不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒性最弱。在总体积分数一定的情况下,PG、MeOH与DMSO体积比为9∶6∶5的混合抗冻剂对牙鲆尾芽期胚胎毒性最低;各发育期胚胎经过玻璃化液平衡后,尾芽期以前胚胎的成活率随胚胎发育期逐渐升高,心跳期以后逐渐降低,尾芽期和心跳期成活率最高。含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温时间最短为15.09 s,解冻时间最短为6.22 s;而不含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温和解冻时间分别为(13.83±1.86)s和(7.20±0.90)s。将PG、MeOH与DMSO按体积比9∶6∶5配成总体积分数为35%的混合溶液,再添加5%的蔗糖配制成玻璃化液,采用此玻璃化颗粒冷冻方法对173粒牙鲆尾芽期至心跳期胚胎进行超低温冷冻保存,解冻后共获得4粒成活胚胎。

养殖日本无针乌贼角质颚形态研究

通过测定不同生长阶段的养殖日本无针乌贼的体质量、胴长及角质颚形态等相关参数,对日本无针乌贼的体质量与胴长、体质量与角质颚相关参数以及胴长与角质颚相关参数的相关关系进行了分析。结果表明,测量样本的上、下颚存在较大差异,从绝对长度上看,上颚的喙长(RL)、头盖长(HL)及脊突长(CL)较下颚长,翼长(WL)较下颚短;从相对长度上看,上颚RL相对较短,长度仅为HL和CL的22.00%和15.76%,下颚的RL则为HL和CL的39.34%和20.23%,上颚的WL相对较短,仅为翼宽(WW)的142.49%,下颚的WL则为WW的240.66%;上、下颚各参数的比值中,RL/CL、HL/CL比较稳定,可作为日本无针乌贼与其它种类的种间差异性指标;日本无针乌贼的体质量与胴长存在极显著的指数相关关系(P<0.01),体质量与角质颚相关参数存在极显著的指数相关关系(P<0.01),胴长与角质颚相关参数存在极显著的线性相关关系(P<0.01)。

基于价值链管理的煤炭企业战略联盟分析

战略联盟作为企业组织关系的制度创新,已成为现代企业强化竞争优势的重要手段。面对经济全球化迅速发展和国际竞争日益加剧的环境,煤炭企业也应积极地建立企业战略联盟,通过彼此间的合作,发挥竞争优势。本文在对价值链管理、煤炭企业价值链分析的基础上,提出了煤炭企业战略联盟的基本形式,并对如何加强煤炭企业战略联盟管理提出了一些建议性对策。

条石鲷大棚温室越冬试验

为研究条石鲷(Oplegnathus fasciatus Temminck et Schlegel)的越冬技术,在室外地埋式水泥池进行了一龄、二龄条石鲷的越冬试验。结果表明,采用双层中空PC阳光板保温,越冬期间越冬池的水温可维持在10℃以上;条石鲷的越冬成活率在90%以上,最高达99.7%;条石鲷的平均体质量有所增加,平均增重率最高14.28%,最低6.09%。通过试验还发现,条石鲷的日平均摄食率与日平均水温存在相关关系,日平均摄食率随日平均水温的上升而提高。

企业战略联盟失败原因及对策分析

战略联盟作为企业组织制度最重要的制度创新,已成为现代企业提升国际竞争力,参与全球竞争的重要方式之一,但在实践中战略联盟的失败率却较高。本文在对战略联盟含义、特征等分析的基础上,深入分析了导致战略联盟失败的主要原因,并针对性地提出了如何避免战略联盟失败的几点对策。

牙鲆抗病群体和家系的建立及其生长和抗病性能初步测定

通过自然选择和人工感染途径筛选出抗鳗弧菌病牙鲆鱼种，将其培育成亲鱼94尾，建立了牙鲆抗病群体；从日本引进了牙鲆日本群体；以上述2个群体以及黄海中捕捞的黄海群体为基础群体，通过不同组合的交配，建立了63个牙鲆家系，其中半同胞家系54个，全同胞家系9个。生长比较实验表明这63个家系的生长速度存在着明显差异，从中筛选出生长快速的家系4个（家系36，42，43和57），生长较快的家系9个（家系27、28、35、39、41、51、60、65和76），生长慢的家系1个（75号家系）。通过对59个家系的抗病能力测定表明，不同家系在抗鳗弧菌感染的能力上存在着明显差别，从中鉴定出抗病力强的家系3个（家系50，61和68号），其在鳗弧菌感染后的成活率高达60％以上；抗病力比较强的家系17个，其成活率为39％～60％；抗病力一般的家系33个，其成活率为17％～39％之间；抗病力差的家系6个，其成活率在17％以下。这些牙鲆家系的建立为牙鲆抗病、高产新品种的培育奠定了重要基础。

