全周期综合干预对风湿免疫性疾病患者妊娠结局的影响

目的探讨全周期综合干预对风湿免疫性疾病患者妊娠结局的影响。方法以2021-01至2022-05解放军总医院第七医学中心收治的51例妊娠合并风湿免疫性疾病患者作为研究组,采用本研究团队建立的全周期综合干预方法及诊治流程对研究组进行干预,同时选取2015-01至2020-12该单位收治的55例妊娠合并风湿免疫性疾病患者作为对照组,比较两组间妊娠结局的差异。结果研究组子痫前期(5.89%)、胎儿生长受限(3.92%)、早产(15.69%)、原有疾病活动或加重(1.96%)的发生率明显低于对照组(分别为20.00%、16.36%、32.73%、12.73%,P均<0.05)。对照组补体C_(3)(0.80±0.15)、C_(4)(0.11±0.03)水平明显低于研究组(分别为1.07±0.21、0.22±0.05,P均<0.01),研究组免疫指标抗核抗体(35.29%)、抗SM抗体(9.80%)、抗dsDNA抗体(15.67%)、抗心磷脂抗体(23.53%)、抗β_(2)糖蛋白Ⅰ抗体(19.61%)、抗SSA抗体(11.76%)、抗SSB抗体(7.84%)阳性率明显低于对照组(分别为72.73%、27.27%、32.73%、41.82%、40%、27.27%、23.64%,P均<0.05)。研究组选择剖宫产率(35.29%)明显高于对照组(18.18%,P<0.05),而总剖宫产率(41.18%)及产程剖宫产率(5.88%)明显低于对照组(分别为61.82%、43.64%,P<0.05)。研究组产后出血(3.92%)、胎膜早破(7.84%)、胎儿宫内窘迫(5.88%)、头盆不称(3.92%)的发生率均明显低于对照组(分别为16.36、23.64%、20.00%、18.18%,P<0.05)。研究组新生儿NICU入院(3.92%)、新生儿感染(9.80%)的发生率均明显低于对照组(分别为18.18%、27.27%,P<0.05)。结论全周期综合干预方法能明显改善妊娠合并风湿免疫性疾病患者的母儿妊娠结局,降低剖宫产率。

医学实验动物学教学的改革与创新

医学实验动物学的学科特点和学科历史决定了其教学是一个长期摸索的过程，本教研室在平时教学过程中通过明确教学目标，完善教学大纲坚持教材改革不断充实教学内容，指定课程标准，统一课件，注重教学与科研相结合等手段对医学实验动物的教学进行了有益的改革收到良好效果。

慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立

目的以慢病毒作为载体,制作增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法慢病毒包装采用三质粒系统。3个质粒分别为转基因质粒FUGW、病毒结构蛋白表达质粒psPAX2以及病毒包膜蛋白表达质粒pMD2.G。病毒包装时,用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的293FT细胞,培养48h后,收取含病毒的上清,并通过高速离心浓缩病毒。将含浓缩病毒液作梯度稀释后感染293FT细胞,通过流式细胞计数仪测定病毒滴度。用显微注射法将浓缩的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下。在荧光显微镜下观察胚胎EGFP的表达。将注射后发育至2-细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠。通过紫外光照射观测EGFP在小鼠活体内的表达水平。结果病毒液浓缩前的滴度≥106TU/ml(transducing unit,TU),经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到109TU/ml以上。将浓缩病毒液注射至小鼠1-细胞期胚胎透明带下,注射后胚胎的2-细胞期卵裂率为81.8%(1189/1453),利用荧光显微镜分别在注射后60、84、132h观察胚胎,均发现有较强荧光。在2-细胞期,每一视野下胚胎阳性率>90%,说明包装的病毒成功并高效地转染小鼠胚胎。胚胎移植后假孕母鼠妊娠率为42.9%(12/28),首建鼠阳性率为60.8%(73/120),转基因小鼠的总体研制效率(转基因小鼠数/注射胚胎数)为5.0%(73/1453)。将F0代EGFP转基因小鼠分别与野生型小鼠交配,在其F1、F2、F3代小鼠中均获得了EGFP阳性小鼠,阳性率分别为91.4%(32/35)、93.8%(30/32)、93.1%(27/29)。结论通过慢病毒载体感染小鼠1-细胞期胚胎可有效地制备转基因小鼠。我们已初步建立了慢病毒介导的转基因小鼠制备技术体系。

