新发鸽腺病毒A型感染的病理变化

近年来,我国信鸽和肉鸽养殖业发展迅猛,已经成为我国继鸡、鸭、鹅之后的第四大家禽产业。鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAdV)是鸽群中常见的一种病原,国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)将鸽腺病毒分为PiAdV-A和PiAdV-B。2022年1月起,我国新疆、河北、北京等地区的信鸽公棚以及肉鸽养殖场暴发了一种以鸽肝组织弥漫性坏死和突然死亡为特征的新型鸽腺病毒病。该病在肉鸽场传播缓慢,持续时间长,发病种鸽消瘦、突然死亡,病程长达3个月,累计死亡率15%,给养鸽业造成了严重的经济损失。在信鸽公棚,主要是5-6月龄信鸽发病,病程较短,表现为采食量下降,死亡率10%-13%,严重影响信鸽的比赛成绩。经病理剖检、组织病理学、电镜观察和病原核酸检测等方法综合诊断为鸽腺病毒A型感染。

H3N2亚型犬流感病毒实验感染模型的建立

【目的】建立H3N2亚型犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)实验感染模型,了解犬流感的发病特征,为疫苗效力评价奠定基础。【方法】6—13月龄CIV血凝抑制(haemagglutination inhibition,HI)抗体阴性(HI<1﹕10)比格犬26只,其中3只鼻腔喷雾PBS作为阴性对照,另23只分5组(10、103、105、106、107 EID50/只),分别为3、5、5、5、5只/组,每只犬各鼻腔喷雾H3N2亚型CIV(A/canine/China/Huabei-170607/2017(H3N2),简称HB株)病毒液1mL。观察临床症状、肺脏病变和肺脏组织病理学变化,计算肺实变率,检测病毒和HI抗体效价。【结果】10 EID50剂量感染组,3只犬均未出现明显临床症状,肺脏均无明显眼观病变,肺脏实变率0%,无组织病理学变化,病毒检测均为阴性,HI抗体效价几何平均值(geometric mean titer,GMT)为1﹕15.9;103 EID50剂量感染组,5只犬中有4只喘息、流鼻汁和咳嗽,1只犬未表现出临床症状,2只犬肺脏出现轻微实变,实变率平均为1.4%,4只犬病毒分离阳性,HI抗体效价GMT为1﹕320;105 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后5 d开始出现流鼻汁和咳嗽等临床症状,肺脏均有实变,实变率平均为4.2%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2940.7;106 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后4 d体温升高、流鼻汁、咳嗽,临床症状出现较105 EID50剂量感染组早1 d,肺脏实变程度增加,实变率平均为17.9%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2228.7;107 EID50剂量感染组,5只犬在攻毒后3 d表现出体温升高、流鼻汁、咳嗽等严重的临床症状,症状出现较106 EID50剂量感染组早1 d,肺脏严重实变,实变率平均为29.0%,肺泡间隔增宽,病毒分离均为阳性,HI抗体效价GMT为1﹕2940.7;对照犬均未出现明显临床症状,肺脏均无明显眼观病变,无组织病理学变化,病毒检测均为阴性,HI抗体效价均<1﹕10。【结论】106 EID50剂量病毒是能引起犬明显发病的最小病毒接种剂量,建立起H3N2亚型CIV实验感染模型。

加快推进我国水禽疫病防控技术的研究

近年来,我国的水禽产业蓬勃发展,2018年我国肉鸭出栏量约35亿只,肉鹅超过5亿只,鸭蛋400万吨,总产值超过1500亿元。根据世界粮农组织的数据推算,2018年我国鸭养殖量占全球的74.3%,鹅养殖量占全球的93.3%,是世界上肉鸭和鹅出栏最多的国家[1]。水禽产业已经成为我国畜牧业和农业经济的重要组成部分,是农民增收的重要来源之一。

加强水禽传染病的防控技术研究和技术储备

中国是世界水禽生产和消费大国,20世纪80年代以来,水禽产业发展速度较快,饲养量平均每年以5%—8%的速度递增,产肉量、产蛋量和产绒量均居世界第一,是中国畜牧业的重要组成部分及农民增收的重要经济来源之一。截止2014年,中国鸭、鹅存栏量分别为6.56亿只和2.73亿只,分别占世界鸭、

鸭坦布苏病毒的流行现状和防疫用品的研究

一、概述 2011-2016年均发现了鸭坦布苏病毒在我国流行,是一种地方流行性疾病.在马来西亚报道过发病,泰国和越南等国也有发病.该病毒最早是1968年,Tembusu病毒首次在Sarawak地区的蚊子体内分离到;1982年和1992年在泰国北部地区蚊子体内分离到;1995年,我国研究人员从石家庄地区发病的康贝尔鸭肝和脾组织中分离到似乎属于黄病毒科的病毒.

