际动手能力的重要方面。因此，改革生化实验教学的内容、方法和技术．既是生化学科发展的必然，也是新时期加强实验室建设，培养合格人才的需要。

兔海水淹溺肺水肿发生机制的实验研究

为探讨海水淹溺肺水肿（PE－SWD）的发生机理，应用丹麦产ABL-Ⅲ型血气-酸碱分析仪，对兔动脉血气和酸碱指标进行自动检测；采用计算机图像分析系统，对肺Na+－K+－ATPase、细胞色素氧化酶（CYTO）和碱性磷酸酶（ALP）进行自动检测和定量分析；采用原位杂交和免疫组化技术，对肺组织C－fosmRNA和Fos蛋白进行定量检测；采用磷脂和Ca2+超微结构定位方法，对肺磷脂和Ca2+的分布进行定位定量观察。结果表明：PE-SWD组动脉氧分压（PaO2）、血氧饱和度（SaO2）、pH值、实际碳酸氢盐（AB）、剩余减（BE）、肺Na+－K+－ATPase和CYTO显著降低。PE－SWD组兔肺上皮组织中ALP、c－fosmRNA和Fos蛋白的表达水平比正常对照组（NC）明显升高（P＜0.01）。PE－SWD组肺泡Ⅱ型上皮细胞磷脂反应产物明显减少，肺毛细血管内皮细胞和肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮细胞Ca2+沉淀颗粒明显增多。作者认为，海水损伤性作用、低氧血症和代谢世酸中毒是PE－SWD发生机制中三种重要因素。肺Na+－K+－ATPase、CYTO活力降低和细胞内钙超载既是上述三大因素造成的直接恶果，又是促进PE－SED不断发生发展的继发性原因。Ca2+－fos传导途径可能也是导致PE－SWD不断恶化的重要环节。

RNA干扰对VEGF在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响

目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响。方法::采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418筛选获得阳性克隆。用Western印迹法、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果:转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;HO-8910细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少。结论:VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖,该研究为应用RNAi进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据。

大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体的构建及内皮抑素基因的表达

目的:构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体,并通过此载体使人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中得到表达。方法:以质粒pDG7、pBCSK(+)、pET-9C为基础,构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体pET-1128,并将人内皮抑素基因插入到新构建的表达载体中,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和长双歧杆菌NQ-1501。诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和WesternBlot鉴定。结果:成功构建了大肠杆菌-双歧杆菌穿梭载体,人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中均可表达。结论:构建的穿梭载体为今后用双歧杆菌作为生理菌载体进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。

理论联系实际 培养学员的科研动手能力

随着现代分子生物学的迅猛发展 ,生物学理论知识的更新也随之加快 ,为了克服在理论教学过程中的枯燥及理解掌握的困难 ,把部分重点难点内容以小型科研课题的形式交给学员 ,让学员在实际动手操作过程中理解和掌握重点难点内容 ,这样既提高了学员的科研动手能力 ,激发了学员学习理论知识的积极性 ,同时也加深了学员对理论知识的理解 。

HJ-1型一氧化氮治疗仪在救治兔海水淹溺肺水肿中的研究

采用合作研制的 HJ- 1型一氧化氮高频喷射通气治疗仪用于兔海水淹溺肺水肿的救治。复制兔海水淹溺肺水肿模型 ,将兔随机分为 3组 :海水淹溺肺水肿对照组、4药组 (海水淹溺肺水肿动物用 4种药物和高频喷射通气治疗仪救治 )、NO组 (在 4药组基础上再用 HJ- 1型一氧化氮高频喷射通气治疗仪救治 ) ,用血气分析仪测定Pa O2 、Sa O2 、p H值 ,发现 NO组血氧分压和血氧饱和度比对照组显著提高 ,动物的存活时间大大延长 ,并阻止了海水淹溺肺水肿向海水型呼吸窘迫综合征的转归 。

口服转内皮抑素基因双歧杆菌制剂对肺癌的疗效

目的 :探讨转人内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂对肺癌的治疗效果。方法 :选择肺癌患者 118例 ,比较服用转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂前后患者症状和体征 ,影像学检查 (X线、CT、MRI) ,细胞学检查 ,纤维支气管镜检查及病理活检、免疫学检查 (CEA)和生活质量等方面的变化。结果 :服用转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂后患者症状和体征及生活质量等较服用前均有好转或明显好转 ,肺癌细胞生长被明显抑制。结论 :转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂对肺癌有较好的治疗效果。

