刃天青法检测青蒿琥酯对耐药结核分枝杆菌药物敏感性初步研究

目的了解青蒿琥酯(artesunate,ASN)单独或联合利福平(rifampicin,RFP)、异烟肼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)、氧氟沙星(ofloxacin,OFLX)等抗结核药物对耐药结核分枝杆菌的抑制作用,为耐药结核的治疗寻找新的有效药物提供依据。方法采用刃天青法检测ASN对耐药结核分枝杆菌的抑制作用,并采用ASN联合RFP、INH、OFLX、SM对耐药结核分枝杆菌抗结核药物MIC研究。结果本研究测试的14株耐药菌株中,7株MIC值为256μg/m L,6株MIC值为128μg/m L,1株MIC为512μg/m L,MIC50为256μg/m L,MIC90为256μg/m L。16株敏感株中,MIC50为128μg/m L,MIC90为256μg/m L。两者差异无统计学意义(P>0.05)。此外,当ASN终浓度为32~128μg/m L时,能明显改善耐药MTB对RFP、INH、OFLX、SM等抗结核药物的敏感性。结论 ASN对抗耐药结核分枝杆菌作用可能甚微,但其能协同或逆转抗结核药物改善耐药MTB的药物敏感性,可能成为耐多药结核治疗备选新药。

青蒿琥酯对结核分枝杆菌诱导的TNF-α、IL-6表达的影响

目的探讨青蒿琥酯(artesunate, ASN)对结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, Mtb)诱导THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6的影响及机制研究。方法体外培养THP-1细胞。MTT法检测ASN对细胞的活性影响;RT-qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6和TLR2mRNA表达;ELISA检测TNF-α、IL-6分泌,Western blot检测TLR2受体表达。结果 MTT法检测ASN浓度在0～20μg/mL范围内培养48h均对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-α、IL-6mRNA及蛋白表达,而20μg/mL ASN能显著抑制TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。此外,20μg/mLASN能显著抑制TLR2mRNA及蛋白表达。结论 ASN可能通过抑制TLR2受体表达缓解Mtb诱导的炎症反应。

青蒿琥酯通过诱导HO-1产生对结核分枝杆菌诱导的THP-1细胞TNF-α分泌的影响

目的探讨青蒿琥酯(ASN)诱导HO-1产生对结核分枝杆菌(Mtb)诱导的THP-1细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响并探讨其可能的作用机制。方法体外培养THP-1细胞,将细胞分为对照组、ASN组、Mtb组、ASN预处理组及Zn PP预处理组。ASN预处理组为浓度0～20μg/ml ASN预处理THP-1细胞4 h,随后加入Mtb(感染复数MOI=10)刺激24 h。锌原卟啉(Zn PP)预处理组为10μmol/L Zn PP抑制剂与THP-1预处理4 h,随后加入Mtb(MOI=10)刺激24 h。MTT法检测ASN对细胞的活性影响。RT-q PCR检测细胞因子TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧合酶1(HO-1) mRNA表达; ELISA检测TNF-α蛋白分泌。结果 MTT法检测ASN浓度在0～20μg/ml范围内对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-αmRNA及蛋白表达,而5～20μg/ml ASN组呈浓度依赖性抑制TNF-αmRNA及蛋白表达(P <0. 05)。此外,ASN能上调Nrf2及HO-1mRNA表达,HO-1竞争性抑制剂Zn PP能增加TNF-α蛋白分泌。结论 ASN通过诱导HO-1产生抑制Mtb诱导的炎症反应。

