目的优化碱水解-光度法测定胶原中羟脯氨酸含量的水解条件,建立一种简化且准确的羟脯氨酸含量测定方法。方法设计两因素五水平的正交试验,优化了胶原水解时碱浓度及水解时间对水解的影响。并对比碱水解-光度法与酸水解-光度法以及氨基...目的优化碱水解-光度法测定胶原中羟脯氨酸含量的水解条件,建立一种简化且准确的羟脯氨酸含量测定方法。方法设计两因素五水平的正交试验,优化了胶原水解时碱浓度及水解时间对水解的影响。并对比碱水解-光度法与酸水解-光度法以及氨基酸分析仪法的检测结果,验证碱水解-光度法的稳定性和准确性。结果分光光度法检测羟脯氨酸含量为0 mg/ml^0.15 mg/ml时线性良好,线性回归方程为y=0.008x+0.014 2,相关系数r=0.999。碱水解的适宜条件:0.1 k Pa、121℃,2 mol/L Na OH,水解时间为20 min。在优化后的操作条件下,该法的平均回收率为101.3%,且与酸水解-光度法以及氨基酸分析仪法的检测结果差异无统计学意义。结论在高温碱条件下水解,无需充氮,无需中和或去除盐酸,实验操作简便,缩短用时,水解速度大幅提高,且灵敏度高、重现性好,提升了检测效率,可快速测定羟脯氨酸含量,应用于动物蛋白的检测。展开更多
文摘目的优化碱水解-光度法测定胶原中羟脯氨酸含量的水解条件,建立一种简化且准确的羟脯氨酸含量测定方法。方法设计两因素五水平的正交试验,优化了胶原水解时碱浓度及水解时间对水解的影响。并对比碱水解-光度法与酸水解-光度法以及氨基酸分析仪法的检测结果,验证碱水解-光度法的稳定性和准确性。结果分光光度法检测羟脯氨酸含量为0 mg/ml^0.15 mg/ml时线性良好,线性回归方程为y=0.008x+0.014 2,相关系数r=0.999。碱水解的适宜条件:0.1 k Pa、121℃,2 mol/L Na OH,水解时间为20 min。在优化后的操作条件下,该法的平均回收率为101.3%,且与酸水解-光度法以及氨基酸分析仪法的检测结果差异无统计学意义。结论在高温碱条件下水解,无需充氮,无需中和或去除盐酸,实验操作简便,缩短用时,水解速度大幅提高,且灵敏度高、重现性好,提升了检测效率,可快速测定羟脯氨酸含量,应用于动物蛋白的检测。