无肿瘤包膜的肝细胞癌临床病理特征及术后预后分析

目的 阐明无肿瘤包膜肝癌的临床病理特征及无肿瘤包膜究竟在多大程度上影响肝癌切除术后无瘤生存及总生存,分析影响无肿瘤包膜肝癌的预后因素.方法 回顾性分析2001年至2009年间手术切除的210例肝癌,t检验或卡方检验比较无包膜与有包膜的肝癌临床病理特点,Kaplan-Meier生存函数分析无瘤生存及总生存,log-rank检验比较生存曲线间的差异,单因素分析影响无肿瘤包膜肝癌无瘤生存及总生存率的因素,COX比例风险回归模型分析与无包膜肝癌预后相关的危险因素.结果 无肿瘤包膜的肝癌在性别、年龄、肝硬化、Child分级、HBsAg、甲胎蛋白、门静脉高压、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、白蛋白、直接胆红素、血小板计数上与有包膜的肝癌差异均无统计学意义（均P〉0.05）,但无肿瘤包膜肝癌总胆红素值显著高于有包膜的肝癌（P=0.005）.无肿瘤包膜肝癌血管侵犯、中低分化的比例显著高于有包膜肝癌;无肿瘤包膜肝癌1、3及5年无瘤生存率分别为62.6%、34.2%及30.8%,显著低于有包膜组的91.0%、78.0%及64.9%（均P〈0.001）,无肿瘤包膜肝癌1、3及5年总生存率分别为82.4%、53.6%及44.2%,显著低于有包膜组的97.3%、88.9%及77.3%（均P〈0.001）.影响无肿瘤包膜肝癌无瘤生存率的独立危险因子为中低分化程度（HR,3.181;95%CI,1.428～7.082,P=0.003）、血管侵犯（HR,4.164;95%CI,2.063～8.405,P＜0.001）;影响无肿瘤包膜肝癌总生存率的独立危险因子为Child B级（HR,3.92;95%CI,1.176～13.066,P=0.026）、中低分化程度（HR,14.875;95%CI,2.039～108.496,P〈0.001）、血管侵犯（HR,7.112;95%CI,3.60～14.05,P＜0.001）.结论 无肿瘤包膜肝癌比有包膜的肝癌更易发生血管侵犯,分化程度更低,术后复发率更高,总生存率更差.

泰国、越南与香港人源H5N1禽流感病毒序列比对及进化特点分析

[目的]禽流感病毒不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障、引起人或其他哺乳动物感染和传播,欲对1997年香港和2004年泰国、越南直接感染人的H5N1禽流感病毒基因组序列进行比对及进化特点分析。[方法]利用Lasergene软件包中的EditSeq从14株禽流感病毒分离株截取HA、NA、M2基因序列并翻译成氨基酸,然后用ClustalX软件对截取的片断进行比较分析。[结果]①2004年泰国、越南人源H5N1毒株的HA切割位点上的氨基酸序列和1997年香港人源H5N1毒株一致;②2004年泰国、越南人源H5N1毒株和1997年香港人源H5N1毒株具有相同的受体结合位点;③泰国和越南人源H5N1毒株的NA茎部缺失了20个氨基酸而在HA上增加了一个潜在糖基化位点;④M2蛋白某些氨基酸位点发生改变,导致部分泰国和越南人源H5N1毒株对金刚烷胺产生耐药性。[结论]1997年香港和2004年泰国、越南直接感染人的H5N1禽流感病毒基因组序列发生了改变。

中国H5N1禽流感病毒HA基因的分子进化分析

为了阐明中国H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因的分子进化规律,从GenBank下载中国近年来分离的27株禽流感H5N1病毒的HA基因,利用LaserGene软件包中的EditSeq程序剪切共同序列并翻译成氨基酸序列,与DNAMAN软件进行比对,并以LaserGene软件包中的MegAlign程序构建分子进化树,结合背景资料分析其传播流行规律。结果显示:①在HA裂解位点上游毗邻的位置,gdch04、gddu04、gxch0405、gxdu05、gxqu0502、hkcph05、stch05、stqu05、ynch0502株都缺失了三个碱基;②27株毒株在HA裂解位点上游毗邻的位置存在多个连续的碱性氨基酸;③来自广西的gxch0405、gxdu05、gxqu0502和来自香港的hkcph05、hkgh04的序列同源性很高,很可能与苍鹭的迁移有关;④来自广西的gxqu0502和来自香港的hkcph05亲源关系很近,很可能来自同一祖先。