一种新的抗肿瘤血管生成因子——Endostatin

endostatin是一种新发现的高效特异的血管抑制因子,是血管周围胶原蛋白18C末端片段,在生物学活性上,主要表现为抑制内皮细胞增殖。从而抑制在体血管生成及抗动物移植肿瘤。它的发现为抗恶性实体瘤提供了一条很有希望的途径。

转人内皮抑素基因双歧杆菌液抑制血管生长的实验观察

目的 :研究转人内皮抑素基因双歧杆菌液对血管生长的抑制作用 ,并观察其对动物移植性肝癌Heps的抑瘤作用。 方法 :以小鼠移植性肝癌Heps建立肿瘤模型 ;分别进行灌胃和尾静脉注射给药 ,同时用转人内皮抑素基因双歧杆菌液做鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )实验 ,在解剖显微镜下计数血管条数 ,用图像分析仪定量分析血管密度。实验动物处死后 ,称瘤重并计算抑瘤率。结果 :转基因双歧杆菌液高、中、低 3个剂量组的抑瘤率分别为 49.78%、45 .81%和 30 .41%;普通双歧杆菌组抑瘤率为10 .9%,尾静脉注射转基因双歧杆菌组抑瘤率为 5 8.3%;CAM实验显示转基因双歧杆菌液可明显抑制血管的生成。结论 :转基因双歧杆菌有良好的抑制血管生长和抑制肿瘤生长的作用 ,且其作用有量效关系。

人内皮抑素基因的克隆及其表达产物抗肿瘤活性

目的 :克隆人内皮抑素 (endostatin)基因并对其表达产物进行抗肿瘤活性研究。方法 :从人肝cDNA文库中获得人en dostatin基因 ,构建入载体PET15b ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达。将表达产物 (rhEndostatin)纯化后应用于小鼠Lewis肺癌治疗 ,并通过鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)实验 ,观察rhEndostatin的血管抑制作用。结果 :rhEndostatin可抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成 ,明显抑制小鼠Lewis肺癌的生长。结论 :rhEndostatin具有抗肿瘤活性 。

pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化

目的:探索pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化工艺。方法:碱裂解法提取质粒后,用0.4 mol/L CaCl2沉淀除去RNA,再用Q-Sepharose XL进行初纯,SOURCE 15Q精纯。所得纯化物以1％琼脂糖凝胶电泳鉴定超螺旋质粒的含量。结果:经此方法纯化的pcDNA3-内皮抑素质粒中超螺旋质粒的含量可达95％以上,且无RNA检出。结论:该法可以实现pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化。

专升本班《医学遗传学》教学方法初探

专升本教育的开设是贯彻“继续教育有发展”工作思路的具体体现,也同时为各教研室的教学提出了新的要求。由 于专升本班学员与其它班次的学员相比,具有其特殊性,所以只有充分了解他们的具体特点,坚持因材施教,并加上理论与实 际的紧密联系,才能在教学中作到有的放矢,提高教学质量。

猪白细胞介素-2活性测定方法的建立

文章介绍了3H同位素标记测定猪外周血白细胞介素-2活性的方法。此方法标记率高，重复性好，既可作短期（4h～6h）、又可作长时间（15h～24h）的细胞培养检测试验，还可用于收集仪收集制备细胞样品的检测试验。所使用的依赖大鼠因子（RF）的小鼠牌细胞对猪白细胞介素-2敏感，并呈剂量依赖关系。

