原花青素对青春期前羔羊卵母细胞体外成熟的影响

青春期前羔羊的卵母细胞发育能力低于成年母羊的卵母细胞,这限制了幼畜体外胚胎移植(Juvenile in vitro Embryo Transfer,JIVET)技术的广泛应用。为探讨原花青素B2(Procyanidin B2,PCB2)对提高青春期前羔羊卵母细胞发育能力的影响及其机制,本研究收集了经促性腺激素刺激的4~8周龄羔羊卵母细胞,在体外成熟液中培养。在卵母细胞成熟液中添加5μg/mL PCB2作为PCB2组,未添加PCB2组为对照组,培养24 h后测定卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率,并进一步测定胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)含量、线粒体活性和线粒体膜电位水平等。结果表明:PCB2组卵母细胞第一极体排出率高于对照组(36.76%vs 31.11%,P<0.05),但卵裂率(49.17%vs 49.68%)及囊胚率(47.47%vs 54.06%)与对照组无显著差异;进一步研究发现在IVM液中添加5μg/mL PCB2降低了卵母细胞ROS水平(P<0.01),并提高了GSH水平(P<0.05)、线粒体活性(P<0.01)以及线粒体膜电位水平(P<0.05)。由此可见,在IVM过程中添加5μg/mL PCB2能有效降低青春期前羔羊卵母细胞的氧化应激,提升线粒体功能和成熟效率。

羔羊不同超排方法的筛选及其对卵母细胞体外成熟的影响

旨在比较不同超排方案对羔羊超数效果及其对卵母细胞体外成熟的效果,筛选最佳幼畜超排方案。试验以1~2月龄绵羔羊为研究对象,分为3组,其中2组(方案I和方案II注射激素)为试验超排组,1组为对照组(未注射激素),探究不同超排方法对绵羔羊卵巢的反应性、卵巢的大小及卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,6次×12 h间隔、注射总剂量180 U促卵泡素(FSH)的超排方案Ⅱ效果优于4次×12 h间隔、注射总剂量200 U FSH的超排方案Ⅰ,超排方案Ⅱ获得发育卵泡数(348.00±8.25)枚/只优于超排方案Ⅰ发育卵泡数(265.00±6.32)枚/只;体外培养卵母细胞24 h后,超排方案Ⅱ卵母细胞成熟率45.4%优于超排方案Ⅰ卵母细胞成熟率32.2%。研究筛选出6次×12 h间隔、注射总剂量180 U FSH,第1次注射FSH时同时肌内注射330 U PMSG的超排方案为最佳幼畜超排方案。本试验结果为绵羔羊扩展体外受精所需卵子的来源,缩短世代间隔,产生大量优秀后代,加速育种进程等方向的研究奠定一定的理论基础。

半胱胺对羔羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

实验旨在研究半胱胺对4~8周龄哈萨克羔羊卵母细胞体外成熟和发育能力的影响。在体外成熟培养基中添加不同浓度的半胱胺(0、50、100、200μmol/L),统计卵母细胞卵裂率、囊胚率、成熟率、正常受精率及卵裂和胚泡率,并用SPSS 17.0进行方差分析。结果表明:与空白组相比,添加100μmol/L半胱胺可提高羔羊卵母细胞卵裂率、囊胚率、成熟率、正常受精率、卵裂率及胚泡率(P<0.05),添加100μmol/L半胱胺可提高卵母细胞的正常受精率和滋养层细胞数(P<0.05)。可见,100μmol/L半胱胺可显著改善羔羊卵母细胞的体外成熟、受精和发育能力。

肉用绵羊高效繁育技术研究

新疆生产建设兵团第七师124团的畜牧业主要以发展养羊业为主,建成了以南非肉用美利奴羊罗米尼·希尔斯肉用羊养殖为主的种羊场,采用农区半放牧半舍饲方式进行规模化饲养。文章概述了该团绵羊品种现状、种质资源的利用情况和采取的改良措施,即应用胚胎移植、发情调控技术实行两年三胎,结合高效繁育配套技术,提高了品种繁育效率,加快了纯种繁育期限。

新疆细毛羊养殖现状及遗传资源保护利用措施

细毛羊产业是新疆畜牧业的传统优势产业,细羊毛也是我国重要的毛纺织工业原材料。细毛羊产毛的同时也生产优质的羊肉产品,肉用与毛用兼顾,具有较高的经济价值。基于当前国家对畜禽种质资源保护的大背景,本文对新疆细毛羊的养殖现状、未来发展趋势及遗传资源保护利用措施进行探讨,以期为新疆细毛羊产业发展提供一些经验借鉴。

