基于网络药理学联合动物实验探究温阳生肌膏治疗糖尿病创面的作用机制

目的从网络药理学角度探讨温阳生肌膏治疗糖尿病创面的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及相关文献筛选温阳生肌膏(WYSJO)活性成分及对应靶点;通过Gene Cards、Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)、Drug Bank、Pharm Gkb和Therapeutic Target(TTD)等数据库检索糖尿病创面的作用靶点;使用Cytoscape 3.9.0绘制出WYSJO活性成分-糖尿病创面靶标网络;应用检索相互作用基因/蛋白质的搜索工具(STRING)平台搭建蛋白互作网络(PPI);应用京都基因与基因组百科全书(KEGG)与基因本体(GO)富集分析WYSJO与糖尿病创面的信号通路;应用Auto Dock 1.5.6对核心成分与靶点进行分子对接;将18只大鼠随机分为对照组、模型组和WYSJO组(n=6),以模型组和WYSJO组制备糖尿病大鼠难治性创面模型。分别在处理第0、5、9、14天时观察创面愈合,苏木素-伊红(HE)染色观察创面组织形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测核心基因表达情况。结果网络药理学筛选出WYSJO药物有效成分76种,药物靶点206个,糖尿病创面疾病靶点3797个,以及WYSJO治疗糖尿病创面作用靶点167个;通过构建WYSJO活性成分-糖尿病创面作用靶标网络,发现槲皮素、大豆苷元、山奈酚、鼠李素、鼠李柠檬素、异长春花苷内酰胺和邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)7个核心靶点。GO富集分析表明温阳生肌膏治疗糖尿病创面可能涉及细胞对脂多糖、细菌来源分子、金属离子、外来刺激、化学应激、营养水平、缺氧及氧化应激等生物过程。KEGG富集分析表明温阳生肌膏治疗糖尿病创面可能涉及高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)信号通路、p53信号通路、白介(IL)-17信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、细胞凋亡、脂质和动脉粥样硬化等相关通路发挥治疗糖尿病创面的作用。动物实验显示WYSJO可显著加快糖尿病创面的愈合速度(P<0.05),减轻炎症反应,促进肉芽组织生长,同时也可下调网络药理学预测的E1A结合蛋白p300(EP300)、Jun激酶(JUN)、骨髓细胞瘤癌基因(MYC)、缺氧诱导因子1A(HIF1A)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、特异性蛋白1(SP1)、肿瘤蛋白p53(TP53)以及雌激素受体1(ESR1)等8个核心基因表达(P<0.05)。结论WYSJO治疗糖尿病创面的作用机制可能与AGE-RAGE、p53、HIF-1等通路密切相关,通过此研究可为WYSJO的药理学研究提供新思路,并为其进一步转化应用提供基础。

细胞外基质及基质金属蛋白酶在糖尿病足溃疡愈合中的研究进展

糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病的严重并发症之一,发病率和病死率均较高,严重危害患者健康。细胞外基质(ECM)组成成分具有止血、抑炎、促增殖、增加弹力等生物学作用,在创面修复过程中发挥强大的支撑和调控效应,是DFU治疗的关键。基质金属蛋白酶(MMP)作为ECM的衍生物质,种类繁多、分工复杂,主要通过降解和重塑ECM调控创面愈合进程,其中MMP-1、MMP-2和MMP-9在DFU中大量表达,导致ECM被过度降解,引发DFU愈合困难,而MMP-8可通过重塑ECM促进DFU愈合。因此,合理调控ECM/MMP平衡可以为DFU的治疗提供新思路。

复方ANBP对小鼠创面组织学变化的实验研究

目的观察中药复方ANBP[由仙鹤草(AgrimoniaEupatoria,A)、藕节(NelumboNuciferaGaertn,N)、乳香(BoswelliaCarteri,B)和蒲黄(PollenTyphaeAngustifoliae,P)组成]对全层皮肤缺损小鼠创面愈合的影响,初步探讨复方ANBP对小鼠皮肤创面愈合的治疗机制。方法将48只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组、ANBP组,每组24只。采用全层打孔器制备小鼠背部全层皮肤缺损模型,每组再随机分为6h、3d、7d、14d4个时间点。造模后空白对照组不做任何处理,ANBP组创面被覆复方ANBP粉末。通过肉眼和HE染色观察创面愈合情况并计算创面愈合率,对数据进行统计学分析。结果(1)造模后3d、7d和14d,与空白对照组相比,ANBP组创伤愈合率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)HE染色结果显示ANBP组表皮舌长度增加、均匀平整,肉芽组织丰富。结论复方ANBP可以明显改善小鼠创面情况,加快小鼠背部皮肤创面愈合速度,提高愈合质量。

