甘草养阴汤联合甲氨蝶呤干预老年类风湿关节炎小鼠价值及基于DIA蛋白组学分析的效应机制

目的 探讨老年类风湿关节炎(ERA)小鼠的分泌表型特点及甘草养阴汤联合甲氨蝶呤对ERA小鼠的干预作用和整体效应机制。方法 DBA/1雄性小鼠共72只,随机取10只作为正常组;另取12只建立胶原诱导关节炎(CIA)模型,作为RA组;剩余50只小鼠在CIA模型基础上加D-半乳糖刺激建立ERA模型,将造模成功小鼠随机分为ERA组、甲氨蝶呤组、甘草养阴汤组、甲氨蝶呤+甘草养阴汤组。正常组、RA组、ERA组小鼠给予生理盐水灌胃,每日1次;甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤1 mg/kg灌胃,每周2次;甘草养阴汤组给予甘草养阴汤3.0 g/kg灌胃,每日1次;甲氨蝶呤+甘草养阴汤组给予甲氨蝶呤和甘草养阴汤灌胃,药物用量及方法同甲氨蝶呤组和甘草养阴汤组。各组均灌胃4周。对各组小鼠后肢关节炎病变进行评分,HE染色观察各组踝关节组织水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀、血管翳形成、脂肪沉积情况并进行评分,采用非依赖采集(DIA)蛋白组学技术分析各组小鼠的分泌表型特点。结果 ERA组后肢肿胀更明显,关节炎评分及肢关节水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀评分均明显高于RA组(P均<0.05),血管翳形成及脂肪沉积评分与RA组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);甘草养阴汤组、甲氨蝶呤+甘草养阴汤组关节炎评分及关节水肿、软骨/骨侵蚀、脂肪沉积评分均明显低于ERA组(P均<0.05),甲氨蝶呤组关节炎评分及关节水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀、血管翳形成、脂肪沉积评分与ERA组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。ERA组与RA组比较,上调71个蛋白,下调70个蛋白,主要富集于中性粒细胞胞外陷阱形成、脂质和动脉粥样硬化、鞘脂信号通路等。甲氨蝶呤+甘草养阴汤除了对多种炎症因子的抑制作用,还倾向于对脂质代谢等通路靶点的调节,尤其是上调叶酸合成通路相关靶点。结论 ERA小鼠的代谢改变可能导致更为严重的关节损伤,甘草养阴汤对甲氨蝶呤治疗ERA具有减毒增效作用。

血液穴位注射后小鼠的注射部位发生了什么变化?

目的自体血液穴位注射在临床用于多种各种疾病,但是该疗法影响人体的机制尚不清楚。本研究旨在观察穴位注射血液后穴位区域的组织学变化。方法在小鼠左侧足三里(ST-36)穴位处注射从同种小鼠收集的血液0.1 mL。注射后0、6、12、24、48、72和96 h(每个时间点3只小鼠),收集外周血和注射部位的肌肉组织用于血细胞分类和组织学研究(HE染色)。结果穴位注射治疗后,小鼠外周血白细胞、淋巴细胞和血小板呈一定增加趋势。注射24 h后,穴位注射部位表现为急性炎症反应,注射的血液成分主要被中性粒细胞浸润,并观察到少量单核细胞,而红细胞则逐渐消失。注射后24~96 h,穴位主要表现为慢性炎症反应,单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞浸润逐渐增加;中性粒细胞逐渐减少,局部肌纤维被破坏,纤维组织增生。结论注射到穴位的血液模拟肌肉组织中血肿的吸收过程,引发局部炎症反应以吞噬并清除血液成分,这可能是刺激穴位产生相关治疗效应的基础。

甘草养阴汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究甘草养阴汤对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖和凋亡的影响。方法:用生理盐水(normal saline,NS)和甘草养阴汤(gancao yangyin decoction,GC)对正常SD大鼠进行灌胃获得含药血清,将两组血清分别体外培养RA-FLS。MTT法检测NS、GC组血清对RA-FLS增殖的影响;流式细胞技术检测NS、GC组血清对RA-FLS细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:与NS组比较,干预48 h后GC组RA-FLS细胞增殖率显著降低(P<0.05),72 h时效果更为显著(P<0.001);与NS组比较,GC组RA-FLS细胞凋亡率显著增高(P<0.01),G0/G1期细胞比例显著增高(P<0.001),而G2/M期和S期细胞比例显著降低(P<0.0001,P<0.01)。结论:甘草养阴汤能够抑制RA-FLS细胞增殖,促进其凋亡。