半滑舌鳎的性腺分化和温度对性别决定的影响

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2～3倍。由于温度可影响多种鱼类的性腺分化,因而探索温度对该鱼的性别决定和性腺分化的影响,获得性逆转雄性亲本,用于培育全雌后代,具有重要的应用前景和经济效益。通过石蜡组织切片,对半滑舌鳎早期性腺分化进行组织学观察。发现在24℃饲养条件下,孵化后30 d半滑舌鳎性腺开始分化,其中具有裂隙的性腺原基未来发育为卵巢,而不具裂隙的原基未来发育为精巢。在孵化后25～100 d对半滑舌鳎进行不同温度(16℃、20℃、24℃、28℃、32℃)处理,在9月龄时利用石蜡组织切片鉴定表型性别,观察温度对性腺分化的影响,结果表明,28℃和32℃高温能显著提高群体中的雄性比例,使其分别达到69.2%和66.7%;而低温16℃和20℃对性腺分化影响不大,群体中雄性比例分别为56.5%和57.1%;24℃处理群体中雌雄个体比例接近1∶1。半滑舌鳎雌性特异的遗传性别鉴定技术也检测到高温和低温处理组出现了由基因型雌性向表型雄性逆转的雄性个体。这些结果表明温度影响了半滑舌鳎性腺分化方向。

基于人工鱼群算法的BP神经网络速度辨识器

为实现无速度传感器直接转矩控制,有时采用神经网络转速辨识器,但前馈神经网络结构难以确定,运用BP算法时又极易陷入局部解。将改进人工鱼群算法与BP算法相结合的IAFSA+BP算法,实现了人工鱼群算法的全局搜索能力与BP算法的局部寻优性能的互补结合。将所设计的神经网络转速辨识器运用到直接转矩控制系统当中,利用MATLAB/SIMULINK进行无速度传感器控制系统的建模仿真实验结果表明,该算法具有良好辨识效果。

半滑舌鳎脑芳香化酶基因cDNA克隆及表达分析

为研究脑型芳香化酶(P450aromB)在半滑舌鳎性别分化中的作用,采用同源克隆策略,从半滑舌鳎脑分离了2184bp长的脑型芳香化酶的全长cDNA,该基因编码498个氨基酸。氨基酸序列和系统发育分析表明,P450aromB属于脑型P450arom,P450aromB的氨基酸序列与其他鱼类脑型P450arom的同源性较高(48.3%-66.1%),与性腺型P450arom的同源性较低(34.2%-49.9%),与自身的性腺型芳香化酶同源性为45.1%。RT-PCR分析表明:P450aromB mRNA的表达具有明显组织特异性,P450aromB只在性腺、脑、鳃和皮肤中表达,且脑中表达量远高于性腺,而在雌雄鱼的其他组织中都不表达。经过甲基睾酮浸浴处理和高温诱导半滑舌鳎由雌性性反转为雄性后,脑中P450aromB的表达量降低,这些结果表明P450aromB参与了半滑舌鳎的性腺分化和性别决定过程。

4种常用药物对松江鲈鱼急性毒性试验

在水温15～17℃、盐度3.0%～3.2%的条件下,采用甲醛、敌百虫、高锰酸钾和硫酸铜与硫酸亚铁合剂4种药物对体长9～11 cm、平均体重15.2 g的松江鲈鱼进行毒性试验。结果表明,4种药物对松江鲈鱼的安全浓度分别为99.34、0.60、0.78、1.93 mg/L。以安全浓度为衡量标准,4种药物对松江鲈鱼的毒性大小依次为:敌百虫>高锰酸钾>硫酸铜与硫酸亚铁合剂>甲醛。建议采用甲醛进行松江鲈鱼疾病防治,慎用硫酸铜与硫酸亚铁合剂,不宜采用敌百虫和高锰酸钾。