复方ANBP启动修复基因Ski双向调节TGF-β/Smad对小鼠创面愈合的影响

目的探讨复方ANBP(由仙鹤草、藕节、乳香、蒲黄组成)促进全层皮肤缺损小鼠愈合的分子机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、ANBP组,每组随机分为6 h、3 d、7 d、14 d 4个时间点亚组,制备小鼠背部全层皮肤缺损模型。造模后空白对照组不做任何处理,ANBP组创面覆盖复方ANBP粉末。用免疫组织化学方法检测组织中转化生长因子(TGF)-β1、Sam和Mad同系物(Smad)2/3、Ski基因的蛋白表达量。结果 TGF-β1、Smad2/3的免疫组化结果显示:空白对照组从造模后6 h开始蛋白表达量逐渐升高,造模后7 d达到峰值,造模后14 d降低;ANBP组从造模后6 h开始蛋白表达量逐渐升高,造模后3 d达到峰值,造模后7~14 d蛋白表达量逐渐降低;与空白对照组相比,造模后3 d,ANBP组蛋白表达量显著增高(P<0.05);造模后14 d,ANBP组蛋白表达量显著降低(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达量除6 h外,其他各时间点差异均具有统计学意义(P<0.05),Smad2/3蛋白表达量差异均具有统计学意义(P<0.05);Ski的免疫组化结果显示:空白对照组从造模后6 h开始蛋白表达量逐渐升高,造模后3 d达到峰值,造模后7~14 d逐渐降低;ANBP组从造模后6 h开始到14 d蛋白表达量逐渐升高。与空白对照组相比,造模后3 d,ANBP组蛋白表达量显著降低(P<0.05);造模后7~14 d,ANBP组蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。结论复方ANBP通过启动关键修复基因Ski双向调节TGF-β/Smad通路,从而促进小鼠背部皮肤创面愈合。

病理科研兴趣小组——低年级医学本科生新学习模式探索

为了促进中医院校低年级西医临床医学专业学生病理学理论知识与科研实践相结合,湖南中医药大学病理学教研室陈丽老师在病理学课程讲授期间,作为科研指导老师创建病理学教研结合新模式——在授课班级内学生以自愿原则报名经面试后组建病理学科研兴趣小组。指导老师在科研指导期间带领学生完成科研活动任务,以申报成功的国自然课题为依托利用业余时间定时开展文献阅读、项目申请、论文撰写及相关实验的学习和讨论。结果表明,新学习模式有利于增强学生对于病理学理论知识的理解与认识,提高学生的科研素养、发散性及逻辑思维能力,并且在平时团队协作学习过程中增强了沟通、表达能力,与老师、同学建立了更为深厚的感情;指导老师也在每次的提问和补充讲解中,教学与语言表达能力不断提高,更对其国自然课题的内容有了进一步的思考,为其提出新的科研课题提供思路,有利于教学相长。实践证明,该种教研结合新模式是行之有效的,具有一定的参考价值,笔者认为值得推广。

“以通为用”与人体通道、物态、系统的关系

"以通为用"作为一个正确指导认识人体的有效方法,不仅对揭示人体的正常结构与功能有意义,更对阐述疾病病因、发生发展与转归有着重要的指导意义。人体的通道、物态、系统在维持其正常结构功能及疾病发生过程中有着颇为重要的作用,由此正确认识"以通为用"与人体通道、物态、系统的关系尤为必要,以求提高临床治疗效果。

线粒体对创面修复的作用研究

线粒体作为能量的提供者,是目前研究的热门话题。在创面修复过程中,从线粒体角度去解决实际问题,为临床治疗创伤提供一个新的思路。线粒体作为细胞有氧代谢的重要部位,在创面修复早期,其损伤会影响炎症反应,在后期线粒体能促进新生毛细血管的生成以及多潜能干细胞分化,同时提供能量。本文在线粒体结构功能的基础上,对线粒体在创面修复的炎症期、增殖期及塑形期的作用作一综述。

积雪草苷对兔耳创伤修复不同时期干预及转化生长因子β1和Smad3免疫组织化学表达的影响

目的观察积雪草苷对兔耳创伤修复不同时期及转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3免疫组织化学表达的影响。方法将24只新西兰白兔按照随机数字表法分为生理盐水1组、生理盐水2组、积雪草苷1组、积雪草苷2组4组,每组6只。积雪草苷干粉制备成1 000 mg/mL的注射液,现备现用。制作兔耳直径1 cm全层皮肤缺损模型,造模后5 d(创伤修复增殖期),生理盐水1组、积雪草苷1组每日8:00、20:00于兔耳创面处分别注射0.9%氯化钠注射液、积雪草苷液,每次0.2 mL,连用15 d。造模后30 d(创伤修复塑形期),生理盐水2组、积雪草苷2组每日8:00、20:00于兔耳创面处分别注射0.9%氯化钠注射液、积雪草苷液,每次0.2 mL,连用15 d。生理盐水1组、积雪草苷1组于造模后0、5、20 d进行拍照做肉眼观察,生理盐水2组、积雪草苷2组于造模后0、30、45 d进行拍照做肉眼观察;生理盐水1组和积雪草苷1组,生理盐水2组和积雪草苷2组分别于造模后20、45 d后处死动物,切取耳创伤面标本,进行免疫组织化学染色。结果与生理盐水1组比较,积雪草苷1组可以明显促进创伤修复,炎性细胞明显减少,可见大量的成纤维细胞和毛细血管形成。积雪草苷2组瘢痕组织增生层明显比生理盐水2组薄,且未见丰富的血管和成纤维细胞,胶原纤维含量降低,排列稀疏。积雪草苷1组TGF-β1、Smad3的表达量均高于生理盐水1组(P<0.05);积雪草苷2组TGF-β1、Smad3的表达量均低于生理盐水2组(P<0.05)。结论积雪草苷在兔耳创伤修复增殖期干预促进瘢痕形成,但在兔耳创伤修复塑形期干预减少瘢痕形成。

科研夏令营-医学本科生科研思维能力培养的新模式

社会的发展必定要求医学的发展,为顺应时代医学人才培养的要求,更好地培养医学本科生的科研思维能力,使学生的科研素养得到进一步的提高,最终达到培养会思考、善于思考的创新型人才的目的,湖南中医药大学开展了暑期科研夏令营,这种利用科研夏令营培养医学本科生科研思维能力的新模式对其它本科医学院校在医学本科生科研素质培养方面具有借鉴作用。