组织工程化人工复合皮肤的构建

目的 为皮肤缺失的移植提供具有生物活性的表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法 将体外传代培养的表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的 I型胶原基质网架的两侧 ,在液面下培养 1周后 ,改为气 -液界面培养 ,动态观测人工皮肤光镜下组织学形态及电镜下超微结构。结果 人工复合皮肤具有表皮、真皮双层结构。培养过程中表皮逐步增殖、分化、发育 ,形成基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层 ;真皮基质网架渐渐降解 ,并逐步被增殖的成纤维细胞及其所分泌的细胞外基质所取代 ,完成真皮构建。结论 利用组织工程技术体外构建人工复合皮肤 ,可用于皮肤缺失者的自体移植治疗 ,体外构建的复合人工皮肤可从根本上解决自体供皮不足 ,且细胞源于自体皮肤 ,排除了发生免疫排斥反应和疾病传播的风险 ,具有安全、有效。

甲基汞诱发大鼠肝脏脂质过氧化及其效应关系的研究

对甲基汞(MeHg)的毒作用机理,国内外做了一些研究,但仍不十分清楚。本文拟从脂质过氧化及其相关代谢方面,探讨MeHg的毒作用机理,从而为其防治提供新的线索。1 材料和方法 实验选用本校动物部提供的雄性Wistar大白鼠,体重180～250g。染毒组一次灌胃给予40.0mg/kg体重的MeHg(西德Merk)。对照组则给予同体积的玉米油。采用TBA DTNB及Ellmen

甲基汞诱发大鼠肾脏脂质过氧化作用的探讨

采用ＴＢＡ及ＤＴＮＢ比色法，测定不同染毒时间和染毒剂量，甲基汞对大鼠肾脏丙二醛（ＭＤＡ）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ—ＰＸ）活性的影响。结果发现染毒组ＭＤＡ含量均显著高于对照组（Ｐ＜０．０２～Ｐ＜０．０１），染毒后２４ｈ处死动物，除５．０ｍｇ／ｋｇ·ｗｔ组ＭＤＡ含量显著低于对照组外（Ｐ＜０．００１），其余各剂量组ＭＤＡ含量均分别高于各自的对照组（Ｐ＜０．０１～Ｐ＜０．０５）。另外，雌性大鼠肾脏ＧＳＨ－Ｐｘ活性于染毒后２４ｈ、７２ｈ显著低于对照组（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０１）。

新孢子虫与弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒的构建及免疫应答分析

为构建新孢子虫和弓形虫AMA1基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,本试验根据新孢子虫和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框,设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因通用引物,构建重组克隆质粒pMD18T-NcAMA1、pMD18T-TgAMA1及重组腺病毒穿梭质粒ADV4-Nc/TgAMA1,将ADV4-Nc/TgAMA1和骨架质粒pacAd5线性化后共转染293T细胞,包装Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒,测定病毒滴度后,收集病毒液接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平。结果显示,Nc/TgAMA1在Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒中获得表达,测定Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒滴度为109 PFU/mL,接种BALB/c小鼠后,Ad5-Nc/TgAMA1接种组IgG抗体水平明显高于pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组和PBS对照组。结果表明,构建的Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。本试验为新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。

以壳多糖为基质网架构建大鼠组织工程皮肤

目的 探索以壳多糖为基质网架构建组织工程皮肤的可能性。方法 将体外传代培养的大鼠表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞 ,分别接种在预先制备的多孔三维壳多糖基质网架的两侧 ,经液 -气界面培养 ,构建出复层人工皮肤。分别用光镜和电镜观测该复层人工皮肤的组织形态及超微结构的动态变化。结果 光镜下可见 ,本实验构建的组织工程皮肤由表皮和真皮构成。随着培养时间的推移 ,表皮逐渐成熟、分化 ,真皮逐渐形成 ,基质网架逐渐降解、被吸收 ,并由真皮细胞所分泌的细胞外基质所取代。结论 以壳多糖为基质网架构建的组织工程皮肤 。

人毛囊间充质干细胞临床应用的研究进展

人毛囊间充质干细胞(hHF-MSCs)不仅具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞特性,同时具有来源丰富、获取方便和无伦理问题等优势,因此得到越来越多国内外学者的关注,已经成为再生医学研究和应用中重要的自体干细胞来源。本文从hHF-MSCs用于制备诱导性多能干细胞(IPS)、应用于组织工程学以及作为基因治疗的载体细胞等方面对目前国内外关于hHF-MSCs的研究进展及所取得的成果进行综述,并展望其在临床方面良好的应用前景。

犬细小病毒YBYJ株体外诱导MDCK宿主细胞凋亡的研究

为研究犬细小病毒(CPV)在体外能否诱导MDCK宿主细胞凋亡,本研究应用前期分离到的CPV YBYJ强毒株接种MDCK细胞,通过倒置显微镜观察CPV导致MDCK宿主细胞病变(CPE)情况,采用细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒和Caspase-3活性检测试剂盒检测,观察CPV诱导MDCK宿主细胞凋亡情况。结果显示,CPV YBYJ强毒株可导致MDCK宿主细胞产生明显CPE,并出现明显的DNA Ladder,Annexin V-FITC/PI双染为阳性,Caspase-3活性显著升高,提示CPV在体外能够诱导MDCK宿主细胞凋亡。

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定马刚１，２陈世义２刘晋宇１敖艳霞＊张林２（１应用基础医学研究所２第一临床学院皮肤科）关键词Ｄｉｓｐａｓｅ角朊细胞免疫组织化学中图号Ｒ３２９．３４表皮角朊细胞培养技术正越来越广泛地应用于医学领域的科研工作中〔１〕。我们已开...

