脂多糖/氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型的建立和评价

目的建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型.方法体外培养小鼠原代肝细胞,待其稳定贴壁生长后,加入(0.1、0.5、1、5)ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性反映肝细胞损伤.诱导骨髓来源巨噬细胞成熟,通过1μg/mL LPS刺激巨噬细胞产生TNF-α;巨噬细胞培养上清联合5 mg/mL D-GalN或50 ng/mL放线菌素D(ActD)处理原代肝细胞24 h,检测ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.原代肝细胞和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)共培养,LPS联合D-GalN或ActD对共培养体系处理24h,检测共培养细胞上清ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.结果TNF-α和D-GalN联合处理原代肝细胞,细胞培养上清ALT活性升高,表明肝细胞发生损伤.LPS刺激BMDM表达TNF-α明显增加,BMDM上清联合D-GalN能引起肝细胞培养上清ALT活性升高和肝细胞皱缩、破碎.肝细胞和BMDM共培养体系中,LPS联合D-GalN能够引起肝细胞损伤;但LPS联合ActD不能引起肝细胞损伤,显微镜观察发现巨噬细胞大量变圆、皱缩,提示巨噬细胞早于肝细胞发生死亡.结论LPS/D-GalN能在体外诱导肝细胞损伤;在利用BMDM和原代肝细胞共培养体系评价损伤效应时,应当用D-GalN而不是ActD作为转录抑制剂.

电子转移黄素蛋白A对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响

目的探讨线粒体β氧化关键蛋白电子转移黄素蛋白A(ETFA)对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响及潜在的调控机制。方法将携带对照短发夹RNA(shRNA)或人ETFA shRNA 1#和2#的pGPU6/Hygro载体转染SMMC-7721细胞,分别为对照组、ETFA-1#组和ETFA-2#组。通过潮霉素筛选得到稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞克隆,并用Western印迹法检测细胞中ETFA蛋白水平,对稳定敲低细胞进一步鉴定。将筛选得到的稳定细胞用于以下实验。将细胞与0.3%琼脂混匀,均匀铺于6孔板(每孔1×10^(3)细胞),第10天观察集落形成并计数。每只裸小鼠皮下注射2×10^(6)细胞进行皮下成瘤实验,于第14天开始每2 d测量1次瘤体体积,第28天测瘤重。将细胞接种于6孔板,用尼罗红染色法于激光共聚焦显微镜下观察细胞中脂质堆积。将细胞固定后,使用扫描电镜观察细胞超微结构的变化。结果Western印迹法结果显示,ETFA-1#和ETFA-2#组SMMC-7721细胞ETFA的表达水平明显低于对照组,表明稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞构建成功。集落形成实验结果显示,在细胞接种第10天,对照组细胞平均克隆数为99±7,ETFA-1#组为55±5(P<0.01),ETFA-2#组为24±12(P<0.01)。皮下成瘤实验结果显示,在裸小鼠皮下接种细胞28 d后,对照组瘤块平均体积(mm^(3))为1220±474,ETFA-1#组为671±246(P<0.01),ETFA-2#组为534±217(P<0.01);对照组瘤块平均质量(g)为0.65±0.21,ETFA-1#组为0.39±0.13(P<0.01),ETFA-2#组为0.40±0.15(P<0.01)。尼罗红染色结果显示,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见大量红色斑点,而对照组未见此现象。在透射电镜下,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见数量较多、体积较大的脂滴,而对照组未见明显脂滴。结论敲低ETFA可抑制SMMC-7721细胞体外非锚定生长能力和体内成瘤能力,其机制可能与脂质代谢障碍有关。

NF-κB亚基p50在病毒诱导的IFN-β表达中的作用研究

目的探究核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)家族成员p50的缺失对不同类型病毒诱导的IFN-β(interferonbeta)表达的影响。方法建立小鼠病毒感染模型观察p50-/-小鼠(knockout,KO)和野生小鼠(wild type,WT)生存率;酶联免疫吸附法检测病毒感染后小鼠血清以及骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)上清IFN-β水平。免疫印迹检测IFN-β产生过程中重要转录因子干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)的表达和活化。结果致死剂量的病毒感染后,p50-/-小鼠和野生小鼠生存率没有差异;p50的缺失导致病毒感染后小鼠血清和BMDMs培养上清中IFN-β水平轻微降低,IRF7的诱导表达和IRF3的活化在病毒感染早期略有下降。结论NF-κB家族成员p50促进病毒诱导的IFN-β表达,但作用较小。

活化的蛋白激酶C受体1提高巨噬细胞吞噬能力

目的探究活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)的缺失对骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)吞噬、杀菌能力的影响。方法构建RACK1髓系条件性敲除小鼠模型,运用流式细胞术检测并比较Rack1^(ΔMye)小鼠(knockout,KO)和对照Rack1^(F/-)小鼠(wild type,WT)BMDMs机械吞噬、吞噬细菌、杀灭细菌能力的差异;免疫印迹法检测RACK1和自噬活性标志物LC3B-Ⅱ的表达情况。结果Rack1^(ΔMye)小鼠和Rack1^(F/-)小鼠BMDMs杀菌能力没有差异;但Rack1^(ΔMye)小鼠BMDMs机械吞噬能力降低,吞噬细菌能力在早期降低,LC3B-Ⅱ表达水平下降。结论RACK1缺失部分抑制巨噬细胞的吞噬能力,但作用较小。

急性出血坏死性胰腺炎的B超诊断与手术对照分析

急性出血坏死性胰腺炎起病急,多伴有中毒性休克和多种并发症,病情凶险,死亡率高,是外科常见的急腹症之一。以往仅根据临床表现和一般的化验检查,有时诊断困难,不易与其他急腹症相鉴别,误诊率高达80%,使患者不能获得及时堆确的诊断和治疗。近年来由于B型超声切面显象的应用,为直接显示胰腺形态及实质结构提供了有效工具,提高了胰腺疾病的诊断率。我们应用超声显象诊断急性出血坏死性胰腺炎11例,对照手术所见进行了分析。现就B超诊断该疾病的声象图特征及共临床意义讨论于下。