广西壮族系统性红斑狼疮与HLA-DQA1基因相关性研究

目的 为了探讨广西壮族系统性红斑狼疮 (SLE)与HLA DQA1相关性。方法 用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术 ,对 5 1例SLE壮族患者和 70例壮族健康人的HLA DQA1基因进行研究。结果 两组均未发现HLA DQA1 0 2 0 1, 0 3 0 2及壮族健康人的DQA1 0 60 1等位基因。SLE组DQA1 0 10 1频率显著高于对照组 (RR =3 .2 72 7,χ2 =7.3 2 1,P =0 .0 0 9) ,而DQA1 0 10 4, 0 3 0 1频率均显著低于对照组 (RR =0 .45 61,χ2 =3 .885 ,P =0 .0 49和RR =0 .43 17,χ2 =4.843 ,P =0 .0 2 8)。结论 DQA1 0 10 1可能是广西壮族SLE易感基因 ,DQA1 0 10 4和DQA1 0 3 0 1可能为保护基因。

经皮肤损伤感染马尔尼菲青霉菌致病力动物实验研究

目的研究马尔尼菲青霉菌经皮肤损伤途径感染小鼠致病力情况。方法将马尔尼菲青霉菌野生株和人感染株孢子悬液分别注入鼠尾皮内,观察接种后发病情况,于第15,50 d分批处死、解剖。结果马尔尼菲青霉菌导致小鼠皮肤感染发病率为100%,而85%小鼠皮损可自行消退痊愈,15%小鼠出现皮肤播散性感染;组织病理示:皮损处细胞性炎症反应在皮损中显著。从发病时间和早期病变严重程度比较,野生株致病力显著强于人感染株(P<0.05);但是从后期病变严重程度和自行痊愈率比较,野生株和人感染株致病力差异无显著性(P>0.05)。结论马尔尼菲青霉菌可以经皮肤损伤引起小鼠致病,其引起机体剧烈细胞免疫应答反应是致病力重要因素之一;野生株和人感染株感染早期致病力有差异,预后无差异。

SELDI技术对马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相蛋白质组表达差异的分析

目的比较马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相蛋白质组表达差异。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI)检测马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相的蛋白质谱。用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据并进行分析。结果在WCX2芯片上共捕获75个蛋白峰,其中10个蛋白质在酵母相高表达,3个蛋白质在霉菌相高表达。相对分子质量为2900和3151蛋白质仅在酵母相表达,13151和13285蛋白质仅在霉菌相表达。结论SELDI技术可以检测出马尔尼菲青霉菌霉菌相和酵母相表达的小分子蛋白质差异。

氟康唑诱导菌丝相马尔尼菲青霉菌产67.5kDa蛋白

目的探讨在体外加入氟康唑培养菌丝相马尔尼菲青霉菌的外分泌蛋白质变化情况。方法11株马尔尼菲青霉菌分别接种于含8μg/mL和不含氟康唑的30mL沙氏液基(SDB)中,25℃培养1周。E-test法测定不同培养液中菌丝对氟康唑的药敏。同时提取培养液中的蛋白质,聚丙烯酰胺凝胶电泳比较外分泌蛋白质差异。结果含氟康唑SDB中的马尔尼菲青霉菌菌丝悬液均变为玫瑰红色,不含氟康唑SDB中菌丝悬液颜色不变红。含氟康唑SDB中菌丝氟康唑MIC值显著增高(P<0.01),而且分泌67.5kDa蛋白质。结论在25℃沙氏液基中,8μg/mL氟康唑可以诱导马尔尼菲青霉菌产红色色素并分泌67.5kDa蛋白质。

马尔尼菲青霉菌酵母相生化及药敏分析

目的:研究马尔尼菲青霉菌野生株和人感染株酵母相生化及药敏特性。方法:14株野生菌株和16株人感染株马尔尼菲青霉菌酵母相分别进行生化和抗真菌药药敏检测,分析其生化反应特点。结果:全部菌株均能同化葡萄糖、海藻糖、赤藓醇、麦芽糖和纤维二糖,均不能利用硝酸盐且尿素酶试验均阴性,野生株和人感染株生化反应总体无差异(P>0.05)。抗真菌药的敏感率由高到低依次为伊曲康唑、5-氟胞嘧啶、氟康唑、酮康唑和两性霉素B。人感染株对两性霉素B敏感性低于野生株(t=191.5,P<0.05)。结论:马尔尼菲青霉菌野生株和人感染株生化表型基本相同;在临床治疗马尔尼菲青霉菌感染时,应根据抗真菌药敏测试调整用药。