纳米颗粒在配子及胚胎生物技术中的应用研究进展

辅助生殖技术(ART)在不孕不育诊治、濒危物种保存、良种家畜快速高效扩繁中具有重要应用价值。ART已常规开展并在世界范围内应用,但该技术面临着效率低下等挑战。非生理状态下的培养和保存可致配子和胚胎处于氧化应激状态,越来越多的研究表明氧化应激是影响精子获能、损伤卵母细胞及胚胎发育能力的主要因素。近年来,创新性使用纳米颗粒(NPs)的相关技术和方案有效降低了配子氧化应激水平,提高了胚胎生物技术的效率。本文系统分析了NPs进入细胞的方式、分布及影响因素,深入探讨了NPs的作用机理,归纳NPs在配子、体外胚胎生产、低温保存中的应用,以期为ART总体效率的提高提供新方法和理论依据。

绵羊MYL基因家族的鉴定与组织表达分析

为了解肌球蛋白轻链(myosin light chain,MYL)基因家族在绵羊中的分子进化关系及表达变化,本研究利用生物信息学方法对绵羊MYL基因家族进行鉴定和系统分析。各选取了3只军垦白肉羊、新疆细毛羊和湖羊成年公羊各组织样品,采用qRT-PCR方法验证家族成员MYL1、MYL6B和MYLPF基因的表达情况。结果显示,12个MYL基因分布在9条染色体上,编码由147~211氨基酸组成的亲水性蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,二级结构以α-螺旋为主。根据基因结构、保守结构域和基序分布等特征,可以将这些基因家族成员分为3个组。共线性分析结果表明,MYL2和MYL10、MYL2和MYLPF存在片段复制,且这些片段受到较强的选择压力。蛋白互作网络显示MYH10与绵羊MYL家族成员均存在互作关系。MYLs的组织表达模式差异较大,其中MYL1、MYL2、MYL6B和MYLPF在骨骼肌组织中高水平表达。基因克隆测序结果显示,扩增得到目的基因的CDS全长,qRT-PCR结果表明,MYL1、MYL6B和MYLPF在军垦白肉羊肌肉组织中的表达水平显著高于其他组织(P<0.0001),并且在军垦白肉羊骨骼肌中的表达水平显著高于湖羊和细毛羊(P<0.0001)。以上结果为深入研究绵羊MYL基因家族的功能以及优化绵羊肉用性能提供了线索。

影响羊供体超数排卵与受体移植受胎率的因素分析

为了研究影响羊供体超数排卵效果及胚胎移植受体受胎率的因素,试验选取萨福克羊和东弗里升羊2个供体品种,受体羊为本地阿勒泰羊,对促卵泡素(FSH)不同批次、长途运输应激因素、不同输精方式、技术员的熟练程度以及受体同期化时间差等5个方面的影响因素开展了相关研究。结果表明:FSH的不同批次对萨福克和东弗里升2种供体羊可用胚率无显著影响(P>0.05);长途运输组供体羊,无论是萨福克羊还是东弗里升羊,胚胎数和受胎率均极显著低于对照组(P<0.01);不同输精方式,子宫角+常规输精的获胚率极显著高于常规输精、子宫角输精(P<0.01),子宫角输精显著高于常规输精(P<0.05);胚胎移植操作熟练组受胎率显著高于对照组(P<0.05);受体羊撤栓时间不同,发情时间相差±12 h,两组受体羊受胎率均无显著差异(P>0.05)。本试验结果可为从事胚胎移植工作的科研工作者和技术员提供借鉴。

在规模化奶牛场使用胸部超声波辅助诊断和治疗犊牛呼吸道疾病

牛呼吸道疾病(BRD)在规模化奶牛场的犊牛中很常见的一种疾病,目前的诊断方法缺乏灵敏度和特异性。胸部超声波(TUS)是一种相对较新的BRD诊断工具,可提高诊断的准确性。收集规模化奶牛场347头犊牛的TUS检查数据,并与规模化奶牛场的BRD治疗进行比较数据。在347次超声波检查中,62次(17.9%)归类为异常,285次(82.1%)归类为正常。在62头被归类为异常的犊牛中仅有20头(32.3%)犊牛接受治疗;而在285头被归类为正常的犊牛中,15头(5.3%)犊牛接受治疗。结果表明,在规模化奶牛场使用TUS可提高犊牛的BRD诊断率和准确性、减少不必要的抗菌药使用,并证明预防性保健计划的价值。