小发夹RNA特异性抑制Hela细胞中hTERT基因的表达

目的 :双链RNA特异性地干扰相应序列的mRNA的功能 ,是介导转录后基因沉默的重要因素。本研究旨在探讨能靶向作用于人端粒酶催化亚单位 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)mRNA的小发夹双链RNA是否能抑制人宫颈癌细胞 (Hela)中hTERT蛋白的表达。方法 :构建能特异性作用于hTERTmRNA的小发夹RNA质粒表达载体。用免疫荧光法检测转染入Hela细胞的上述质粒对hTERT蛋白表达的影响。结果 :转染特异性小发夹双链RNA质粒表达载体 ( pU 6 TERT和 pH1 TERT)的Hela细胞中其表达hTERT蛋白的阳性细胞数量明显减少 ;而转染非相关性小发夹双链RNA质粒表达载体 pU6 bcl2的Hela细胞并不影响其hTERT蛋白的表达。结论 :该研究构建的靶向作用于hTERT的小发夹双链RNA质粒载体能使Hela细胞中hTERTmRNA的表达水平下调 。

RNA干扰抑制SiHaB2细胞中Bcl-2基因的表达

Bcl-2基因作为细胞凋亡的一个潜在抑制剂调节细胞的死亡,抑制恶性肿瘤细胞中Bcl-2基因的表达可促进肿瘤细胞的凋亡。采用RNA干扰技术,合成了含有21个核苷酸的小双链干扰RNA(siRNA-Bcl-2),并构建了含有19个核苷酸基因的质粒载体(pSilencer2.1-U6-Bcl-2),把合成的siRNA-Bcl-2和pSilencer2.1-U6-Bcl-2分别转导入Bcl-2高表达的细胞株SiHaB2中,通过Western印迹检测,免疫荧光法检测及DNA梯(ladder)检测,可观察到在导入siRNA-Bcl-2和pSilencer2.1-U6-Bcl-2的SiHaB2细胞被培养72h后,可以明显抑制Bcl-2蛋白的表达。

作好《生化检验学》实验教学的体会

检验专业的工作是实验室工作，学员的实验技能决定其将来的工作能力，这需搞好实验教学。现将我校生检实验教学中的点滴体会作一下介绍。

高压氧对实验兔海水型呼吸窘迫综合征的预防作用

目的 观察高压氧（ＨＢＯ）对海水淹溺肺水肿（ＰＥ－ＳＷＤ）的预防作用。方法 复制ＰＥ－ＳＷＤ动物模型后，３２ 只兔随机分为ＰＥ－ＳＷＤ对照组、药物治疗组和ＨＢＯ组。对３ 组兔的动脉血气酸碱指标、Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒、ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ和ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ 等进行自动检测和定量分析比较，并观察分析３组兔的存活时间和海水型呼吸窘迫综合征（ｓｅａｗ ａｔｅｒ－ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍ ｅ，ＳＷ－ＲＤＳ）发生率。结果 ＨＢＯ组兔ＰａＯ２ ，ＳａＯ２ 和ｐＨ ３ 项指标比药物组显著升高（Ｐ＜ ０．０１），动物存活时间［（４３．０３±７．１９）小时］比药物组［（２３．５８±１．４９）小时］明显延长，Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒，ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ，ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ和ＳＷ－ＲＤＳ发生率ＨＢＯ组则明显低于药物组（Ｐ＜ ０．０１）。结论 ＨＢＯ可明显提高ＰａＯ２ 和ＳａＯ２，有效改善低氧血症和代谢性酸中毒，减轻ＰＥ－ＳＷＤ时肺组织的损伤，从而可防止ＰＥ－ＳＷＤ向ＳＷ－ＲＤＳ转化。

高频喷射通气对海水淹溺肺水肿兔球结膜微循环和肺Na^+-K^+-ATP酶的影响

目的 观察高频喷射通气 (HFJV )治疗海水淹溺肺水肿 (PE- SWD)时兔球结膜微循环和肺 Na+ - K+ - ATP酶的变化 ,并探讨其变化机制。方法 向兔肺内灌入海水复制 PE- SWD动物模型。应用微循环显微镜和计算机图像分析系统 ,对不同处理两组兔球结膜微循环和肺毛细血管内皮细胞 Na+ -K+ - ATP酶进行自动检测和定量测量。结果 HFJV组球结膜微循环的面积、灰度和吸光度八项参数比PE- SWD组明显恢复。肺毛细血管内皮细胞 Na+ - K+ - ATP酶活力在 HFJV组中亦较 PE- SWD组明显升高 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。结论 HFJV可改善微循环和增加肺内 Na+ - K+ - ATP酶的活力 ,并与其有效地提高动脉血氧分压和纠正代谢性酸中毒密切相关。