慢性甲基汞染毒小鼠睾丸超微结构的改变

雄性昆明小鼠甲基汞经口染毒３个月，透射电镜观察小鼠睾丸各级生精细胞及精子超微结构的改变。结果表明，甲基汞染毒各剂量组均有不同程度的生精细胞和精子超微结构改变。精原细胞和精母细胞表现为细胞退行性改变，细胞空泡化，核膜溶解，线粒体肿胀，出现大脂滴、异常颗粒及细胞碎片。精子细胞以空泡化和顶体改变为主，顶体非对称发育，膨出肿胀并伴有表面膜及线粒体鞘破坏。部分细胞紧密连接破坏。能谱分析未见甲基汞沉积颗粒。

人皮肤真皮组织中角朊干细胞样细胞的分离与培养

背景:皮肤真皮组织是皮肤损伤修复时除表皮基底层以外可形成表皮层结构的重要干细胞来源。目的:探索从人皮肤真皮组织中分离培养角朊干细胞样细胞的新方法。方法:将一定大小的成人腹部全层皮肤组织用Dispase过夜消化后去除表皮层结构,然后用0.1%Ⅰ型胶原酶过夜消化,离心分离以获取真皮来源总细胞。将分离的细胞用含有体积分数1%N2,2%B27,20μg/L表皮生长因子和40μg/L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12(1:1)无血清培养液悬浮后以低密度接种于培养皿进行培养。采用RT-PCR和免疫细胞荧光染色法对其进行分析。结果与结论:RT-PCR分析结果显示所分离的真皮细胞中含有表达Lgr5和Lirg1等特异基因的毛囊来源干细胞;免疫细胞荧光分析结果显示其表达细胞角蛋白8和细胞角蛋白14。在无血清条件下培养6d时,可观察到表达细胞角蛋白14和整合素α6的"铺路石"样细胞克隆。进行传代培养后P1细胞表达角朊干细胞标志物CD29、细胞角蛋白14和P63。传代培养至P3,4时大部分细胞分化,不能继续传代。结果证实,以无血清培养液结合低密度培养法可直接从人真皮组织中有效地培养增殖活跃、细胞角蛋白14和P63阳性的角朊干细胞样细胞。

甲基汞对小鼠精原细胞SCE的影响

本文采用雄性昆明小鼠甲基汞亚急性染毒,针剂型活性炭作为Brdu载体,在活体条件下,研究不同剂量水平甲基汞对小鼠精原细胞SCE的影响。实验结果发现:甲基汞使小鼠精原细胞SCE频率增高,诱发SCE弱阳性反应。染毒各剂量组与阴性对照组相比SCE频率具有高度显著性差异(P<0.001),随着染毒剂量加大SCE频率也增高,在本实验剂量范围内二者呈明显的正相关关系(r=0.96,p<0.01)。

东北农村地区儿童伤害现况调查

及时了解中国东北农村地区儿童伤害情况并分析其危险因素,对预防和减少儿童伤害的发生具有重要意义。在我国东北部农村,伤害仍然是儿童健康受损的主要危险因素。但是不同地区儿童伤害情况仍存在较大差异,健康教育仍然是预防儿童伤害的有效和必须坚持的措施。

吉林省牛新孢子虫病流行病学调查

新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neospora caninum）寄生于犬、牛、羊等多种动物细胞内而引起的一种原虫病。该病对牛的危害最为严重,能够感染各种奶牛、肉牛和黄牛,主要引起孕畜流产或死胎以及新生儿运动神经障碍等,从而造成经济价值降低和淘汰率升高。

表达鹅γ干扰素重组禽痘病毒的构建及其抗病毒活性的初步研究

为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF),使其与禽痘病毒基因组进行同源重组,经过9轮筛选和纯化并进行PCR和间接免疫荧光检测,获得能稳定表达外源基因的重组病毒r FPV-IFNγ-LacZ。利用细胞病变抑制法检测抗病毒活性结果显示,在鸡胚成纤维细胞中重组禽痘病毒表达的IFN-γ对鹅细小病毒的复制具有显著抑制作用。本研究为制备共表达保护性抗原和γ干扰素基因的重组基因工程疫苗研究奠定基础。

建筑施工企业协作项目风险管控方法探讨

在建筑市场中,任何项目均有风险,协作项目的风险尤为突出。完善协作项目风险管控体系,规范协作项目风险管控流程,提高风险管控制度执行力,加强对协作项目的有效管理和监督,有利于建筑施工企业多种项目管理模式协调发展,对企业经济规模的扩大和经济效益的提高及稳步健康、持续发展至关重要。