BVDV-2 E2基因的原核表达及重组蛋白反应原性的研究

为了对BVDV进行诊断,根据GenBank登录的BVDV-2E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆分离株SW E2基因进行扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入BL21(DE3)表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-28a-E2,并转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDSPAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为32ku;Western blot分析表明该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性,为BVDV-2诊断试剂研发奠定基础。

BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2。用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化酵母GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用φ=1.5%甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为23.2ku;Western blot分析表明,该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。

羊口疮病毒新疆流行株的分离鉴定及其遗传进化分析

【目的】研究羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)新疆流行株的遗传变异情况。【方法】采集新疆石河子地区疑似感染ORFV的羔羊唇部结痂病料,通过PCR扩增、Vero传代细胞分离培养、电镜观察、动物回归试验等方法,检测、分离和鉴定ORFV毒株,对分离鉴定的3株ORFV毒株保护性抗原基因B2L和F1L及毒力基因VIR、GIF和VEGF分别进行克隆、测序及遗传进化分析。【结果】从病料中分离鉴定出3株ORFV新疆流行株(ORFV-SHZ1、ORFV-SHZ2和ORFV-SHZ3)。分析结果显示,ORFV分离株保护性抗原基因B2L、F1L相对保守,B2L和F1L基因编码氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为88.6%~97.9%和86.7%~97.4%;3个毒力基因的变异相对较大,尤其是VEGF基因。VIR、GIF和VEGF基因编码氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为91.8%~97.3%,85.2%~97.0%和71.5%~98.5%。基于B2L和VIR基因的遗传进化树分析表明,ORFV-SHZ1和ORFV-SHZ2分离株均与台湾分离株的亲缘关系最近。【结论】试验分离的ORFV新疆流行株可能是由台湾株与其他毒株重组后产生的,且其毒力基因发生了较大的变异。

牛乳头瘤病毒基因2型流行株全基因组的克隆及序列分析

为了解牛乳头瘤病毒(Bovine Papillomavirus,BPV)新疆流行株基因型及其基因组遗传变异情况,用乳头瘤病毒L1基因简并引物FAP59/FAP64对新疆沙湾县奶牛皮肤肿瘤组织样品进行PCR扩增,测序后确定,BPV基因型;设计6对BPV基因型特异性引物,经扩增、测序、拼接后获得BPV流行株全长基因组序列。L1基因序列分析表明,BPV2-SW01流行株为BPV-2基因型;该毒株基因组全长7 944bp,包括E6、E7、E1、E8、E2、E4、E3、E5、L2和L1 10个开放阅读框(ORF)。遗传进化树分析显示,BPV2-SW01归于Delta乳头瘤病毒属,与BPV-1和BPV-13进化关系最近。

酵母菌发酵葡萄渣发酵效果研究

以葡萄渣为主要底物接种酵母菌进行发酵,酿酒酵母和饲料酵母的配比为2∶1,发酵时间为30 h。结果表明,发酵葡萄渣中粗蛋白、灰分、磷含量极显著(P<0.01)高于烘干葡萄渣,而水分、NDF和ADF极显著(P<0.01)低于烘干葡萄渣,钙含量显著(0.01≤P<0.05)高于烘干葡萄渣,二者粗脂肪含量差异不显著。葡萄渣经酵母菌发酵后,营养成分大幅度增加,纤维含量下降。

新疆沙湾牛病毒性腹泻病毒基因2型毒株的分离鉴定

为了解在新疆奶牛中是否存在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因2型的感染,利用BVDV 5′-UTR特异性引物对沙湾县某牛场采集疑似感染BVDV病料样品进行RT-PCR检测,并将检测为阳性样品处理后接种MDBK单层细胞,结果从血液样品中成功分离出1株可产生细胞病变(CPE)的BVDV毒株(命名为BVDV-SW)。通过对该分离株5′-UTR和E2基因的扩增、测序和序列比较,证实所分离的毒株为BVDV基因2型。遗传进化分析表明,该分离株与17237毒株具有较近的亲缘关系。证实新疆奶牛中存在BVDV-2的感染,为该病的免疫防控提供了科学依据。