马尔尼菲青霉菌耐氟康唑的蛋白质组初步分析

目的探索马尔尼菲青霉菌耐氟康唑的相关蛋白质组。方法将11株菌丝相和酵母相对氟康唑均敏感的马尔尼菲青霉菌菌株在体外含8μg/mL氟康唑的沙氏液基进行耐药诱导培养。E-test法检测各菌株诱导培养前后氟康唑的MIC值,分别筛选菌丝相和酵母相MIC值增加最显著的菌株,通过CM10蛋白质芯片检测菌体药物诱导培养前后蛋白质表达的差异。结果11株菌株的菌丝相和2株菌株的酵母相能耐受8μg/mL氟康唑生长,而且诱导培养7d后菌丝相MIC值显著升高,MIC几何均值由1.22μg/mL上升到55.56μg/mL;菌丝相在耐受氟康唑中16个蛋白质表现为高表达且特异性表达4581.1Da和6109.7Da蛋白质,酵母相则在8μg/mL氟康唑诱导培养下22个蛋白质表现为高表达且特异性表达3575.2Da,8507.0Da和8563.3Da蛋白质。结论马尔尼菲青霉菌菌丝相比酵母相更能耐受氟康唑,该菌对氟康唑的抵抗可能和某些特异性蛋白质相关。

广西壮族系统性红斑狼疮自身抗体与HLA-DQA1等位基因的相关性

目的:探讨广西壮族系统性红斑狼疮(SLE)自身抗体与HLA-DQA1等位基因的相关性。方法:应用酚/氯仿抽提法提取51例广西壮族SLE患者外周血基因组DNA,通过聚合酶链反应—序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对51例患者HLA-DQA1基因进行研究。同时采用免疫印迹技术测定患者自身抗体谱。结果:HLA-DQA10101与抗dsDNA呈正相关(χ2=4.488,r=0.297,P<0.05),DQA10301与抗dsDNA呈负相关(χ2=10.082,r=-0.491,P<0.01)。结论:广西壮族SLE易感基因DQA10101的易感性可能通过诱导抗dsDNA抗体产生实现。DQA10301可能通过抑制自身抗体的产生为保护基因。

系统性红斑狼疮患者脑脊液检查分析

目的 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者脑脊液 (CSF)的改变规律 ,为诊断提供依据。方法 检测 2 0例狼疮性脑病 (NPLE)和 2 0例非狼疮性脑病SLE患者CSF常规、生化、酶学、免疫学指标。结果 NPLE组的CSF细胞数、蛋白质、抗核抗体 (ANA)、门冬氨酸氨基转移酶 (AST)、肌酸激酶 (CK )均升高 (P均 <0 .0 5 )。结论 SLE患者CSF的改变与神经系统受累的严重程度一致 ,检查CSF对狼疮性脑病的诊断、判断预后有重要意义。

RNA干扰对恶性黑素瘤LiBr细胞livin基因表达的影响

目的:探索siRNA对恶性黑素瘤LiBr细胞livin基因表达的影响及剂量和时间效应。方法:将化学合成的3条靶向livin基因的siRNA序列转染至人恶性黑素瘤LiBr细胞,分别在mRNA和蛋白水平应用real-time RT-PCR和Westernblot检测其表达变化以确定沉默效应最好的序列并观察其下调livin表达的剂量和时间效应。结果:其中1条siRNA序列显著下调livin mRNA和蛋白表达,并且呈剂量和时间依赖关系;100nmol/L可达到最大沉默效应,其下调livin mRNA和蛋白最大效应分别出现在转染后48h和72h。结论:应用siRNA技术靶向livin mRNA790-808位点可有效地敲低LiBr细胞livin的表达。

经呼吸道感染马尔尼菲青霉菌的动物实验研究

目的对不同来源马尔尼菲青霉菌(penicillium marneffei,PM)的致病力情况进行初步探讨。方法将实验组小鼠分为R组和H组,分别经呼吸道吸入接种分离自广西野生银星竹鼠的PM菌株(竹鼠寄生株)及广西地区马尔尼菲青霉病(peniciliosis marneffei,PSM)患者血液的PM菌株(人感染株)活菌悬液,7天后处死并解剖,肉眼观察肺脏感染情况;取左肺下叶组织行真菌培养并比较阳性率差异;取左肺上叶组织行病理切片观察了解其病理改变;取右肺组织匀浆接种PDA平板培养基25℃培养48h后计数菌落,比较二者肺组织菌载量,同时分析安慰剂组和空白对照组小鼠的情况。结果实验组小鼠(R组和H组)感染PM后发病率100%;两种不同来源的PM感染小鼠后肺脏肉眼观察无明显差异;感染不同来源PM的小鼠肺组织菌载量无差异;不同来源PM感染的小鼠肺脏病理改变无明显差异;安慰剂组小鼠有轻微病理改变;空白对照组小鼠无病理改变。结论两种不同来源的PM菌株经呼吸道吸入感染途径均可引起小鼠肺部致病;竹鼠寄生株PM与人感染株PM对小鼠的致病力无差异。

