CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究

目的构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究。方法从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV。根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果目的片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle(-ΔGFP)-CRT正确。人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShuttle(-ΔGFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确。酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达。结论成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白。

重组腺病毒Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭

目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用。方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载体,感染MDA-MB-231细胞后,荧光显微镜观察其最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)。分表柔比星、Ad-GFP、Ad-CRT/MAGE-A3、表柔比星+Ad-GFP、表柔比星+Ad-CRT/MAGE-A3共5组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖,Transwell实验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭力。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,其感染MDA-MB-231细胞的最适MOI为100。与其他各组相比,应用Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖[(83.27±1.04)%vs(57.42±1.27)%,(43.26±0.95)%,(61.23±1.47)%,(55.38±1.62)%;P<0.05]和侵袭[(8.41±4.20)vs(14.62±5.33),(107.66±3.35),(100.60±4.42),(104.20±2.60);P<0.05]。结论:腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3能增强表柔比星抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的能力。

新疆高校少数民族大学生马克思主义理论教育实效性调查研究

思想政治理论课程是高校少数民族大学生理解和接受马克思主义的主要途径。为了解高校思想政治理论课的实际效果,笔者通过对新疆部分高校少数民族大学生对马克思主义理论课程的态度进行了调查,分析了当前我国高校少数民族大学生思想政治教育中存在的一些问题,并针对存在问题提出了相应的对策。

增强新疆少数民族大学生思想政治教育实效性的探索

搞好少数民族大学生思想政治教育对新疆高校有着更为紧迫的现实意义,只有在深入把握少数民族大学生的特点的前提下,创新现行的教材和加大教师培训力度以提高教学质量,才能进一步增强思想政治理论教育的实效性。

英语绘本在小学英语教学中的应用

绘本（PictureBook）,顾名思义,就是“画出来的书”,指一类以绘画为主,并附有少量文字的书籍.绘本不仅讲故事,学知识,而且可以全面帮助孩子建构精神,培养多元智能.绘本是发达国家家庭首选的儿童读物,国际公认“绘本是最适合儿童阅读的图书”.那么,绘本是否适合中国儿童呢？从事实来说,人类的所有文明都具有图画叙事的传统,文字起源于图画,中华民族也一样.从理论来说,儿童心理学研究认为,孩子认知图形的能力从很小就开始慢慢养成,虽然那时的孩子不认字,但已经具备了一定的读图能力,如果这时候能有意识地和孩子们一起阅读绘本.

重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究

目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响。方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响。结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Tran-swell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成。结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法。

游戏在小学英语教学中的应用

目前,小学英语教学加在小学生肩头的压力过大,任务过重,使得学生们学习英语的兴趣和积极性受到了极大影响。本文从小学生的心理生理特点入手,论述了游戏在小学英语教学中的可行性,提出了小学英语教学中英语游戏教学应遵循的原则,为快乐地小学英语教学提供了具有可操作性的方法。

多媒体网络环境下幼儿英语教学法课程的教学模式探究

幼儿英语教学法课程的最终目的是培养合格的幼儿园英语教师,其教学质量直接影响着我国幼儿园英语教师队伍的建设和培养。多媒体网络技术应用于幼儿英语教学法课程,是幼儿英语教学法课程教学模式改革的一条有效途径。

小学英语听力教学探索

该文以David Nunan的观点为基础,从热身、课堂教学和听力评价等几个方面探索了小学英语听力教学的方法,旨在改进小学英语听力教学,增强小学生学习英语的兴趣,提高其英语听力水平。

英语形成性评价的实施

本文从几种教育理论出发探讨了形成性评价的理论基础,介绍了英语形成性评价的具体实施方法。

学前教育专业学生英语教学能力的培养

幼儿英语教育已在各个幼儿园普及,但是幼儿英语教师队伍却存在一定弊端,该文立足幼儿园英语教育的现状,阐述了对学前教育专业学生英语教学能力培养的具体方法。

英语教师培训模式研究——幼儿英语教师培训之我见

社会对幼儿英语教师的要求越来越高,而目前幼儿英语教师队伍的素质却亟待提高,教师的培养和培训成为现阶段一个最为迫切的问题。本文旨在探索一种新的多媒体网络环境下的幼儿英语教师培训模式。

关于增强“中国近现代史纲要”课教学实效性的三个“统一”

“中国近现代史纲要”课程作为大学本科生必修的思想政治理论课，担负着让学生了解国情和国史、明确“四个选择”必然性的重要教学任务。把握好三个“统一”是增强“中国近现代史纲要”课程教学实效性的重要环节。

