岩原鲤致病性维氏气单胞菌的分离与鉴定

目的 2016年6月从重庆永川某养殖场濒临死亡的岩原鲤内脏分离到一株维氏气单胞菌,分析其生物学特征,为预防和治疗该病提供理论依据和参考。方法从患病鱼体获得一株致病菌YY01,经形态学观察、生理生化特性测定、16S rRNA和gyrB基因序列分析其分类地位;通过人工感染试验和毒力基因检测确定其致病性,并同时开展药物敏感试验筛选其敏感药物。结果病原菌16SrRNA与gyrB序列构建的进化树显示该菌与维氏气单胞菌同聚为一支,相似性在99%以上;结合其形态学特征和生理生化特性,确认为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。人工感染试验结果显示菌株YY01对岩原鲤的半致死量为5.06×104 CFU/g。通过病原菌毒力基因检测发现,能从菌株YY01基因组中扩增到气溶素(Aer)、溶血素(Hly)、外膜蛋白(OmpA)和黏附素(Aha)4种毒力基因。药敏试验表明菌株YY01对多粘霉素B、阿米卡星、先锋霉素V等22种药物敏感;对青霉素、羧苄西林等11种药物耐药。结论所检出的维氏气单胞菌为岩原鲤的致病菌,该菌对岩原鲤有较强的致病性。

黄颡鱼源维氏气单胞菌Aha和gyrB基因双重PCR检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测黄颡鱼源维氏气单胞菌(A.veronii)的方法,本研究根据A.veronii菌株RC110724黏附素基因(Aha)和促旋酶B亚单位基因(gyrB)序列设计引物,经条件优化建立了A.veronii的双重PCR检测方法。结果显示该方法可以同时扩增出A.veronii 419 bp和745 bp两条特异性的片段,而对嗜水气单胞菌、迟缓爱德华菌、副溶血性弧菌、麦氏弧菌、荧光假单胞菌、金黄色葡萄球菌、柱状黄杆菌、肺炎克雷伯氏菌、无乳链球菌、舒伯特气单胞菌扩增结果为阴性;该方法对A.veronii标准株ATCC35624和RC110724基因组DNA和菌体检测下限分别为6.6×10^(-3)ng/μL和3.2×10~2cfu/mL。利用建立的双重PCR方法对30份临床样品进行检测,结果与细菌传统分离鉴定符合率为100%。同时,双重PCR可以检出菌株RC110724人工感染的黄颡鱼肝、脾和肾组织中的细菌DNA,对肝和脾脏组织的样品检测效果最好。本研究建立的双重PCR检测方法特异性好,具有较高的检测灵敏性,可用于黄颡鱼等A.veronii感染病例的快速诊断和流行病学监测。

基于mtDNA Cyt b序列分析齐口裂腹鱼群体遗传多样性

研究测定了长江上游4个齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)野生群体(重庆巫溪、重庆城口、四川雅安、四川阿坝)共104个个体的线粒体Cyt b基因部分序列,以探讨齐口裂腹鱼野生群体的遗传多样性和遗传结构。结果表明:在104个个体Cyt b序列中共检测到43个多态性位点,25个单倍型。4个齐口裂腹鱼群体的单倍型多样性介于0.704—0.884,核苷酸多样性介于0.007—0.012。群体间Kimura双参数遗传距离介于0.008—0.017,其中四川雅安群体与四川阿坝群体间遗传距离最近,基因交流频繁。重庆城口群体与四川雅安群体间遗传距离最远,基因交流受阻。AMOVA分析表明,齐口裂腹鱼的遗传分化主要来自群体内部,且组群间、组群内群体间和群体内存在显著的遗传分化。中性检验得到Tajima’s D和Fu’s Fs的值不显著,且歧点分布图呈多峰,表明长江上游4个齐口裂腹鱼野生群体未经历过种群扩张。研究旨为齐口裂腹鱼野生资源保护提供必要参考意见,同时为齐口裂腹鱼种质资源合理开发和利用提供理论依据。

一例齐口裂腹鱼春季常见病的诊治

齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）,俗称雅鱼、洋鱼、齐口细鳞鱼,为鲤形目、鲤科、裂腹鱼亚科、裂腹鱼属,主要分布于我国长江上游的金沙、岷江、大渡河、青衣江及乌江下游等水域,喜欢栖息于较低水温（7~10℃）的急缓流交界处,齐口裂腹鱼肉肥质嫩、富含脂肪、味道鲜美,是重庆、四川等地重要经济鱼类。但随着人工养殖迅速发展,其养殖规模的增大,尤其是在季节交替时,由于受到温度、水质、天气以及投饲食物等影响,容易暴发寄生虫病、细菌性疾病,而导致其大批死亡,使养殖户遭受了较大的经济损失。

基于三代测序技术的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)高通量候选基因关联分析方法的建立

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界也是我国的主导对虾养殖品种,产业的发展离不开良种的支撑,分子育种被认为是加快良种选育的最有效途径,而目标性状相关分子标记的开发是发展分子育种的基础。研究主要目的是建立一种适用于凡纳滨对虾等水产经济物种的高通量候选基因关联分析方法,并在抗弧菌相关标记筛选中进行应用。首次将三代靶向测序技术用于对虾候选基因的基因分型,在抗弧菌性状候选基因LvPI3K的全长序列上发掘到91个SNP位点,通过关联分析鉴定到21个与抗弧菌性状显著相关的SNP标记(P<0.05),利用Sanger测序证实了三代靶向测序技术分型结果准确可靠。所建立的基于三代测序的靶向分型方法为凡纳滨对虾等水产动物提供了一种高效、低成本的基因分型方法,所发掘的抗弧菌性状相关位点对开展凡纳滨对虾抗弧菌性状分子育种具有一定指导意义。

一例鲤鱼患孢子虫病的诊断与治疗

鲤鱼（Cyprinus carpio）又名鲤拐子、鲤子。因其杂食性、抗病力强、营养价值丰富，使其成为淡水鱼类中品种最多、分布最广、养殖历史最悠久、产量最高者之一。但近年来由于养殖密度的增加、饲养管理的疏忽等，鲤鱼的孢子病时有发生，并对养殖户造成了较大的经济损失。

一例加州鲈鱼苗多病并发的诊断与治疗

2015年4月中旬，重庆市荣昌区某养殖户反映，其养殖的加州鲈鱼苗开始零星死亡。养殖户自行使用聚维酮碘等全池泼洒，连续用药5天，鱼苗病情未见好转，且死亡率一天比一天高。养殖户把病鱼带到本研究中心，经诊断和剖检，确诊为车轮虫病、杯体虫病以及鳃霉病的多病并发。经过治疗，死亡得到控制，现就该多病并发的诊治与预防做如下分析，供大家参考。

一例齐口裂腹鱼春季常见病的诊断与治疗

齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti），俗称雅鱼、洋鱼、齐口细鳞鱼，为鲤形目，鲤科，裂腹鱼亚科，裂腹鱼属，主要分布于我国长江上游的金沙、岷江、大渡河、青衣江及乌江下游等水域，喜欢生活于栖息于较低水温（7—10℃）的急缓流交界处，

一例加州鲈鱼鱼苗多病并发的诊断与治疗

加州鲈鱼（Micropterus salmonides）原名大口黑鲈，属鲈形目、棘臀鱼科、黑鲈属，生活在淡水湖泊中。原产于美国加洲，后引种至我国。目前国内广泛养殖，是一种肉质细嫩、味道鲜美的名贵肉食性鱼类。加州鲈鱼生长迅速，当年养殖的鱼苗便能长到0．5公斤，