广西野生银星竹鼠体内寄生马尔尼菲青霉菌微卫星多态性研究

目的了解广西地区野生银星竹鼠携带马尔尼菲青霉菌(PM)基因多态性。方法用微卫星标记多态性分析法对40株从广西不同地区野生银星竹鼠体内寄生马尔尼菲青霉菌进行基因多态性分析。结果40只野生银星竹鼠自然携带PM阳性率100%。微卫星标记多态性分析法以高区分度(0.992)把40株PM分为22个不同的等位基因型。微卫星引物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ分别检测到13,9和6个等位基因。广西银星竹鼠体内寄生马尔尼菲青霉菌基因型共分为5类;最常见的是3类,共15株(37.5%)。桂中地区以1类为主,10株中占7株(70%);桂北地区以2类为主,9株中占7株(77.8%);桂南地区以3类为主,5株中占4株(80%);而桂西地区9株全部属于3类;4类和5类仅出现在桂东地区,7株中分别为6株和1株(分别占85.7%和14.3%)。结论广西银星竹鼠自然携带之马尔尼菲青霉菌的基因多态性可能存在地域上的差异。

马尔尼菲青霉菌野生株和临床分离株致病力研究

目的对两种来源的马尔尼菲青霉(Penicillium marneffei,PM)菌株的致病过程和致病力情况进行初步探讨。方法分别将野生株和临床分离株的PM孢子菌悬液经腹腔注射途径感染健康小鼠,然后按时间分批处死,观察脏器感染情况,取其内脏及颈动脉血进行真菌培养并比较阳性率。结果发现小鼠感染PM的发病率为100%;不同时期小鼠内脏病变程度有差异,且内脏病变程度随着时间推移而逐渐减轻;小鼠部分脏器真菌培养阳性率有明显差异。结论不同来源的PM菌株经腹腔注射途径均可使小鼠致病;具有正常免疫功能的小鼠感染PM后可以逐渐恢复;本实验可以作为研究马尔尼菲青霉病(Penicilliosis marneffei,PSM)及PM野生株和临床分离株致病力相关性等的一个手段。

HLA-DRB1,DQA1等位基因与广西壮族系统性红斑狼疮器官系统损害相关性研究

目的分析HLA-DRB1,DQA1等位基因与广西壮族系统性红斑狼疮(SLE)器官系统损害的相关性。探讨广西壮族SLE从基因到临床表达的发病机制。方法应用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测128例确诊的SLE患者的HLA-DRB1,DQA1等位基因,并与患者的各种临床指标进行统计学分析。结果蛋白尿与DRB1*15和DRB1*16负相关,与DQA1*0301正相关;血尿素氮增高与DRB1*1401和DQA1*0501负相关;C3降低与DRB1*1401负相关,与DQA1*0101正相关;白细胞减少与DRB1*16负相关;贫血和淋巴细胞减少与DQA1*0102正相关;血小板减少与DQA1*0301负相关;面部红斑与DQA1*0101负相关;关节痛与DQA1*0104正相关。结论多个HLA-DRB1,DQA1等位基因与广西壮族SLE临床表现有相关性。广西壮族SLE遗传背景与其他人种有所不同。

siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的:观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响.方法:采用siRNA-3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用免疫荧光细胞化学技术检测siRNA对凋亡效应蛋白Caspase-3表达的影响及应用MTT法检测siRNA对细胞增殖的作用.结果:siRNA-3转染LiBr细胞72h可诱导细胞凋亡(P<0.05)和引起细胞G0/G1期阻滞(P<0.05);可下调Caspase-3蛋白表达(P<0.05)及抑制细胞增殖(P<0.05).结论:Livin可做为应用RNA干扰技术探索恶性黑素瘤基因治疗的潜在靶基因.