大西洋牙鲆冷冻精子×褐牙鲆卵杂交胚胎的发育及胚后发育

利用大西洋牙鲆冷冻精子与褐牙鲆卵授精，培育出了生长健康的杂交鱼苗。并对杂交后代的胚胎发育、胚后发育和不同温度下的生长特征进行了研究。利用OLIMPUS显微镜连续观察和描述了冷冻精子受精杂交胚胎的发育，在水温15～17．1℃，其受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、胚孔封闭、肌节胚、尾芽胚、心跳胚、出膜胚等时期的发育，经历65h57min完成胚胎发育进入胚后发育，发现胚胎搐动15min后心脏开始跳动。利用OLIMPUS解剖镜每天观察和记录一次鱼苗的生长形态，并测定其体全长；将杂交鱼苗的胚后发育划分为卵黄囊吸收期（出膜后1-6d）、变态前期（出膜后7～25d）、变态期（出膜后25～30d）和变态后生长期（出膜30d以后）4个时期。对16～17℃、18～19℃、20℃和22～23℃4个温度环境下胚胎发育的研究结果显示，杂交胚胎宜于在16～20℃的水温下发育，鱼苗在22～23℃孵化出膜后2～3d大量死亡。对18—19℃、20℃、22℃和24℃4个温度下稚鱼的生长研究结果显示，变态期稚鱼在22—24℃水温下饲养时变态和生长速度较18-20℃快。

鲈鱼冷冻精子诱导半滑舌鳎胚胎发育

半滑舌鳎是分布在我国黄、渤海的特有鱼类，雌鱼明显具有较雄鱼生长快的特点，利用雌核发育方法诱导产生半滑舌鳎超雌鱼，通过与正常雄鱼交配，最终可培育生长速度快、个体大的全雌性后代，对于提高养殖效益具有重要的意义。为此利用冷冻保存的异源鲈鱼精子诱导半滑舌鳎卵产生雌核发育二倍体、单倍体、杂交胚胎，利用同源精子受精产生普通二倍体，在Olympus显微镜下对它们的胚胎发育进行了观察比较。冷冻解冻的鲈鱼精子，在1000μj／cm^2紫外线下照射0．2～1min，诱导半滑舌鳎卵受精，在受精后2～5min将卵置于2～5℃的水浴冷休克20min，获得了雌核发育的胚胎和鱼苗，在21．7～23．6℃水温中，雌核发育胚胎经过2781min孵化出膜。普通胚胎在21．7～23．6℃水温下，经2621min孵化出膜。经紫外线灭活处理的鲈鱼精子诱导半滑舌鳎卵，但不经过冷休克获得的单倍体胚胎，具有明显的单倍体综合症，发育至1949min陆续死亡。鲈鱼精子与半滑舌鳎卵杂交受精，胚胎不能正常发育，相当于胚孔封闭期后全部死亡。实验证明，鲈鱼冷冻精子可刺激半滑舌鳎卵雌核发育。

半滑舌鳎FTZ-F1 cDNA克隆及表达分析(英文)

为研究性别相关基因FTZ-F1在半滑舌鳎鱼中的表达特征,采用同源克隆策略,从其精巢分离了3143bp长的半滑舌鳎FTZ-F1(hsFTZ-F1)的全长cDNA,该序列包含1458bp开放阅读框,66bp长的5'末端非编码区(UTR),1619bp长的3'末端UTR。mRNA的组织分布、氨基酸序列和系统发生分析表明:hsFTZ-F1属于SF-1/Ad4BP类群。RT-PCR分析表明:hsFTZ-F1mRNA的分布广泛,几乎在所有组织都有表达,但在性腺、肾脏、脑和头肾组织中表达最强,其他组织表达较弱,雌鱼脑和头肾中的表达量明显高于雄性。胚胎发育过程中表达量都高于孵化后仔鱼的表达量,表明hsFTZ-F1可能参与了半滑舌鳎的器官形成过程。

溶氧水平对日本对虾耗氧能力与生理行为的影响

研究了在海水养殖的环境条件下日本对虾的瞬时耗氧速率与时间、体重及溶氧水平的关系,测定了5种体重日本对虾的瞬时耗氧速率。结果表明:在盐度为3%、水温25℃的环境下,日本对虾的瞬时耗氧速率随时间和水中溶解氧含量的降低而降低,随体重的增加而降低,呼吸类型属于顺应型。随着水中溶解氧含量和虾体瞬时耗氧速率的降低,日本对虾的运动能力逐渐减弱,当溶解氧<3 mg/L时,应注意及时充氧,以免造成虾体不适。

敌百虫和硫酸铜与硫酸亚铁合剂对星斑川鲽的急性毒性

[目的]探讨敌百虫和硫酸铜与硫酸亚铁合剂2种防治药物对星斑川鲽(Platichthys stellatus)的安全用量范围。[方法]在水温15～17℃、盐度3.0%～3.2%的条件下,分别测定了敌百虫、硫酸铜与硫酸亚铁合剂对体长18～21 cm、平均体重194.1 g的星斑川鲽的急性毒性。[结果]敌百虫对星斑川鲽24、48 h的LC50分别为3.63和3.31 mg/L,安全浓度为0.83 mg/L;硫酸铜与硫酸亚铁合剂对星斑川鲽24、48 h的LC50分别为9.55和6.92 mg/L,安全浓度为1.09 mg/L。根据安全浓度判断,星斑川鲽对2种药物的敏感性为:敌百虫>硫酸铜与硫酸亚铁合剂。[结论]在星斑川鲽疾病防治过程中应慎用或者降低浓度使用敌百虫或硫酸铜与硫酸亚铁合剂。