犬细小病毒主要蛋白基因同义密码子偏爱性分析

犬细小病毒是一种对犬科动物危害严重的DNA病毒,为了解其主要蛋白的密码子使用特点,本文运用EMBOSS(The European Molecular Biology Open Software Suite)的CHIPS和CUSP程序、CodonW在线软件对CPV全基因组及3种主要蛋白基因的有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、碱基含量(GCall、GC1、GC2、GC3)进行分析。结果显示:CPV基因组、NS1、VP1、VP2基因的Nc值分别为36.46、37.86、35.05和32.87,表明CPV对同义密码子的使用具有明显的偏爱性;对第3位核苷酸为A和T的密码子表现出明显的偏爱性;GC含量普遍偏低(均小于40%)。进一步分析发现CPV的3种主要蛋白基因与大肠杆菌、人密码子偏爱性差异较大,与酵母密码子偏爱性差异较小,提示表达系统选择酵母较为合适。

羊口疮病毒新疆野毒株SHZ1 B2L和F1L基因的克隆及遗传进化分析

为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的不同地域的17个流行株相比,B2L基因核苷酸同源性为97.28%～98.86%,推导氨基酸同源性为88.65%～90.50%;F1L基因核苷酸同源性为94.56%～97.07%,推导氨基酸同源性为93.82%～95.88%。基于B2L基因的遗传进化树分析发现,SHZ1株B2L基因与我国现用疫苗株B2L基因亲缘关系较近;而基于F1L基因的遗传进化树显示,SHZ1株与意大利分离株的亲缘关系最近。本研究提示ORFv SHZ1株可能是国外流行株与疫苗株重组后产生的一个变异株。

牛乳头瘤病毒2型L1基因的克隆及原核表达

为表达牛乳头瘤病毒2型(BPV2)衣壳蛋白L1基因,本研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料样品中扩增BPV2沙湾分离株L1基因,克隆至pMD18-T载体中,测序后进行分析。将BPV2沙湾株L1基因亚克隆于原核表达质粒pGEX4T-1中,经IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和western blot分析。SDS-PAGE分析显示,诱导后能够表达分子量80 ku的重组蛋白;western blot显示该蛋白可以与抗BPV2多克隆抗体发生反应。小鼠免疫试验表明,BPV2 L1重组蛋白可以诱导小鼠产生抗BPV2 L1特异性抗体;琼脂扩散试验显示,重组L1蛋白具有良好的免疫原性。本研究原核表达BPV2 L1蛋白,并证明其具有良好的反应原性及免疫原性,为牛乳头瘤病的疫苗和诊断试剂研发奠定了基础。

瘟病毒属3种病毒多聚蛋白酶基因同义密码子偏爱性分析

【目的】分析黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的使用特点,初步探讨3种病毒多聚蛋白酶基因的进化及对不同宿主的适应策略。【方法】运用EMBOSS软件的CHIPS和CUSP程序及CodonW在线分子生物学软件,分析CSFV、BVDV和BDV的有效密码子数(ENc),碱基GC含量(Gcall),密码子第1、2、3位GC含量(GC1、GC2、GC3),相对同义密码子使用度(RSCU)及同义密码子第3位的GC含量(GC3s),并对3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc进行绘图分析。【结果】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc值分别为51.205,51.323和52.580,表明3种病毒多聚蛋白酶基因的密码子偏好程度均较低;上述3种病毒多聚蛋白酶基因的GC含量分别为46.84%,45.99%和45.71%,均不超过50%;除BDV多聚蛋白酶基因同义密码子含量表现为GC1>GC3>GC2外,CSFV和BVDV均表现为GC3>GC1>GC2,且除CSFV的GC3为52.02%外,所有病毒的GC1、GC2、GC3均小于50%,可见3种病毒间的碱基组成(GC含量)及ENc值差异较小。RSCU分析表明,与CSFV偏爱使用G/C结尾的密码子不同,BVDV和BDV更偏爱使用以A结尾的密码子,这可能与病毒对宿主的适应策略有关。ENc绘图分析(Nc-plot)说明,碱基组成对密码子使用模式影响较小。【结论】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的偏好性较低,这可能是病毒进化过程中对宿主的一种适应策略。

褪黑素在绵羊体外胚胎生产技术中的应用研究进展

绵羊体外胚胎生产技术对于优良绵羊品种扩繁、绵羊新品种创制具有重要意义。然而,与体内胚胎相比,体外生产的绵羊胚胎发育潜力低、胚胎质量差,并且体外生产的绵羊胚胎冷冻效果不理想,这些都严重限制了该技术的产业化应用。褪黑素是一种由松果体合成并分泌的物质,作为一种有效的抗氧化剂,可以减少氧化应激,在绵羊体外卵母细胞和体外胚胎的发育等方面起到非常重要的作用。本文介绍了褪黑素的功能和作用机制,并对褪黑素在绵羊体外胚胎生产技术中的应用进行阐述,旨在为褪黑素的进一步研究提供参考依据。