不同剂量糖皮质激素治疗系统性红斑狼疮的探讨

目的:探讨小剂量糖皮质激素冲击和常规剂量糖皮质激素治疗系统性红斑狼疮(SLE)的疗效及适应证。方法:用小剂量糖皮质激素冲击治疗103例SLE患者,常规剂量糖皮质激素治疗98例SLE患者。3周后观察两组患者临床症状缓解时间、各项实验室检查指标的好转率及不良反应。结果:两组患者部分临床症状缓解时间、实验室检查指标的好转率及不良反应发生率经统计学分析差异有显著性(P<0.05)。结论:小剂量糖皮质激素冲击治疗SLE患者的关节疼痛、发热、蛋白尿的疗效优于常规剂量治疗,而常规剂量糖皮质激素治疗甲周红斑、口腔溃疡、抗ds-DNA抗体阳性、抗核抗体(ANA)阳性、低血红蛋白的疗效优于小剂量糖皮质激素冲击治疗。两种方法治疗蝶形红斑和血小板、白细胞、红细胞减少,C3、C4降低的疗效差异无显著性(P>0.05)。

马尔尼菲青霉菌感染小鼠脾脏组织病理学特征

目的观察小鼠感染两种不同来源的马尔尼菲青霉菌(PM)后脾脏的组织病理学改变。方法用分离自广西银星竹鼠的野生PM菌株(A组)和马尔尼菲青霉病患者的临床PM菌株(B组)的菌悬液经腹腔注射感染健康小鼠,并以生理盐水腹腔注射作为阴性对照。接种10周后处死(中途死亡的小鼠随时解剖)小鼠,解剖、观察内脏感染情况,选取小鼠脾脏行组织病理切片,苏木素伊红染色(HE)及过碘酸锡夫染色(PAS),观察其基本病理变化。结果A、B组PM感染的小鼠脾脏均可见炎性灶状病变、脓肿或肉芽肿形成;PAS染色可见真菌孢子;比较第10周解剖的小鼠与中途死亡小鼠脾脏病理变化,前者脏器组织中病变及真菌数量明显减少,部分消失,C组小鼠无死亡,内脏未见肉眼病变。结论野生PM和临床分离PM均能使具有正常免疫功能小鼠的脾脏感染,且部分小鼠感染PM后,随着时间的推移症状可以逐渐消失。

广西地区非淋菌性宫颈炎解脲支原体检测及药敏分析

目的:了解广西地区非淋菌性宫颈炎(NSGI)感染解脲支原体(UU)的情况及其药物敏感情况。方法:对16800例NSGI患者宫颈分泌物进行UU培养并进行药物敏感试验。结果:在16800例NSGI患者中发现UU感染者2592例,UU对常用抗生素的敏感性依次为交沙霉素(97.1%)、强力霉素(95.7%)、左氧氟沙星(95.6%)和罗红霉素(93.8%)。结论:广西地区妇女由UU引起的NSGI治疗考虑首选交沙霉素、强力霉素、左氧氟沙星和罗红霉素。

“三位一体”案例式立体教学法在中医骨伤科临床带教中的应用研究

目的:观察"三位一体"案例式立体教学法(CTTM)在中医骨伤科临床带教中的应用情况。方法:选取2014年12月至2016年12月在本院骨伤科实习的90名学生为研究对象,采用随机数字表法随机分为观察组与对照组。观察组采用"三位一体"CTTM,对照组采用传统带教法。教学结束后通过知识考核及问卷调查的形式对两组教学效果做出评价,并进行比较。结果:观察组的总分、实践技能操作及病历分析评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组的理论知识评分高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组案例理解程度、综合分析能力、学习兴趣、自学能力及文献检索能力的提高程度均大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组学生的满意度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:"三位一体"CTTM可提高中医骨伤科实习生学习能力及临床实践能力,教学满意度高,是一种临床带教的好方法。

广西地区壮、汉族系统性红斑狼疮与HLA-DRB1等位基因相关性研究

目的:探讨广西地区壮、汉族系统性红斑狼疮(SLE)与HLA-DRB1等位基因的相关性。方法:用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,分别对52例SLE壮族患者和70名壮族健康人,45例SLE汉族患者和60名汉族健康人的HLA-DRB1等位基因进行研究。结果:壮族SLE患者HLA-DRB11401及DRB116两个等位基因的频率低于正常对照组(RR=0.2813,χ2=5.0024,P=0.0252及RR=0.3889,χ2=3.9527,P=0.0466),患者组和对照组均未检出HLA-DRB108、DRB111和DRB113等位基因;汉族SLE患者HLA-DRB115等位基因的频率高于正常对照组(RR=2.5333,χ2=8.4006,P=0.0037),患者组未检出HLA-DRB111、DRB113等位基因,对照组亦未检出HLA-DRB113等位基因。结论:提示HLA-DRB11401及DRB116等位基因可能是广西地区壮族人SLE的保护基因,未发现易感基因。提示HLA-DRB115等位基因可能是广西地区汉族人SLE的易感基因。