FABP3基因对心肌细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组、FABP3沉默组、FABP3沉默+空质粒组及FABP3沉默+过表达人FABP3组,转染72 h后Western印迹检测各组细胞中FABP3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western印迹检测Cleaved caspase3、Bcl-2蛋白表达。结果空白对照组与阴性对照组及FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组之间FABP3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组FABP3的蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组,FABP3沉默+过表达人FABP3组FABP3的蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01);FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白对照组与阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组FABP3(P<0.01);沉默+过表达人FABP3组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组,Bcl-2蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01)。结论沉默FABP3的表达可促进H9C2心肌细胞凋亡,过表达则抑制细胞凋亡,其机制与调节Cleaved caspase3及Bcl-2蛋白表达有关。

肝硬化对单个小肝细胞癌切除术后复发和患者长期生存的影响

目的比较肝硬化患者和非肝硬化患者的单个小肝细胞癌（长径≤5cm）手术切除疗效，探讨肝硬化对单个小肝细胞癌切除术后复发和患者长期生存的影响。方法采用回顾性研究方法，将2001年4月至2009年10月在我院肝脏外科中心接受肝切除术的单个小肝细胞癌患者共256例分为非肝硬化组（44例）和肝硬化组（212例），比较两组患者的无瘤生存率和总体生存率。男性227例，女性29例；年龄14～79岁，中位年龄49岁。224例（87．5％）患者合并乙型肝炎，241例（94．1％）患者术前肝功能为ChildA级。采用单因素和多因素分析探讨单个小肝细胞癌患者肝切除术后的预后因素。结果非肝硬化组患者的1、3、5年无瘤生存率和总体生存率分别为93．0％、85．3％、68．5％和100％、92．5％、92．5％，肝硬化组患者的1、3、5年无瘤生存率和总体生存率分别为81．1％、58．6％、45．0％和93．8％、78．7％、67．8％。非肝硬化组患者的无瘤生存率和总体生存率优于肝硬化组（χ^2=8．756，P=0．003；χ^2=8．603，P=0．003）。血管侵犯、肿瘤中低分化、无肿瘤包膜和肝硬化是影响单个小肝细胞癌患者肝切除术后复发的独立危险因素，亦是影响患者术后长期生存的独立危险因素。结论除血管侵犯、肿瘤中低分化、无肿瘤包膜等肿瘤生物学因素外，肝硬化亦是影响单个小肝细胞癌切除术后患者长期生存的重要不良预后因素。肝硬化患者肝切除术后的长期疗效劣于非肝硬化患者。

肝切除术血流阻断技术及其应用

肝脏外科的发展史也是一部止血技术的发展史。自1908年Pringle首次采用捏压肝蒂的方法控制肝脏术中出血起，肝脏手术血流控制技术有了较大发展，出现了全肝入肝血流阻断、半肝入肝血流阻断、半肝血流完全阻断、全肝血流阻断、选择性全肝血流阻断等技术。熟悉肝切除术中血流阻断技术并合理应用，对指导肝脏外科实践具有重要意义。

Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响

目的观察Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响。方法Westernblot检测40例肝癌和癌周组织中γ-H2AX和Ku80表达水平；将Ku80基因转染到SMMC7721细胞；免疫荧光和Westernblot检测γ-H2AX焦点分布和蛋白表达。结果γ-H2AX在肝癌组织中的表达与癌周比较明显增高（31／40，77．5％），而Ku80表达明显减低（30／40，75％），γ-H2AX表达上调与Ku80表达下调相关（P〈0．05）；筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞；免疫荧光结果显示，Ku80高表达克隆γ-H2AX焦点数目与对照组比较明显减低（P〈0．01）；Westernblot显示，Ku80高表达克隆γ-H2AX表达与对照组比较明显减低。结论Ku80表达下调与肝癌细胞的DNA双链损伤相关，Ku80分子表达可减低肝癌细胞DNA双链损伤水平。

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P<0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P<0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P<0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P<0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。