延边白鹅CD4与CD8基因SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立延边白鹅CD4与CD8基因在细胞免疫中的动态变化的检测方法,本研究根据CD4与CD8基因保守区分别设计两对特异性引物,在克隆目的基因的基础上,进行TA克隆和转化,构建的阳性质粒作为标准品,经反应条件优化建立了检测延边白鹅CD4与CD8基因的荧光定量PCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法在质粒标准品稀释倍数为101~108倍(CD4:1.2×10^8拷贝/μL^1.2×10^1拷贝/μL;CD8:1.8×10^8拷贝/μL^1.8×10^1拷贝/μL)范围内具有良好的线性关系,相关系数均为0.999,与其它相关鹅细胞因子基因不发生交叉反应,敏感性均是普通PCR的100倍,组内和组间变异系数均小于2%。初步应用本研究建立的方法检测鹅脾脏淋巴细胞CD4与CD8基因的转录水平,结果显示ConA可诱导目的基因转录水平升高,且显著高于PBS对照组(p<0.05)。本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法为进一步研究鹅细胞免疫水平和CD4、CD8生物学活性奠定了基础。

供暖对兰州大气环境NO、NO_2和NO_X影响的监测分析与研究

通过合理布置采样点,对兰州市2013年和2014年供暖前、供暖期、供暖后大气污染物NO、NO_2和NO_X含量进行监测分析与研究,以便了解供暖期间产生的废气和烟尘中NO、NO_2和NO_X对兰州大气环境的影响。结果表明在兰州市2013年至2014年的供暖期间,NO、NO_2和NO_X的含量变动情况较为明显,NO在供暖后含量最低,供暖前和供暖期含量会因区域不同而各不相同。NO_2在供暖期含量最高且有超标现象,供暖前次之,供暖后最低。NOx含量因区域变化而变化,供暖前或供暖期各有所高。可见,大气污染物NO、NO_2和NO_X仍是影响兰州市环境空气质量的主要因素,供暖可能导致空气中NO_2和NO_X含量升高。上述结果为改善兰州市供暖环境和治理大气污染提供了重要的理论依据。

供暖对兰州市大气PM_(2.5)及其重金属分布规律影响的研究

通过合理布置采样点,对兰州市2013年和2014年供暖前中后大气污染物PM_(2.5)中八种重金属As、Hg、Pb、Cd、Cr、Zn、Ni、Cu含量进行监测,并与PM_(2.5)含量进行对比分析,得出PM_(2.5)中重金属的分布规律、PM_(2.5)与重金属分布规律之间的关系,以便了解供暖期间产生的废气和烟尘对兰州大气环境PM_(2.5)中重金属分布规律的影响。结果表明在兰州市2013年至2014年供暖前中后,大气污染物PM_(2.5)中重金属含量变动情况均较为明显,供暖期铅、镉、铬、汞的污染较大,且城关区污染大于安宁区;供暖前中后PM_(2.5)中权重较大的重金属元素类别有所区别,但三个采样期Zn、Ni都占有较大的权重,As、Hg都占有较小的权重,说明PM_(2.5)受Zn、Ni影响较大,几乎不受As、Hg的影响;PM_(2.5)含量增大或减少时,附着在其上的重金属含量并未随之增大或减少。上述结果为改善兰州市供暖环境和治理大气污染提供一定的理论依据。

供暖对兰州大气PM_(10)与其中重金属分布规律影响的监测分析

通过合理布置采样点,对兰州市2013年和2014年供暖前中后大气污染物PM_(10)中8种重金属As、Hg、Pb、Cd、Cr、Zn、Ni、Cu含量进行监测,并与PM_(10)含量进行对比分析,得出PM_(10)中重金属的分布规律、PM_(10)与重金属分布规律之间的关系,以便了解供暖期间产生的废气和烟尘对兰州大气环境PM_(10)中重金属分布规律的影响。结果表明在兰州市2013-2014年供暖前中后,大气污染物PM_(10)中重金属含量变动情况均较为明显,供暖期铅、镉、铬、铜的污染较大,且城关区Cr和Pb污染大于安宁区;供暖前中后PM_(10)中权重较大的重金属元素类别有所区别,但3个采样期Ni都占有较大的权重,As、Hg都占有较小的权重,说明PM_(10)受Ni影响较大,几乎不受As、Hg的影响;PM_(10)含量增大或减少时,附着在其上的重金属含量并未随之增大或减少。上述结果为改善兰州市供暖环境和治理大气污染提供一定的理论依据。

人的复合人工皮肤组织工程学研究——角朊细胞库的构建

目的 :介绍成人包皮角朊细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定技术。方法 :采用细胞工程技术及免疫组化技术。结果 :采用细胞工程技术至少可将角朊细胞传至 6代以上 ,此时的细胞数至少为原代培养的细胞数的 1万倍 ,经冻存、复苏后 ,此角朊细胞仍既能增殖、又能分化 ,生长状态与原代培养的角朊细胞相类似 ;免疫组化显示 :AE1反应阳性。结论