鸭出血性卵巢炎的初步研究

2010年6月以来,我国部分地区所饲养的种鸭和蛋鸭发生一种疾病,以突发产蛋急剧下降为特点,根据病变,暂将该病称为鸭出血性卵巢炎（duck hemorrhagic ovaritis,DHO）。从不同地区的发病鸭群采集34份样品,取15份样品进行病毒分离,获得10个鸡胚分离物和5个鸭胚分离物。RT-PCR检测结果表明,15个分离物均为禽流感阴性,14个分离物为新城疫阴性。选分离株YY5株进行了电镜观察和PCR排查,结果表明,该毒株的毒粒直径为40~50 nm,呈鸭瘟病毒、水禽细小病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭甲肝病毒、鸭星状病毒、鸭圆环病毒、鸭冠状病毒、鸡传染性支气管炎病毒PCR阴性,但为黄病毒RT-PCR阳性。基于黄病毒NS1序列合成引物,用RT-PCR检测15株病毒分离物和其余19份临床样品,黄病毒阳性率为82.4%。用YY5株的221-nt NS1序列进行分析的结果显示,YY5株与黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群（Ntaya virus group）的巴格扎病毒（Bagaza virus）具有相近的遗传进化关系,但遗传距离介于病毒种的水平。用一株鸭胚分离株感染91日龄临近开产的麻鸭和232日龄的产蛋麻鸭,可复制出卵泡膜出血的病变。结果表明,从DHO自然病例分离到一种新的黄病毒,暂称为鸭黄病毒（duck flavivirus,DFV）,DFV可能与DHO有关。

鸭出血性卵巢炎实验感染模型的建立

【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21、28、34 d采血和剖检鸭,应用固定病毒稀释血清的方法测定血清中和抗体,取卵泡膜、肝脏、脾脏和脑组织进行病毒分离,对主要组织脏器进行病理学检查。【结果】攻毒后3、4、5d采食量均显著下降(下降80%),6d采食量恢复至约正常量的50%,11d恢复到正常水平;攻毒后3、4、5d产蛋量出现明显下降,6、7、8d鸭群未见产蛋,36d发病鸭群的产蛋率恢复到60%,39d鸭群的产蛋率达到80%。攻毒后5d 3只(3/3)鸭的卵泡膜和肝脏均可以分离到病毒,7d 2只(2/2)鸭的卵泡膜中均分离到病毒,1只鸭(1/2)脾脏和脑组织中均分离到病毒,9d 1只鸭(1/2)的卵泡膜中分离到病毒,21d和28d卵泡膜病毒分离结果均为阴性。感染鸭的卵巢变性、变形,卵泡膜充血、出血;卵巢、肝脏、脑、脾等组织和脏器均出现以网状细胞(巨噬细胞)增生为主的病理变化,表现为急性出血性卵巢炎、间质性肝炎、非化脓性脑炎、坏死性脾炎、间质性肾炎和轻度的心肌炎。感染后3周可检测出低效价的中和抗体。【结论】实验感染鸭出血性卵巢炎病毒后可引起急性出血性卵巢炎,利用产蛋北京鸭建立的鸭出血性卵巢炎模型,可用于评价抗病毒药物和疫苗的研究。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在自然病例组织中的定位(英文)

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起，以怀孕母猪发生流产、早产和死胎等严重的繁殖障碍及仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病为主要症状的传染病，是一种免疫抑制性疾病。猪感染PRRSV后的组织学病理变化主要集中在肺脏和淋巴结等器官；急性PRRS表现为败血症，全身性巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生，间质性肺炎，

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究

用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无任何副作用;免疫10-14 d后产生免疫力;ND部分效检,攻毒100％保护,每羽份含ND效价达50-123 PD50;IB部分效检,免疫21-28 d后攻毒保护率达80％-100％,IB HI效价≥1:64;EDS76效检,免疫后21 d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80％-100％。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析(英文)

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单股正链RNA病毒。其基因组长约15kb，含有8个开放的阅读框架（ORFs）。PRRSV基因组的顺序依次为：5’-ORFla-ORFlb-ORF（2—6）．ORFT-3’。鲁韦韦等分析表明，PRRSV的ORF7基因保守性较好，变异较小。此外，ORF7编码的核衣壳蛋白（N蛋白）具有良好的免疫原性及反应原性，机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的。因此，N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。

