白色念珠菌烯醇化酶诱导产生中性粒细胞外网

目的通过重组白色念珠菌烯醇化酶(enolase),研究其对人中性粒细胞的作用。方法采用分子克隆法,构建质粒、克隆、表达、纯化白色念珠菌重组enolase,密度梯度离心法提取人中性粒细胞,通过2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCFH-DA)法、Sytox green染色和免疫荧光观察白色念珠菌重组enolase(500 nmol/L)对人中性粒细胞的刺激作用。中性粒细胞加入白色念珠菌SC5314(中性粒细胞∶白色念珠菌=5∶1)作为阳性对照组(SC5314组),未加刺激的作为阴性对照组。采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)及Tukey′s检验对数据进行统计分析。结果成功得到重组enolase,分子量为46 kDa。重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生细胞内活性氧(ROS),enolase组与SC5314组产生ROS的量均无明显差异。Sytox green对胞外DNA定量及免疫荧光观察,均显示重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生中性粒细胞外网(NETs)。NETs定量结果显示,enolase组[(11.0±2.5)%]与SC5314组[(12.4±2.0)%]在2 h时无明显差异(F=6.13,P=0.0886),在4 h时enolase组[(22.2±2.0)%]显著低于SC5314组[(31.4±3.1)%],差异有统计学意义(F=9.745,P=0.0370)。结论白色念珠菌enolase可以诱导人中性粒细胞形成NETs。