低蛋白血症患者常规血液生化指标分析及相关性探讨

目的探讨低蛋白血症患者白蛋白水平与常规血液生化指标的相关性及临床意义。方法回顾性研究127例住院患者常规血液生化指标,按血清白蛋白水平分为2组,血清白蛋白≥35g/L为对照组,<35g/L为低蛋白血症组。结果低蛋白血症组血清总蛋白、前白蛋白、白蛋白、钙、铁、磷、胆碱酯酶的水平显著低于对照组(P<0.01)。胆碱酯酶和血钙浓度与血清白蛋白之间呈显著正相关(r=0.446、0.372,P<0.01)。结论通过对低蛋白血症患者常规血液生化指标分析及相关性研究显示,血清白蛋白水平与胆碱酯酶、血钙呈正相关,联合检测可以作为评价患者潜在营养不良风险的重要参考指标。

慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立

目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。

FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展

实时荧光定量PCR(real-time fuorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。

应用显微注射法建立免疫耐受转基因小鼠模型的研究初探

本论文用质粒载体PBC1-CD152转化大肠杆菌DH5a，以Amp(50mg／m1)筛选阳性单个菌落，LB培养基大量培养，按照质粒小量提取试剂盒使用方法抽提质粒，AVAⅠ、HindⅢ酶切和PCR扩增检测。可育雌鼠注射PMSG与HCG超排卵，输卵管内收集，移植受体母鼠输卵管腹壶部。结果表明：AVAⅠ酶切产物有一条为2．0kb的片段，证明是目的基因的启动子，从而证明质粒上含有我们所需的目的基因片段。HindⅢ酶切后出现一条带，与质粒的大小相符。共处理十批小鼠100只，有70只为可用供体，处理有效率为。70％，共捡胚1425枚，只均捡卵20．36枚。共处理受体小鼠十批40只，每只植入胚胎20枚，共出生小鼠274只，出生率为34．25％。本次实验成功扩增了免疫耐受诱导基因皮肤靶向表达载体PBC1-CD152，并以小鼠为动物模型，建立了完善的显微注射法转基因技术流程。

慢病毒介导的CYP3A11基因knock-down小鼠的建立

目的构建和筛选小鼠P4503A11基因miR RNAi慢病毒载体,建立CYP3A11基因knock-down小鼠。方法利用Ravi Sachidanandam's Lab的在线软件设计沉默小鼠P4503A11基因的miRNA所对应的shRNA序列,PCR扩增后克隆到PCI-GFP-MiR质粒中,其再与慢病毒载体FUW进行重组。将psPAX2和pMD2.G两个载体和FUW-GFP-MiR-shRNA重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒。用包装好的病毒液感染293FT细胞后,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定。将上述重组慢病毒载体分别转染FVB/N小鼠肝细胞,转染48h后,检测P4503A11基因mRNA表达水平的变化。选取干扰效果最好的FUW-GFP-MiR-shRNA1重组慢病毒载体进行制备基因knock-down小鼠模型。用显微注射法将浓缩的shRNA1病毒液注射至FVB/N小鼠12细胞期胚胎透明带下。将注射后发育至22细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠。在紫外光照射下利用滤光片观察GFP在小鼠活体内的表达水平。结果DNA测序结果显示3个重组慢病毒载体均与所设计的shRNA序列一致。检测的3个浓缩前慢病毒悬液的滴度均≥106TU/ml,经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到109TU/ml以上。转染FUW-GFP-MiR-shRNA1、2的2组肝细胞的P4503A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组均显著下降(P<0.05),而转染阴性对照FUW-GFP-MiR-shRNA-NC的肝细胞P4503A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组无明显改变。选用FUW-GFP-MiR-shRNA1慢病毒载体制备的F0代3A11基因knock-down小鼠,在紫外光照射下,阳性小鼠可见较强的荧光。结论构建并筛选出小鼠P4503A11基因有效的靶向miR RNAi慢病毒载体,并成功建立CYP3A11基因knock-down小鼠。