新城疫疫苗对近年流行毒株的保护作用

[目的]了解现有新城疫疫苗对近年流行新城疫病毒(NDV)毒株的保护效果,从而为新城疫疫苗的合理应用和新城疫的防制提供指导。[方法]用1个或0.01个使用剂量的鸡新城疫弱毒活疫苗A、B、C、D、E经滴鼻、点眼、口服途径分别免疫6周龄SPF鸡。免疫14 d后,测定血清中HI抗体效价,同时分别用NDVF48E9标准强毒株和野外分离强毒株NDV-2007-HB、NDV-2008-YB攻毒。连续观察攻毒鸡的表现并统计发病和死亡情况。[结果]5种疫苗免疫14 d后,均可诱导鸡只产生保护水平的抗体。1个剂量或0.01个剂量的现有疫苗对NDVF48E9株的攻毒保护率均为100%,对NDV-2007-HB的攻毒保护率均大于90%;0.01个剂量的疫苗A、B、C可提供对NDV-2008-YB的攻毒保护率均大于90%。[结论]实验室条件下,现有新城疫疫苗对分离到的2株NDV毒株具有较好的保护效果,能预防鸡新城疫的发生。

4株鸭坦布苏病毒的毒力、E基因序列和抗原差异性

【目的】比较鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)分离株的毒力、分析E蛋白基因序列、研究抗原差异性,为鸭坦布苏病防控提供依据。【方法】将DTMUV-HB(2011)、DTMUV-AH(2014)、DTMUV-GX1(2012)、DTMUV-GX2(2015)4株病毒接种10日龄易感鸭胚进行增殖,并利用6日龄SPF鸡胚测定ELD50。根据测定的病毒含量,将分离毒株稀释为100ELD50/0.5m L,人工感染40只180日龄健康北京鸭,进行临床症状观察、病毒分离、大体剖检,分析分离毒株的毒力有无差异。提取8株DTMUV分离病毒株的RNA,通过RT-PCR扩增E基因,分析比较不同地区的DTMUV的E基因核苷酸和氨基酸序列相似性,构建进化树。利用实验室建立的鸭坦布苏病毒血凝抑制试验分别测定4株病毒阳性血清对4株病毒的HI效价。同时采用固定病毒稀释血清法,利用C6/36细胞测定4株病毒阳性血清对4株DTMUV的血清中和效价。通过交叉血凝抑制试验和血清交叉中和试验比较4株病毒的抗原差异性(R值)。【结果】(1)各毒株的病毒含量范围在10^4.7-10^5.3 ELD50/0.1m L。人工感染鸭试验,攻毒后3 d鸭采食量和产蛋量均显著下降,各组病毒分离阳性率均在85%以上,剖检病变主要表现为卵泡变形、出血。(2)分离株序列分析结果表明,核苷酸序列相似性为95.7%-100%,推导氨基酸序列相似性在98.2%以上。遗传进化分析表明共同构成了一个进化分支。(3)4株病毒及其阳性血清进行血凝抑制交叉试验,计算的抗原性差异R值在0.79-1.12之间;进行细胞中和交叉试验,计算的R值在0.79-1.20之间。【结论】分离的4株DTMUV在毒力、E蛋白基因和抗原性上未见显著差异。

禽用疫苗病毒浓缩技术的研究

采用FILTRON中型盒式超滤系统，分别选用截留分子量为30，50，100及300K4种不同孔径的超滤膜，对NDV，AIV，EDS76V，IBV及IBDV共5种病毒抗原液进行了浓缩试验研究。结果显示，这4种孔径的超滤膜均可用于上述5种病毒液的浓缩，其病毒的截留率可达99．9％～100％；采用各种病毒浓缩液、未浓缩病毒液及超滤液制成各种相应浓缩苗、未浓缩苗及超滤液乳剂免疫试验鸡。试验证明，浓缩苗明显优于未浓缩苗，在病毒浓缩过程中均未出现有效抗原成分的丢失，其抗原性也未发生变化。

鸡、鸽、虎呼吸道和消化道黏膜上皮细胞表面流感病毒受体类型的检测

【目的】检测鸡、鸽和虎体内的流感病毒受体的类型和分布,以期解释3种动物对禽流感病毒易感性差异的机制。【方法】使用地高辛标记的外源性凝集素染色方法检测这些动物的喉头、气管、肺脏和肠道(直肠)的上皮细胞表面SAα2,6Gal和SAα2,3Gal连接键的类型。【结果】SPF鸡的上呼吸道黏膜上皮细胞表面有大量的SAα2,3Gal和少量的SAα2,6Gal;肺房上皮细胞表面只有SAα2,3Gal;而直肠黏膜上皮中SAα2,6Gal和SAα2,3Gal都没有表达。成年鸽的上呼吸道黏膜上皮细胞表面只有SAα2,6Gal,而没有SAα2,3Gal;而下呼吸道中SAα2,6Gal和SAα2,3Gal都没有;直肠黏膜上皮细胞只有SAα2,3Gal。虎的呼吸道和消化道(直肠)黏膜上皮细胞表面有大量的SAα2,6Gal和SAα2,3Gal。【结论】鸡和虎具有禽流感病毒受体,对禽流感病毒易感,鸽不具备禽流感病毒受体,因此,鸽对禽流感病毒不易感。

