非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。

帕博利珠单抗联合贝伐珠单抗治疗铂类耐药复发晚期卵巢癌患者的效果

目的观察帕博利珠单抗联合贝伐珠单抗治疗铂类耐药复发晚期卵巢癌患者的效果。方法选取2018年12月至2022年12月九江市第一人民医院收治的76例晚期卵巢癌患者作为研究对象,按照电脑随机分组法分为试验组(38例)和对照组(38例),对照组采用贝伐珠单抗方案治疗,试验组在对照组的基础上联用帕博利珠单抗,比较两组患者的临床疗效、毒副反应发生率、肿瘤标志物水平和生存质量。结果两组患者治疗第2周期的肿瘤标志物水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗第6周期的肿瘤标志物水平低于本组第2周期,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患者治疗第6周期的癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原153(CA153)和糖类抗原125(CA125)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组毒副反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组总生存期和无进展生存期长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论帕博利珠单抗联合贝伐珠单抗治疗铂类耐药复发晚期卵巢癌效果较好,可有效改善患者的生存质量和预后表现,降低肿瘤标志物表达水平和毒副反应发生风险,临床疗效和安全性更高。

消癥止痛散外敷治疗气滞血瘀型体表恶性肿瘤伴有癌性疼痛的疗效观察

目的探讨消癥止痛散外敷治疗气滞血瘀型体表恶性肿瘤伴有癌性疼痛的效果。方法选取2022年5月至2023年5月九江市中医医院收治的60例气滞血瘀型体表恶性肿瘤伴有癌性疼痛患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(30例)和观察组(30例)。对照组采用盐酸羟考酮缓释片治疗,观察组在对照组的基础上加用消癥止痛散外敷治疗,两组均连续治疗7 d。比较两组的止痛效果、疼痛程度、爆发痛的次数、气滞血瘀症状评分、羟考酮缓释片日均使用剂量、生活质量和不良反应。结果观察组止痛缓解率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前痛程度、爆发痛的次数、气滞血瘀症状评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后疼痛程度、爆发痛的次数、气滞血瘀症状评分低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后疼痛程度、爆发痛的次数、气滞血瘀症状评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗第1天羟考酮缓释片日均使用剂量比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗第7天羟考酮缓释片日均使用剂量低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗第7天羟考酮缓释片日均使用剂量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组生活质量优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论气滞血瘀型体表恶性肿瘤伴有癌性疼痛患者应用消癥止痛散外敷止痛效果较佳,可减轻盐酸羟考酮缓释片用量,减少爆发性痛发作次数,利于缓解气滞血瘀症状,改善患者生活质量,且安全可靠。

非洲猪瘟的扩散风险点及防控对策

为有效防控非洲猪瘟疫情,降低非洲猪瘟的扩散风险,本文结合非洲猪瘟流行现状及部分国际已发疫情,对非洲猪瘟扩散风险点进行简要分析。分析认为:养殖环节风险点主要是养殖场(户)生物安全水平低及饲喂餐厨剩余物(泔水);流通环节风险点主要存在于生猪及猪肉产品长距离调运、猪肉及其产品销售;屠宰环节关键风险点是私屠滥宰。因此,应严禁泔水及猪源性蛋白饲料产品饲喂生猪,加强生猪养殖场(户)生物安全措施,完善活畜禽长途调运监管,强化生猪屠宰企业管理等。

当前猪病发生特征及综合防控措施

近年来，随着养猪业规模化程度的不断提高，疫病已成为严重危害养猪业的主要因素。正确认识当前猪病的发生和流行特征，树立健康养殖、科学防控疫病的理念，对有效防控当前由于多病原混合或继发感染所引起的日益复杂的猪病具有重要意义。本文将就当前我国猪病的发生特征及综合防控措施做一阐述，仅供参考。

实际生产中化制法无害化处理病死猪的病毒杀灭效果

为评估实际生产应用中化制法无害化处理病死猪尸体杀灭病毒的效果,选取3个应用化制法工艺处理病死猪尸体的规模化猪场,采集无害化处理前和处理后的样品,利用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法和病毒分离培养法,对无害化处理前后的样品进行非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒等9种病毒的核酸检测,通过处理前后病原核酸检出情况的对比,评估该工艺在实际生产应用中病毒杀灭效果。结果显示:化制法处理前病死猪尸体样品中的部分病原可在细胞培养物中检出且可增殖传代,说明存在活病毒;而处理后样品的细胞培养物中均检不出病原核酸,说明病原均被彻底杀灭。结果表明,在实际生产应用中,化制法无害化处理病死猪尸体可彻底杀灭病毒,达到了无害化处理目标。

高致病性猪蓝耳病的发病新特征及综合防控措施

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PPRSV）变异株引起的一种急性高致死性传染病。仔猪发病率可达100％、死亡率可达50％以上．母猪流产率可达30％以上。2006年6月首先在我国的南方部分省市出现．给我国养猪业造成了较大的损失。

鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究

【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。

健脾和胃方对胃癌前病变大鼠NF- κ B信号通路及细胞凋亡的作用

目的探究健脾和胃方对胃癌前病变大鼠可能的作用及机制。方法50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、健脾和胃方低剂量组、健脾和胃方高剂量组。N-甲基-N-硝基-亚硝基胍(N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)与无水乙醇灌胃联合夹尾激怒法建立胃癌前病变大鼠模型。造模成功后以不同剂量的健脾和胃方灌胃,阳性对照组大鼠灌服维甲酸悬浊液。6周后取各组大鼠胃组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察胃黏膜病理变化;流式细胞术法检测胃黏膜细胞凋亡情况;ELISA检测白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;Western blot法检测核因子(nuclear factor,NF)-κB、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)-4、半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2基因相关X蛋白(BCL2-associated X,Bax)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜出血、炎症与糜烂程度增加,IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB、TLR4、Caspase-3、Bax水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组比较,健脾和胃方低、高剂量组大鼠胃黏膜病理变化明显改善,IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB、TLR4、Caspase-3、Bax水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bcl-2水平升高(P<0.05)。结论健脾和胃方对胃癌前病变大鼠具有明显的治疗作用,具体机制可能与通过抑制NF-κB通路激活抑制炎性反应、提高细胞凋亡率有关。

猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、敏感、特异的猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中CSFV E2基因保守区域序列,设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立CSFV实时荧光定量PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了检测。结果表明,本研究建立的CSFV实时荧光定量PCR检测方法在101~106拷贝/μL范围内有很好的线性关系,相关系数为0.999;CSFV细胞培养物出现阳性扩增信号,但ST正常细胞对照和其他8种病原对照未出现扩增,特异性良好;该方法重复性好、敏感性高,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1TCID50/mL;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,与本课题组建立的CSFV Nested RT-PCR检测结果和克隆测序结果一致。本研究成功建立了CSFV实时荧光定量PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测。

重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究

为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。

猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立

目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQPCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。结果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠。结论成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义。

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究

为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）中CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分含量以及CD4^＋/CD8^＋比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3～14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^＋CD4^＋细胞百分含量,降低CD3^＋CD8^＋细胞的百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值;接种后3～7d期间,第2组鸡的CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞含量及CD4^＋/CD8^＋比值与PBS对照组（第1组）相比差异均极显著（P〈0.01）,第3组与第1组相比差异均显著（P〈0.05）。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^＋/CD8^＋比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究

为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。

妊娠合并甲状腺功能亢进98例临床分析

目的分析母体妊娠合并甲状腺功能亢进对母婴的影响及临床处理方法。方法将西安高新医院产科2012年3月~2013年6月收治的妊娠合并甲状腺功能亢进98例孕妇为研究对象,按照治疗方式不同均分为A组和B组（n=49）。A组按照临床常规流程处理,B组给予150~300mg/d丙基硫氧嘧啶（PIU）,口服,对比2组孕妇甲状腺激素水平与产妇分娩方式及产后不良结局。结果 B组腺激素水平与产后不良结局显著优于A组,组间数据比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论妊娠合并甲状腺功能亢进对孕妇及新生儿能够产生多方面不良影响,妊娠期间应该加强检查与防治。同时,早期系统甲亢治疗对降低孕妇及新生儿不良结局有重要作用,应加以重视。

猪白细胞介素-2的原核表达及其生物学活性研究

本研究采用RT-PCR方法自刀豆素(Con A)刺激的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪白细胞介素-2(por-cine interleutin-2,PoIL-2)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白细胞介素-2(rPoIL-2)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用MTT法测定rPoIL-2蛋白促小鼠细胞毒性淋巴样系CTLL-2株细胞增殖活性以评价rPoIL-2的活性。结果表明,成功克隆了rPoIL-2的成熟肽基因,基因全长405 bp,编码134个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子质量大小约为16.5 ku,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白质纯度在96%以上;纯化的rPoIL-2蛋白促小鼠CTLL-2株细胞增殖活性最高值是对照细胞的3倍。本研究成功表达了具有生物学活性的PoIL-2蛋白,为新型基因工程抗病毒制剂和免疫增强剂的开发奠定了基础。

口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。

卫生消毒与现代图书保管的结合运用

对卫生消毒在图书保管中的作用与运用作了相关了解,探讨做好图书保管的措施及其重要性,肯定了卫生消毒在图书保管中的重要作用,认为综合运用卫生消毒能促进现代图书保管的科学性和有效性,进一步为现代图书管理提供良好的基础保障.

猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对检测疑似猪链球菌感染猪临床样品,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。

华蟾酥毒基通过调控circNFIX/miR-577通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究华蟾酥毒基(CnBu)对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响,并探讨其机制是否与调控环状RNA核因子IX(circNFIX)和miR-577表达相关。方法:将MDA-MB-231细胞分为对照(Con)组、CnBu-低剂量(L)组、CnBu-中剂量(M)组、CnBu-高剂量(H)组、si-NC组、si-circNFIX组、pcDNA组、pcDNA-circNFIX组、CnBu+pcDNA组、CnBu+pcDNAcircNFIX组。MTT、Transwell实验分析细胞增殖、迁移和侵袭能力,Westernblot分析Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达。RT-qPCR分析circNFIX、miR-577表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证circNFIX和miR-577的靶向调控关系。结果:CnBu以剂量依赖方式下调Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白和circNFIX表达(P<0.05),上调miR-577表达(P<0.05),减弱MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。miR-577与circNFIX序列直接结合,干扰或过表达circNFIX可显著提高或降低miR-577表达水平(P<0.05)。干扰circNFIX表达显著下调Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05),减弱MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。过表达circNFIX显著减弱CnBu对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:CnBu可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,可能通过下调circNFIX/miR-577通路实现。