充分发挥多媒体课件在教师课堂提问中的作用

高校文科课程的课堂教学提问,其主要目的不应是检验学生是否记住了所学知识,而是要引导学生运用所学知识分析问题和解决问题。能够做到这一点的就是高效提问。笔者认为,多媒体课件为教师在课堂进行高校提问提供了有利条件,应当把课堂高效提问与多媒体课件有机地结合起来,增强课堂教学效果,切实提高学生分析问题和解决问题的能力。

论金树仁政权速亡的原因

1912—1949年这一时期新疆动荡的历史舞台上,主要活跃着杨增新、金树仁和盛世才三个军阀人物,他们依次掌握新疆的军政大权,执行的政策各异,对新疆的影响也各不相同.建国以来,学术界对杨增新(1912—1928)和盛世才(1933—1944)两个时期的研究颇多,而对金树仁政权的研究相对较少.笔者以为,尽管金树仁政权(1928—1933)统治时间最短。

非小细胞肺癌组织miRNA-142-3p表达及预后的相关性

目的:探讨miRNA-142-3p在可手术的非小细胞肺癌组织中的表达情况及其与预后的相关性。方法:回顾性分析辽宁省肿瘤医院2009年12月-2012年3月期间行手术治疗的121例非小细胞肺癌患者的临床资料。采用定量RT-PCR检测上述病例肺癌标本中miRNA-142-3p的表达水平,应用χ2检验分析miRNA-142-3p表达水平与肺癌患者各临床病理参数的相关性,应用Kaplan-Meier方法分析miRNA-142-3p表达与非小细胞肺癌生存的相关性,采用Cox风险比例模型分析预后的独立影响因素。结果:miRNA-142-3p表达量与复发转移情况相关(P<0.05),与患者性别、年龄、病理类型、分期及吸烟史无明显相关,生存分析显示miRNA-142-3p高表达组生存期明显低于低表达组(P<0.01),Cox风险比例模型分析显示miRNA-142-3p表达可作为非小细胞肺癌患者预后的独立影响因素。结论:miRNA-142-3p高表达与非小细胞肺癌复发转移相关,miRNA-142-3p高表达提示非小细胞肺癌患者预后不良。

浅谈小学生英语阅读教学

阅读作为小学英语教学的重要内容之一,常常被家长和老师忽视,导致小学生英语阅读兴趣不高,习惯不好,阅读量不够,本文从语言的交际功能入手,谈了小学英语阅读的重要性、必要性、可行性,分析了影响学生阅读的因素,提出了改善阅读现状的方法。

浅谈大学英语口语教学

英语教学在我国已经广泛开展起来．并且呈越来越广泛、越来越低龄化的趋势。可是多年来用人单位对学生的英语口语水平却一直不满意，甚至有些大学毕业生通过了六级考试．却无法胜任单位提出的英语交际方面的工作任务。

5-Aza-2′-dC通过上调DR4与DR5表达增加TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的敏感性

目的探讨5-Aza-2′-dC增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性的作用及其可能机制。方法 5μmol/L 5-Aza-2′-dC预处理细胞96 h,TRAIL(0,50,100,200 ng/mL)处理细胞12 h,MTT检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,流式细胞技术检测TRAIL受体DR4及DR5的表达,Western blot检测caspase-8蛋白表达水平,Real-time PCR检测细胞DR4、DR5和caspase-8 mRNA表达。结果 5-Aza-2′-dC预处理组与对照组相比,TRAIL对细胞增殖抑制率和诱导凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。5-Aza-2′-dC能增加细胞表面DR4和DR5表达,促进凋亡通路关键蛋白caspase-8活化。5-Aza-2′-dC在mRNA水平增加了DR4、DR5和caspase-8的表达。结论 5-Aza-2′-dC增加了TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的敏感性,其可能机制是通过上调DR4、DR5和caspase-8表达实现。

白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、迁移及侵袭的影响

目的研究白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法采用MTT法和软琼脂集落形成实验测定白藜芦醇对MDA-MB-231细胞生长的影响;采用Transwell小室迁移、侵袭实验检测白藜芦醇对细胞迁移、侵袭能力的影响。结果白藜芦醇浓度在25～200μmol/L时,作用6,12,24,48,72h后,抑制MDA-MB-231细胞增殖,抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.01)。白藜芦醇抑制MDA-MB-231细胞在软琼脂中的集落形成能力随着白藜芦醇浓度的增大集落形成率减小。25、50、100、200μmol/L的白藜芦醇作用24h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论白藜芦醇能有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,并通过抑制细胞对细胞间基质的降解作用抑制其侵袭和迁移能力。