21例合并气管狭窄肺动脉吊带患儿的治疗

目的：回顾性分析合并气管狭窄的肺动脉吊带患儿的治疗和预后，探讨单纯左肺动脉移植，避免气管成形术治疗策略的可行性。方法2009年4月至2015年11月，共有21例合并气管狭窄肺动脉吊带患儿在本单位接受手术治疗。其中6例患儿采用左肺动脉移植加气管干预手术策略。另外15例患儿采用左肺动脉移植、避免气管成型手术，术后采用早期拔管，无创CPAP过渡治疗策略。对所有患儿病例资料进行收集分析。结果21例合并气管狭窄患儿，男12例，女9例，年龄1个月~10岁，体重2.9~25.0 kg，术前均有中度至重度呼吸道症状，其中5例为重度，需要机械通气辅助呼吸。左肺动脉移植加气管干预手术患儿6例，存活出院1例，存活率16.7％；其中3例接受Slide气管成形术，2例气管吻合口肉芽组织增生，呼吸衰竭死亡；另外3例接受气管支架植入术，无存活。左肺动脉移植手术患儿共15例，采用经胸骨正中切口行左肺动脉移植术，存活出院13例，存活率86.7％；另外2例撤离呼吸机失败，体外膜肺辅助下行Slide气管成形术，术后气管吻合口愈合不良死亡。结论中、重度气管狭窄的肺动脉吊带患儿，采取左肺肺动脉移植，避免气管成形手术，术后早期拔除气管插管改无创CPAP过渡的治疗策略是可行的，预后也比较好，可以成为此类患儿的理想治疗策略。

PICU患儿营养评价及肠内营养实施

危重症患儿多处于严重应激状态,易出现营养不良,导致机体对疾病的抵抗力和修复力下降,从而加重患儿病情。在最初多脏器功能的支持治疗后,尽早考虑开始实施合理的营养支持以改善其代谢状态、补充代谢所需,可改善患儿的营养状态,有利于疾病的恢复及预后。肠内营养因符合胃肠道生理并可改善胃肠道黏膜屏障功能而受到重视。

医学院校实验动物学课程教学内容改革

从改革的紧迫性、必然性入手,对实验动物学教学内容的改革做了初步的探索,为医学院校的实验动物学的教学积累一定经验,以期改变国内实验动物学教学的长期落后状态。

经颈部插管儿科体外膜氧合后脑成像异常的危险因素分析

目的探讨经右侧颈部插管的体外膜氧合(ECMO)患儿出现脑成像异常的危险因素。方法回顾性分析多中心2016年1月至2021年12月期间于中国人民解放军总医院第七医学中心儿科医学部、河南省人民医院、河南省儿童医院行经右侧颈内静脉、颈总动脉插管建立动脉-静脉ECMO(VA-ECMO)支持并存活的患儿资料。根据头颅计算机断层扫描或磁共振成像信息分为异常组和正常组,分析患儿人口统计学资料、ECMO前后实验室检查以及处理,并将单因素分析中有统计学意义变量纳入到多因素Logistic回归中,分析ECMO相关急性脑影像学异常的独立危险因素。结果共纳入患儿108例,其中正常组47例,异常组61例,ECMO后患儿头颅影像学异常率为56.48%。108例患儿中,ECMO后右侧颈总动脉结扎率37.04%(n=40),修复率62.96%(n=68)。结扎者脑成像异常率62.50%(25/40),修复者52.94%(36/40),但二者差异无统计学意义(P>0.05)。患儿类型(新生儿或儿童)、性别、体重、ECMO前诊断等基本资料差异无统计学意义(P>0.05)。ECMO前pH值、碱剩余及乳酸与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。异常组ECMO前乳酸值高于正常组(P=0.003),并与脑成像异常间存在正向相关关系(OR=1.107)。结论该研究结果提示ECMO前乳酸堆积是急性脑成像异常发生的独立危险因素,ECMO撤离后右侧颈总动脉结扎与脑影像学异常无显著相关。

儿科急性呼吸窘迫综合征:从肺保护通气到体外膜肺氧合

儿科急性呼吸窘迫综合征(PARDS)是导致儿童重症监护病房住院患儿死亡的最常见原因,根据氧合指数可将PARDS分为轻度、中度和重度。虽然近年来随着肺保护通气策略的实施,PARDS的救治成功率和预后有了很大进步,但重度PARDS的病死率仍居高不下。因此,了解PARDS的定义、诊断、肺保护通气策略的实施和体外膜肺氧合的应用时机管理,具有重要临床意义。