六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

浅谈袁长津教授运用健脾疏肝益气方治疗胃癌的经验

阐释袁长津教授对胃癌的认识,胃癌的发病特点和其所属脏腑的生理功能,总结胃癌的发病病机,强调疏肝健脾益气治疗胃癌的重要性,并列举袁师运用健脾疏肝益气方治疗胃癌的验案。

基于PI3K/Akt通路研究内皮祖细胞来源外泌体协同丹参酮Ⅱ_(A)对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

探讨丹参酮Ⅱ_(A)(tanshinoneⅡ_(A),TaⅡ_(A))协同内皮祖细胞来源外泌体(endothelial progenitor cell-derived exosomes,EPCsexos)通过磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路对胸主动脉血管内皮细胞(aortic vascular endothelial cells,AVECs)氧化损伤的保护作用的分子机制。将1-棕榈酰基-2-(5′-氧-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱[1-palmitoyl-2-(5′-oxovaleroyl)-sn-glycero-3-phosphocholine,POVPC]诱导的AVECs随机分为模型组、TaⅡ_(A)组、EPCsexos组和TaⅡ_(A)+EPCs-exos组,另取正常细胞作为对照组,细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出率,Matrigel实验检测成管能力,DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(activated oxygen,ROS)水平,激光共聚焦显微镜检测内皮细胞骨架形态,ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性因子表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测PI3K和Akt的mRNA及磷酸化水平表达情况。结果显示,与对照组比较,模型组中细胞增殖及成管能力下降,LDH漏出率及ROS水平上升,细胞骨架破坏明显,IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达增加,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平下降;与模型组比较,单用TaⅡ_(A)或EPCsexos干预后,2组细胞增殖及成管能力上升,LDH漏出率及ROS水平下降,骨架破坏得到修复,IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平下降,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平上升;与单用TaⅡ_(A)或EPCs-exos组比较,TaⅡ_(A)+EPCs-exos组细胞增殖及成管能力进一步上升,LDH漏出率、ROS水平、IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达都进一步下降,细胞骨架得到更好的修复,PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平显著上升。研究表明,TaⅡ_(A)和EPCs-exos均能对POVPC诱导的AVECs产生保护作用,其机制与激活PI3K/Akt通路相关,而将两者联合应用,可以对治疗效果起协同增效作用。

基于TLR4/NF-κB通路研究桃叶珊瑚苷联合ADSCs-exos对TBHP诱导的髓核细胞保护作用

该文研究桃叶珊瑚苷(aucubin)协同脂肪间充干细胞外泌体(adipose-derived stem cells-exosomes,ADSCs-exos)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的人源髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)炎性损伤、衰老及凋亡的保护作用及机制。将TBHP诱导NPCs分为正常组、模型组、aucubin组、ADSCs-exos组及aucubin+ADSCs-exos组。细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖,细胞染色-β-半乳糖苷酶活性染色方法(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)炎症因子的表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,与模型组比较,aucubin或ADSCs-exos组NPCs活性和增殖上升,G_(0)/G_(1)期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,凋亡减少,细胞衰老比例降低,IL-1β和TNF-α水平下降,TLR4和NF-κB mRNA及蛋白表达显著减少,IL-10水平上升,aggrecan和COL2A1 mRNA及蛋白表达均升高;与aucubin或ADSCs-exos单独处理组比较,aucubin+ADSCs-exos组NPCs活性和增殖进一步上升,G_(0)/G_(1)期细胞比例进一步降低,S期细胞比例进一步增加,凋亡水平和细胞衰老比例都进一步降低,IL-1β和TNF-α水平,TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平均进一步下降,而IL-10和aggrecan、COL2A1 mRNA及蛋白水平均进一步上升。综上所述,aucubin和ADSCs-exos均能通过抑制炎症反应,减少NPCs凋亡和衰老,促进细胞活性、增殖以及细胞外基质(ECM)的合成而发挥保护作用,其作用机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,而两者联合应用,可以对保护作用起协同增效的作用。