结核分枝杆菌L型临床分离特征研究

目的探讨结核分枝杆菌L型(MTB-L)实验室培养及鉴定,在涂阳肺结核患者中分离率及耐药性,提高临床对MTB-L的重视。方法随机选择长沙市中心医院治疗的涂阳肺结核患者222例,进行MGIT 960和改良92-3TB-L液体培养。MGIT 960报阳后,取改良92-3TB-L液体培养基沉淀涂片抗酸染色,进行初步筛查。将疑似L型阳性菌株培养物转种改良TSA-L型固体培养基,观察菌落特征和镜下特征。用抗酸染色、结核DNA扩增实验确认菌株性质。对MTB-L进行常规药敏试验以及耐药基因突变位点分析。结果 MTB-L鉴定:培阳菌株经固体培养,可见"油煎蛋"、"颗粒"、"丝状"样菌落,结核DNA确认为MTB。临床分离率:经过培养,单独细菌型阳性率为50. 90%(113/222),细菌型和L型两者同时存在为15. 32%(34/222),单独MTB-L型阳性率为2. 25%(5/222)。耐药性:MTB-L型对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药,耐药基因位点未发生突变。结论临床实验室应常规开展结核分枝杆菌L型细菌的培养,提高临床对MTB-L型细菌的重视。

结核分枝杆菌L型特征及临床意义研究进展

结核病是影响公共卫生健康安全的一种慢性传染性疾病。其病原菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB),而结核分枝杆菌L型(Mycobacterium tuberculosis L-forms,MTB-L)是MTB细胞壁缺失的一种特殊形态,在显微镜下呈现抗酸染色阴性、形态多样的特点,且目前临床实验室检测率低,较难发现。近年来MTB-L型在临床中的报道越来越多,本文通过对MTB-L的生物学特征、耐药性和临床致病力等方面进行综述。

青蒿琥酯对结核分枝杆菌ESAT-6和CFP-10诱导的HO-1表达影响

目的研究青蒿琥酯(ASN)对结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)诱导的HO-1表达影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养THP-1细胞,依据实验设计,四唑盐(MTT)法检测ESAT-6和CFP-10对细胞活性影响; ASN预处理4 h后,ESAT-6和CFP-10作用24 h,RT-qPCR检测血红素氧合酶-1(HO-1) mRNA表达水平,Western blot检测Toll样受体2(TLR2)表达水平。结果 MTT法检测ESAT-6和CFP-10在浓度0～5μg/ml范围内对细胞无毒性;与对照组相比,5μg/ml ESAT-6和5μg/ml CFP-10均能明显上调HO-1 mRNA表达水平(P <0. 05);此外,20μg/ml ASN能明显增强ESAT-6和CFP-10诱导的HO-1 mRNA表达水平(P <0. 05),并能抑制ESAT-6和CFP-10诱导的TLR2受体表达。结论 ASN联合ESAT-6或CFP-10,对病原相关炎症性疾病的治疗可能具有潜在应用价值。

MCV、MCH用于地中海贫血筛查的能效验证

目的分析地中海贫血不同基因型MCV、MCH值,参照2020年地中海贫血妊娠期管理专家共识(简称共识),验证共识MCV、MCH截断值的筛查能效,为临床诊疗及遗传咨询提供数据参考。方法选取2016年10月—2021年2月在湖南省妇幼保健院进行婚检、孕检对象,以全自动血细胞分析仪检测MCV、MCH,Gap-PCR检测三种常见缺失型α地贫突变,RDB-PCR检测三种常见α地贫点突变和17种常见β地贫点突变,收集地贫基因检测阳性样本数据3234例进行统计分析。结果3234例地贫阳性样本中,血常规MCV、MCH值随着地贫临床分型的加重逐渐降低,静止型a地贫及轻型地贫αCSα/αα、CAPM/N基因型MCV、MCH均值均高于共识截断值,漏检率分别为61.73%、79.37%、100.00%;轻型β地贫βEM/N基因型MCV、MCH均值位于共识截断值附近,漏检率35.00%;其他基因型(除外个别复合地贫)MCV、MCH均值都低于共识准截断值,漏检率0%-5%左右。结论不同地贫基因型MCV、MCH值有相应的取值范围,根据共识推荐的截断值(MCV<82 fl和(或)MCH<27 pg)筛查地贫携带者,可能导致静止型地贫及轻型地贫αCSα/αα、βEM/N、CAPM/N基因型高漏检,夫妻同步筛查MCV、MCH可以大幅提高只筛查孕妇的筛查能效。