2010—2012年中国部分地区鸡传染性支气管炎流行病学调查

鸡传染性支气管炎(IB)已经成为严重影响中国养禽业正常发展的传染性疾病,为了解中国主要养殖区域鸡传染性支气管炎流行情况,瑞普生物诊断研究服务中心在2010—2012年间从全国采集的3 132份发病鸡群肺和气管样本,利用RT-PCR及基因测序方法鉴定出410份IBV阳性样品,通过从时间、地域、发病特征、种群类型等方面进行了统计研究。结果发现:1)3年间IBV总检出率为13.1%,其中26.7%的IBV阳性样品为多重病原感染,以AIV-H9+IBV和NDV+IBV居多;2)白羽肉鸡的IBV检出率最高,为13.6%;3)IBV发病有较明显的季节性,从当年的11月份到次年的5月份,是IB的高发时段;4)IBV对感染鸡群造成的临床症状以肾大和呼吸道症状为主,其次是产蛋下降和腺胃炎;5)白羽肉鸡3~5周IBV检出率最高,商品蛋鸡IBV检出高峰有两个时段为3~5周及25~30周。通过本次全国范围的IBV流行病学调查,为我国有效防控传染性气管炎提供了科学依据,对制定防控鸡传染性支气管炎有效策略具有重要意义。

某规模化猪场猪伪狂犬病的诊断

试验采用流行病学调查、临床观察和实验室检查对华北地区某疑似伪狂犬病发病猪场进行了诊断。猪场发病情况主要为母猪流产,新生仔猪死亡率较高,肥猪死亡率低。发病或死亡仔猪扁桃体充血出血、溃疡,肺脏出血、水肿,心肌色淡、心包积液,脑膜充血;表现为坏死性扁桃体炎、出血性淋巴结炎、出血性间质性肺炎、间质性心肌炎和非化脓性脑炎。发病猪扁桃体、肺脏、脑组织匀浆上清液接种家兔后出现奇痒等典型症状并很快死亡。发病猪脑组织可检出猪伪狂犬病毒gD基因特异性目的片段。猪场伪狂犬病野毒感染抗体阳性率为63%(63/100)。本试验结果表明,确诊该猪场发生了伪狂犬病。

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗血清学试验与免疫攻毒保护试验的相关性

【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗2种效力评价方法平行关系,为采用血清学检验技术替代鸭坦布苏病毒病灭活疫苗本动物攻毒效力检验奠定基础。【方法】3批疫苗实验室制品分别以0.15、0.3、0.5、1.0 mL经肌肉注射途径免疫51日龄青年鸭和260日龄产蛋鸭,首次免疫后14 d,按相同的剂量和途径进行二次免疫。二免后28日采血,分离血清并测定血清的HI抗体效价,根据抗体效价对试验鸭分组,并分别经肌肉注射途径接种0.5 mL(100 DID50)的鸭坦布苏病毒。攻毒后2 d采血,分离病毒,产蛋鸭攻毒后8 d剖检,观察卵巢病变。比较和分析HI抗体效价和攻毒保护结果的相关性。【结果】免疫青年鸭HI抗体效价≤1﹕5、1﹕10、1﹕20、1﹕40、1﹕80、1﹕160、1﹕320、1﹕640组保护率分别为50%(20/40)、43.8%(7/16)、74.3%(26/35)、86.7%(26/30)、96.6%(57/59)、92.7%(51/55)、95%(38/40)和100%(11/11),HI抗体效价低于1﹕20时攻毒保护率为48.2%,效价1﹕20时攻毒保护率为74.3%,效价1﹕40及以上时攻毒保护率达93.8%。免疫产蛋鸭HI抗体效价≤1﹕5、1﹕20、1﹕40和1﹕80组保护率分别为66.7%(12/18)、83.3%(10/12)、95.2%(20/21)和100%(15/15);HI抗体效价1﹕10、1﹕160、1﹕320和1﹕640组保护比例分别为2/3、7/7、1/1和2/2;HI抗体效价为1﹕10及以下时攻毒保护率为66.7%,效价1﹕20时攻毒保护率为83.3%,效价1﹕40及以上时攻毒保护率达97.8%。青年鸭和产蛋鸭的HI抗体效价与攻毒保护率之间均有极显著的正相关性,Spearman相关系数分别为0.905(P<0.01)和0.932(P<0.01)。【结论】鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫后HI抗体与攻毒保护率存在正相关,可替代免疫攻毒法用于鸭坦布苏病毒病灭活疫苗的效力评价,初步将HI抗体效价1﹕20定为鸭坦布苏病毒病灭活疫苗免疫后产生抗体保护的标准。