牙鲆胚胎程序化冷冻保存研究

以牙鲆胚胎为材料，对胚胎程序化冷冻保存的主要环节进行了探讨，以优化牙鲆胚胎的程序化超低温冷冻保存法。单一抗冻荆的毒性试验表明甲醇（Methanol）、1，2-丙二醇（PG）的毒性低于其他抗冻剂的毒性。混合抗冻剂的毒性试验表明，20％～25％PM抗冻剂的毒性很低，经其平衡处理的胚胎，冷冻至-30℃，成活率可达80％以上。植冰前采用2℃／min的降温速率，从植冰后到入液氮前温度采用8℃／min的降温速率效果较好。入液氮前温度的筛选实验表明，入液氮前的温度以-45℃较好。利用20％PM和22％PMP，采取优化的降温程序冷冻保存尾芽期的牙鲆胚胎，分别获得5枚和7枚复活胚胎，并全部孵化出膜。

直接转矩控制中获得任意电压矢量的新方法

针对在SVM-DTC系统中获得任意电压空间矢量难的问题,提出一种基于改进遗传算法优化的模糊神经网络的方法,以转矩误差、磁链误差为输入量,结合磁链角获得期望的任意电压空间矢量。仿真结果表明该方案能有效减小磁链和转矩脉动,改善系统的性能。

多晶硅纳米薄膜牺牲层压力敏感结构设计

为使多晶硅纳米薄膜良好的压阻特性在MEMS（微机电系统）压阻传感器中得到有效应用，在设计牺牲层结构压力传感器芯片中探索性地采用了多晶硅纳米薄膜作为应变电阻，并给出这种传感器的设计方法。分析了牺牲层结构弹性膜片的应力分布对传感器灵敏度的影响，优化设计了量程为0—0．2MPa多晶硅纳米膜压力传感器芯片的结构参数。有限元法仿真结果表明：在保证传感器灵敏度大于50mV／（MPa·V）的前提下，零点温漂系数可小于1×10^-3FS／℃；灵敏度温漂（无电路补偿）可小于1×10^-1FS／℃．为高灵敏、低温漂、低成本的高温压力传感器集成化发展提供了一条可行途径。

饥饿对菊黄东方鲀仔、稚鱼摄食和生长的影响

研究了饥饿胁迫下菊黄东方鲀仔、稚鱼期鱼苗摄食、生长和外部形态的变化规律,以期为菊黄东方鲀苗种培育过程中的营养调节和科学管理提供理论依据和技术资料。结果表明,水温22.0±1.0℃时,投饲组菊黄东方鲀鱼苗在孵化后第3 d开始摄食,初次摄食比率为40%,第5 d初次摄食率达到100%。饥饿组鱼苗抵达饥饿不可逆点(PNR)的时间为12.9 d,50%累计死亡率出现时间为13.2 d,两者时间间隔较短,表明第12～13 d为菊黄东方鲀早期发育中较为敏感的阶段。试验期间,饥饿鱼苗的全长、体长、肛前长、体高等指标在第7 d后显著低于对照组(p<0.05),多项生长指标出现负增长,其中体高负增长最为明显,为-0.0144/d,全长负增长则最不明显。试验结果显示,饥饿对鱼苗的生长发育起延迟作用,混合营养期延迟投饲,鱼苗的生长发育水平明显低于正常摄食的鱼苗。

4种常见水产药物对菊黄东方鲀的急性毒性试验

采用静水试验法,研究了硫酸铜、硫酸铜-硫酸亚铁合剂、高锰酸钾、漂白精等4种常见水产药物对菊黄东方鲀的急性毒性。结果表明,硫酸铜、硫酸铜-硫酸亚铁合剂、高锰酸钾、漂白精对菊黄东方鲀的24 h半致死浓度(LC50)分别为6.05、14.10、3.49、10.66 mg/L;48 h LC50分别为4.07、5.99、3.38、6.31mg/L;安全浓度(SC)分别为0.55、0.32、0.95、0.66 mg/L;毒性敏感程度大小依次为硫酸铜>高锰酸钾>硫酸铜-硫酸亚铁合剂>漂白精。在上述安全浓度范围内,这些药物均可用于菊黄东方鲀的常见疾病防治,但考虑到药物残留和对水环境的污染,在生产中尽可能采用生态防治方法,减少药物的使用。