刑事诉讼非法证据排除制度分析

作为刑事诉讼的一项基本原则,非法证据排除规则的存在是为了避免非法取证现象,维护司法权威,保障人权。它既能在一定程度上提高侦查效率,又能避免一些冤假错案。我国《刑事诉讼法》对非法证据排除制度作出了明确的规定,但其在实际操作中却没有得到很好的运用,在司法实践中也存在很多问题。为此,笔者在剖析非法证据排除制度概念、发展阶段和适用范围的基础上,指出了非法证据的范围狭窄和刑事非法证据排除规则监督体系不完善等不足之处,提出了完善司法解释和加强人权保障等建议,以期推动这一制度的顺利实施。

GⅡ.2[P16]型诺如病毒P蛋白的可溶表达、纯化及其抗原特性分析

目的获得可溶表达的GⅡ.2[P16]型诺如病毒(norovirus,NV)P蛋白,并分析其抗原特性。方法通过优化合成GⅡ.2[P16]型NV P蛋白基因并克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组质粒GⅡ.2-NV-pET-28a,转化DH5α感受态细胞,通过对表达菌种的优化,使P蛋白以可溶性形式表达。表达的P蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,采用Western blot法检测纯化蛋白抗原性;体积排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SECHPLC)法检测抗原纯度;ELISA法鉴定抗原抗体结合能力。结果重组BL21 Star(DE3)pLySs工程菌目的蛋白以可溶形式高表达,经亲和层析纯化后,GⅡ.2 P蛋白纯度为95.53%,且抗原性较好。结论用原核表达菌种成功制备了可溶性表达的NV P蛋白,并明确了P蛋白的抗原性,为GⅡ.2[P16]型NV检测试剂盒和重组亚单位疫苗的研制奠定了基础。

GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定

目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16.923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。